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miR-144-3p参与高蛋氨酸饮食诱导Cbs^(+/-)小鼠的肝细胞自噬

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中国组织工程研究 2024年第8期28卷 1289-1294页

作者：盛思琪谢琳赵翔宇姜怡邓吴凯熊建团杨安宁郝银菊焦运宁夏医科大学基础医学院宁夏医科大学国家卫生健康委代谢性心血管疾病研究重点实验室宁夏医科大学宁夏血管损伤与修复研究重点实验室宁夏回族自治区银川市750004 宁夏医科大学总医院宁夏回族自治区银川市750004

背景:高蛋氨酸饮食可导致Cbs^(+/-)小鼠发生肝损伤,高同型半胱氨酸血症与肝脂肪变性、自身免疫性肝炎、酒精性脂肪肝等多种肝脏相关疾病的发生和进展有关。微小RNA(miRNAs)参与细胞存活、分化和细胞自噬等各种细胞过程,具有重要意义。目... 详细信息

背景:高蛋氨酸饮食可导致Cbs^(+/-)小鼠发生肝损伤,高同型半胱氨酸血症与肝脂肪变性、自身免疫性肝炎、酒精性脂肪肝等多种肝脏相关疾病的发生和进展有关。微小RNA(miRNAs)参与细胞存活、分化和细胞自噬等各种细胞过程,具有重要意义。目的:探讨miR-144-3p在高蛋氨酸饮食诱导Cbs^(+/-)小鼠肝细胞自噬中的关键作用。方法:①选取4周龄体质量相近的雄性胱硫醚β-合成酶基因正常(Cbs^(+/+))小鼠和单基因敲除(Cbs^(+/-))小鼠各10只,均饲以高蛋氨酸饮食,12周后处死,留取肝脏组织。②体外培养人源肝细胞(HL-7702),分为对照组(0μmol/L同型半胱氨酸)、同型半胱氨酸组(100μmol/L同型半胱氨酸)、mimic-NC组(转染mimic-NC)、mimic-NC+同型半胱氨酸组(转染mimic-NC+100μmol/L同型半胱氨酸)、miR-144-3p mimic组(转染miR-144-3p mimic)、miR-144-3p mimic+同型半胱氨酸组(转染miR-144-3p mimic+100μmol/L同型半胱氨酸)、inhibitor-NC组(转染inhibitor-NC)、inhibitor-NC+同型半胱氨酸组(转染inhibitor-NC+100μmol/L同型半胱氨酸)、miR-144-3p inhibitor组(转染miR-144-3p inhibitor)、miR-144-3p inhibitor+同型半胱氨酸组(转染miR-144-3p inhibitor+100μmol/L同型半胱氨酸)。采用荧光定量PCR检测肝组织和肝细胞中miR-144-3p的表达水平;转染miR-144-3p模拟物或抑制剂后,采用荧光定量PCR和Western blot分别检测miR-144-3p的转染效率及其对LC3B和p62蛋白表达的影响;酶联免疫法检测肝细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶和门冬氨酸氨基转移酶的表达情况;Pearson相关性分析肝细胞miR-144-3p表达与肝细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶和门冬氨酸氨基转移酶含量的相关性。结果与结论:①与Cbs^(+/+)组比较,Cbs^(+/-)组小鼠肝组织和同型半胱氨酸组肝细胞中miR-144-3p的表达水平降低(P高(P氨酸氨基转移酶和门冬氨酸氨基转移酶的含量降低(P氨酸氨基转移酶(P氨酸氨基转移酶(P氨酸通过抑制miR-144-3p的表达促进肝细胞的自噬,进而加重肝损伤。

关键词：微小RNA miR-144-3p 同型半胱氨酸细胞自噬肝损伤高蛋氨酸饮食

miR-148a-5p参与了高蛋氨酸饮食诱导ApoE^-/-小鼠的肝细胞凋亡

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中国组织工程研究 2020年第35期24卷 5632-5637页

