酶解鹿茸肽的制备分离纯化及其抗氧化活性的研究

作     者：高科翔 

作者单位：吉林大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王华

授予年度：2009年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：鹿茸肽 分离纯化 Alcalase酶 抗氧化 

摘      要：鹿茸系鹿科动物梅花鹿(Cervus Nippon Temminck)或马鹿(Cervus elaphus Linnaeus)的雄鹿未骨化密生绒毛的幼角。鹿茸具有多种生物效用,其生物活性与蛋白质结构及氨基酸组成密切相关,作为一种特殊的软骨组织,是一个天然的富含多种活性因子的细胞因子库,在其自体生长过程中,成骨、造血、经生长、纤维细胞、上皮细胞生长同步进行,作为鹿体最活跃的生长点在其骨化之前贮存大量的生长因子,它们是其临床作用的生物化学基础,现代医学研究表明鹿茸具有抗氧化、保护心肌、促生长、增强免疫力、促进神经组织再生修复、促代谢、抗炎、免疫调节、生血、促进皮肤组织及骨折愈合等广泛的药理活性。 本文采用新鲜梅花鹿鹿茸,其含水量81.94%,干物质蛋白含量为64.1%,利用一种工业用碱性蛋白酶Alcalase,在50℃、pH8.0、水解度10%的条件下设计正交试验进行水解,对酶浓度(底物蛋白:酶/g:g)、底物浓度(鹿茸干物质:水/g:g)和反应时间进行优化,采用缓冲溶液保护鹿茸肽活性及硫酸胺分级沉淀法制备鹿茸多肽粗提液,水解液依次经过离心、过滤,然后经Sephadex-G 25凝胶层析柱和制备型高效液相色谱柱分离纯化,得到一分子量在800U之内的小肽,最后进行真空冷冻干燥,得到生物活性鹿茸肽,其蛋白含量为70.45%,并对其组成成分进行了理化分析。我们检测了鹿茸肽的抗氧化性,包括超氧阴离子清除实验、羟自由基清除实验、脂质过氧化实验、DPPH自由基清除实验和还原力实验。结果表明,鹿茸肽在不同检测系统均可表现不同程度的抗氧化能力。