作者：马芳张辉李桂忠马胜超沈江涌孙磊郝银菊马生贤姜怡邓宁夏医科大学临床医学院宁夏回族自治区银川市750004 宁夏医科大学基础医学院宁夏回族自治区银川市750004 国家卫生健康委代谢性心血管疾病研究重点实验室宁夏回族自治区银川市750004 宁夏血管损伤与修复研究重点实验室宁夏回族自治区银川市750004 宁夏医科大学总医院烧伤整形外科宁夏回族自治区银川市750004 宁夏医科大学药学院宁夏回族自治区银川市750004

背景:高蛋氨酸饮食可以导致ApoE^-/-小鼠发生肝损伤,微小RNA(miRNA)参与细胞存活、分化和细胞凋亡等各种细胞过程,具有重要意义。目的:探讨miR-148a-5p在高蛋氨酸饮食诱导ApoE^-/-小鼠肝细胞凋亡中的作用。方法:12只ApoE^-/-小鼠随机分... 详细信息

背景:高蛋氨酸饮食可以导致ApoE^-/-小鼠发生肝损伤,微小RNA(miRNA)参与细胞存活、分化和细胞凋亡等各种细胞过程,具有重要意义。目的:探讨miR-148a-5p在高蛋氨酸饮食诱导ApoE^-/-小鼠肝细胞凋亡中的作用。方法:12只ApoE^-/-小鼠随机分为2组,每组6只,ApoE^-/-对照组为普通饮食,ApoE^-/-高蛋氨酸组为高蛋氨酸饮食。苏木精-伊红染色观察2组肝组织形态学变化;TUNEL染色观察肝细胞的凋亡情况;Western blot测定Bax、Bcl-2的表达改变;荧光定量PCR检测miR-148a-5p的表达;运用Target Scan靶基因预测软件预测miR-148a-5p的靶基因;双荧光素酶活性实验明确其靶向关系。结果与结论:①与对照组相比,ApoE^-/-高蛋氨酸组肝脏组织肝小叶结构发生明显紊乱,部分细胞呈胞浆疏松化变性,肝细胞凋亡增加,Bax的表达明显上升且Bcl-2的表达显著下降(P高蛋氨酸组miR-148a-5p的表达增加(P高蛋氨酸饮食诱导的ApoE^-/-小鼠肝细胞中,miR-148a-5p通过负调控Bcl-2促进肝细胞凋亡,这可能是造成肝损伤的机制之一。

关键词： miR-148a-5p Bcl-2 高蛋氨酸饮食肝细胞凋亡动物

妊娠期和哺乳期母鼠高蛋氨酸饮食对子代大鼠的影响

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中国妇幼保健 2014年第32期29卷 5310-5312页

作者：韩炳娟邹卉韩炳超姜月华山东省济南市妇幼保健院 250001 山东中医药大学附属医院

目的:观察妊娠期和哺乳期母鼠在长期高蛋氨酸饮食情况下,对子代大鼠围生期及离乳后子代大鼠心血管的影响。方法:选取SPF级Wistar孕鼠10只,随机分为观察组和对照组,每组各5只。观察组以添加1.8%蛋氨酸的标准AIN-93饲料喂食,直至产后第25... 详细信息

目的:观察妊娠期和哺乳期母鼠在长期高蛋氨酸饮食情况下,对子代大鼠围生期及离乳后子代大鼠心血管的影响。方法:选取SPF级Wistar孕鼠10只,随机分为观察组和对照组,每组各5只。观察组以添加1.8%蛋氨酸的标准AIN-93饲料喂食,直至产后第25天,对照组以普通饲料喂食。记录大鼠分娩的仔鼠数量和体重;子代大鼠出生第25天离乳,次日记录大鼠肢体导联心电图,计算心率后处死,取血、心脏、主动脉,动物血球仪检测血常规,酶联免疫吸附法检测血清同型半胱氨酸(Hcy)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、内皮型一氧化氮合酶(e NOS)和血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)水平,HE染色观察心脏、主动脉的病理改变。结果:妊娠期和哺乳期母鼠在长期高蛋氨酸饮食后,孕鼠产仔数量减少,并有分娩低体重鼠的倾向,子代大鼠心电图正常,但红细胞压积、血小板数量、血清Hcy、AngⅡ、VCAM-1水平均明显升高,子代大鼠心脏、主动脉呈现轻度增生、肥厚现象。结论:妊娠期和哺乳期母鼠在长期进食高蛋氨酸后,可导致产仔数量减少,同时子代发生心脑血管意外的风险显著高于正常大鼠。

关键词：妊娠期哺乳期高蛋氨酸饮食同型半胱氨酸

金钗石斛生物碱对高蛋氨酸诱导的学习记忆损伤的保护作用及机制

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金钗石斛生物碱对高蛋氨酸诱导的学习记忆损伤的保护作用及机制

作者：皮婷婷遵义医科大学

学位级别：硕士

目的:探究金钗石斛生物碱(Dendrobium nobile Lindle.alkaloids,DNLA)对高蛋氨酸饮食诱导的小鼠学习记忆损伤的保护作用及机制。方法:8周龄雄性C57 BL/6J小鼠适应性喂养2周后随机分空白对照组、DNLA20对照组、Met组、DNLA10组和DNLA20组... 详细信息

目的:探究金钗石斛生物碱(Dendrobium nobile Lindle.alkaloids,DNLA)对高蛋氨酸饮食诱导的小鼠学习记忆损伤的保护作用及机制。方法:8周龄雄性C57 BL/6J小鼠适应性喂养2周后随机分空白对照组、DNLA20对照组、Met组、DNLA10组和DNLA20组,其中空白对照组及空白给药组给予正常饮食,其余各组给予2%的蛋氨酸(methionine,Met)饮食。饮食11周后,DNLA20对照组(20 mg/kg)、DNLA10(10 mg/kg)组和DNLA20(20 mg/kg)组给予DNLA灌胃3个月,其余各组给予同体积1%Tween80灌胃。采用筑巢实验,Y迷宫实验,Morris水迷宫实验,检测小鼠社会行为和学习记忆能力。行为学实验结束后,处死小鼠(眼眶采血)。HE和Nissl染色法用于检测小鼠海马齿状回区(dentate gyrus,DG)和皮质区神经元的损伤情况;免疫荧光染色法用于检测海马DG区和皮质区中5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine,5-m C),β淀粉样蛋白1-40(β-amyloid 1-40,Aβ)和β淀粉样蛋白1-42(β-amyloid 1-42,Aβ)的水平;ELISA用于检测血清中同型半胱氨酸(homocystein,Hcy)、Aβ和肝脏中S-腺苷蛋氨酸(S-adenosine methionine,SAM)、S-腺苷同型半胱氨酸(S-adenosine homocysteine,SAH)的水平;蛋白免疫印迹法(Western blot,WB)用于检测皮质和海马中Aβ生成相关蛋白:淀粉样蛋白前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)、早老素1(presenilin-1,PS1)和β-分泌酶1(β-secretase 1,BACE1)的表达水平。Aβ代谢相关蛋白:胰岛素降解酶(Insulin-degrading enzyme,IDE)和脑啡肽酶(neprilysin,NEP)的表达水平;Aβ和Aβ的水平。DNA甲基化酶(DNA methyltransferases,DNMTs)相关蛋白:DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase1,DNMT1)、DNA甲基转移酶3a(DNA methyltransferase3a,DNMT3a)和DNA甲基转移酶3b(DNA methyltransferase3b,DNMT3b)的表达水平;甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测APP、PS1、BACE1、NEP基因胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤(cytosine-phosphate-guanine,CPG)岛是否存在甲基化;Methyl Target法检测APP、PS1、BACE1、NEP基因CPG岛甲基化水平。结果:1.行为测试:(1)筑巢实验:与空白对照组相比,Met组小鼠筑巢评分有降低的趋势(p>0.05),DNLA治疗后,Met组小鼠筑巢评分有增加的趋势(p>0.05);(2)Y迷宫实验:与空白对照组相比,Met组小鼠正确交替率有下降的趋势(p>0.05),DNLA治疗后Met组小鼠正确交替率有增加的趋势(p>0.05);(3)Morris水迷宫实验:与空白对照组相比,Met组小鼠第四天的逃避潜伏期明显增加(p0.05)和皮层区(p0.05)Aβ水平;海马DG区(p0.05)、SAH(p>0.05)、SAM/SAH(p0.0

关键词：高蛋氨酸饮食学习记忆损伤 DNA甲基化金钗石斛生物碱

同方学位论文库评论

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高蛋氨酸饮食对大鼠生长及氨基酸代谢的影响

中国临床营养杂志 2002年第4期10卷 248-251页

作者：陈小莉蔡东联李燕胡同杰第二军医大学附属长海医院营养科上海200433

目的研究高蛋氨酸饮食对大鼠生长及蛋白质、氨基酸代谢的影响。方法SD大鼠20只,随机分为高蛋氨酸组(M组)和对照组(C组)。M组每日给予含3%蛋氨酸的饲料,定期检测体重,分别在4、8、12周检测血清氨基酸、蛋白质、脂肪含量。结果与C组相比,... 详细信息

目的研究高蛋氨酸饮食对大鼠生长及蛋白质、氨基酸代谢的影响。方法SD大鼠20只,随机分为高蛋氨酸组(M组)和对照组(C组)。M组每日给予含3%蛋氨酸的饲料,定期检测体重,分别在4、8、12周检测血清氨基酸、蛋白质、脂肪含量。结果与C组相比,M组大鼠体重、血清白蛋白偏低,血清蛋氨酸、同型半胱氨酸、甘油三酯升高。结论高蛋氨酸饮食抑制大鼠生长,影响血清脂肪、蛋白质和氨基酸含量。

关键词：高蛋氨酸饮食大鼠生长氨基酸代谢影响同型半胱氨酸脂肪蛋白质

血浆同型半胱氨酸水平升高促进小鼠动脉粥样硬化的研究

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解剖学研究 2016年第3期38卷 161-164页

作者：王仁庆王意琴李伟煊张选红李红宇谭红梅中山大学中山医学院病理生理学教研室广东广州510080

目的本研究通过喂饲高蛋氨酸合并高脂饲料使小鼠血浆Hcy水平升高,同时诱发动脉粥样硬化病变,观察血浆同型半胱氨酸水平升高对动脉粥样硬化发生的促进作用。方法载脂蛋白E基因敲除(apo E-/-)小鼠随机分为对照组、高脂饮食组及高脂合并高... 详细信息

目的本研究通过喂饲高蛋氨酸合并高脂饲料使小鼠血浆Hcy水平升高,同时诱发动脉粥样硬化病变,观察血浆同型半胱氨酸水平升高对动脉粥样硬化发生的促进作用。方法载脂蛋白E基因敲除(apo E-/-)小鼠随机分为对照组、高脂饮食组及高脂合并高蛋氨酸饮食组。高脂饮食组及高脂合并高蛋氨酸饮食组小鼠从第8周开始连续喂食相应的饲料10周,对照组喂饲普通饲料。实验结束时静脉取血离心后,取血浆检测同型半胱氨酸水平;同时取心脏上半部分连同主动脉根部5 mm,OCT冰冻切片包埋胶包埋后,切取主动脉瓣膜的冰冻切片并进行油红染色、正置显微镜连接数码相机照相后,采用Image Plus软件定量分析斑块的面积。将胸、腹主动脉(主动脉根部至肾动脉分叉处)分离干净、剪下并沿长轴剪开,进行苏丹Ⅵ染色、照相后,体视显微镜连接数码相机照相后,采用Image Plus软件定量分析斑块的面积、整个血管面积及病变所占比例。结果高脂合并高蛋氨酸饮食组血浆同型半胱氨酸水平显著高于对照组和高脂饮食组。高脂饮食组及高脂合并高蛋氨酸饮食组主动脉瓣膜及胸腹主动脉斑块面积均显著高于对照组,且高脂合并高蛋氨酸饮食组斑块面积显著高于高脂饮食组,表明该组动脉粥样硬化程度较更高脂饮食组更严重。结论高脂饮食可诱发动脉粥样硬化。高蛋氨酸饮食可导致血浆同型半胱氨酸水平升高,并进一步促进动脉粥样硬化的发生。

关键词：动脉粥样硬化同型半胱氨酸高蛋氨酸饮食高脂饮食