检索结果-南通市图书馆

作者：张娇重庆医科大学

学位级别：硕士

研究背景及目的糖尿病肾脏病（DKD）系常见的糖尿病微血管并发症,也是导致终末期肾衰的主要原因之一。尽管多因素的综合干预减少了DKD的发生和发展,但是DKD的剩留风险仍然很高。更为可怕的是既往高血糖患者,即使后期血糖趋于达标,但DKD... 详细信息

研究背景及目的糖尿病肾脏病（DKD）系常见的糖尿病微血管并发症,也是导致终末期肾衰的主要原因之一。尽管多因素的综合干预减少了DKD的发生和发展,但是DKD的剩留风险仍然很高。更为可怕的是既往高血糖患者,即使后期血糖趋于达标,但DKD仍然持续进展,此称为“高糖记忆”,但其机制尚未完全阐明。近年来,足细胞作为肾小球滤过屏障的重要组成部分,发现高糖环境可引起足细胞损伤,且可向间质细胞转化（EMT）,进而在DKD中的作用越来越受到重视。必须看到,对上述病理生理过程,既往的研究往往从已知的信号通路入手,难以避免主观性。为此,本文拟以小鼠足细胞为研究对象,体外模拟高糖记忆环境,采用高通量的转录组测序技术,探讨该模型下足细胞向间质细胞转化的新的靶分子。研究方法1.分组培养小鼠足细胞:正糖组（NG,5.5mmol/L D-葡萄糖×48h）,高糖组（HG,30mmol/L D-葡萄糖×48h）,记忆组（MG,30mmol/L D-葡萄糖×48h+5.5mmol/L D-葡萄糖×48h）,渗透压组（OSM,5.5mmol/L D-葡萄糖+24.5mmol/L甘露醇×48h）。免疫印迹及免疫荧光检测各组足细胞的EMT指标即蛋白nephrin和α-SMA的表达情况。*** HiSeq 2000进行NG、HG和MG的mRNA测序,并进行差异表达基因的基因本体（GO）和KEGG pathway富集分析。3.最后利用实时荧光定量PCR技术对所选的差异表达基因进行了初步验证。结果1.与正糖组相比,免疫印迹和免疫荧光均显示,高糖可诱导足细胞nephrin表达下调,α-SMA表达上调,即使后续正糖培养,上述异常仍持续存在。***测序（RNA-Seq）结果显示,高糖组和正糖组间存在194个基因差异表达,其中119个上调,75个下调。而记忆组与正糖组间则有532个基因差异表达,包含316个上调基因,216个下调基因。进一步比对上述差异基因,发现有108个基因（35个上调,73个下调）在高糖组和记忆组存在相似的表达规律。然后,对共有差异表达基因进行了数据挖掘分析:GO分析显示10条GO terms有显著性富集意义,KEGG pathway分析显示10条pathways有显著性富集意义。最后,分析发现Smad9,Id2,Snai1,Mapkapk3,Igf1,Fgf22,Lama1和Zfhx3这8个基因可能在足细胞EMT中发生了显著变化。3.实时荧光定量PCR验证了上述差异基因,结果发现除Id2验证结果无统计差异外,其余的靶基因均与测序结果相一致。结论1.高糖可诱导足细胞EMT,且存在“记忆现象”。2.在该模型中采用转录组测序发现几个新的靶分子,其中Smad9、Snai1和Mapkapk3表达上调,Igf1、Fgf22、Lama1和Zfhx3的表达下调,且其机制可能与TGF-β信号通路、黏着斑信号通路,Rap1信号通路和干细胞的多能调节等信号通路潜在相关。

关键词：高糖上皮间质转化高糖记忆转录组测序足细胞

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保肾方治疗气阴两虚、肾络瘀阻证糖尿病肾病Ⅳ期的随机对照研究

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中国实验方剂学杂志 2024年

作者：邱依婷洪双双刘芷秋孙欣如王悦芬刘梦超赵文景首都医科大学附属北京中医医院张炳厚全国名中医传承工作室

目的：评价保肾方治疗气阴两虚、肾络瘀阻证糖尿病肾病Ⅳ期（DN Ⅳ期）的临床疗效及安全性，探究其延缓肾功能进展的作用机制。方法：采用随机、对照、双盲、多中心临床试验设计，将94例气阴两虚、肾络瘀阻证DN Ⅳ期患者随机分为保肾方... 详细信息

目的：评价保肾方治疗气阴两虚、肾络瘀阻证糖尿病肾病Ⅳ期（DN Ⅳ期）的临床疗效及安全性，探究其延缓肾功能进展的作用机制。方法：采用随机、对照、双盲、多中心临床试验设计，将94例气阴两虚、肾络瘀阻证DN Ⅳ期患者随机分为保肾方组和对照组，每组各47例，疗程12周。主要疗效指标为肾功能相关指标（UACR、24-hUTP、SCr、eGFR），次要疗效指标为高糖记忆、足细胞上皮间质转分化相关指标及中医证候评分。结果：经12周治疗，保肾方组治疗后血清矫正IgAGEs、血清RAGE较治疗前呈明显下降（P0.05）。保肾方组Scr、UACR、24h-UTP、血清CTGF、血清COL-Ⅳ、尿FSP-1明显低于对照组（P高糖记忆、足细胞上皮间质转分化相关。

关键词：糖尿病肾病保肾方高糖记忆足细胞上皮间质转分化随机对照试验 AGEs RAGE

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蛋白激酶Cβ2在不同血糖模式致人内皮细胞损伤中的作用

蛋白激酶Cβ2在不同血糖模式致人内皮细胞损伤中的作用

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作者：林雪波重庆医科大学

学位级别：硕士

目的研究蛋白激酶C(PKC)β2、PPARα在高糖诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)表达血管内皮生长因子(VEGF)、血管细胞粘附分子1(VCAM-1)mRNA中的作用及相互关系。方法将培养的HUVECs分为以下8组:正常糖(NG,5 mmol/L D-葡萄糖)组、高糖(HG,25 ... 详细信息

目的研究蛋白激酶C(PKC)β2、PPARα在高糖诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)表达血管内皮生长因子(VEGF)、血管细胞粘附分子1(VCAM-1)mRNA中的作用及相互关系。方法将培养的HUVECs分为以下8组:正常糖(NG,5 mmol/L D-葡萄糖)组、高糖(HG,25 mmol/L D-葡萄糖)组、渗透压对照组(L,NG + 20 mmol/L L-葡萄糖)组、正常糖空载体转染(NN,NG + Ad5-null)组、高糖PKCβ2转染(HB,HG+Ad5-PKCβ2)组、高糖+非诺贝特组(HF,HG + 40μmol/L非诺贝特)组、高糖PKCβ2转染+非诺贝特(HBF,HB + 40μmol/L非诺贝特)组,以上各组细胞均培养6天。另高糖孵育细胞6天后再与非诺贝特共培养20min作为HF20组。以RT-PCR检测VEGF、VCAM-1 mRNA的表达水平,用Western印迹法测定PPARα蛋白表达,采用激光共聚焦检测PKCβ2蛋白的表达和转位。结果(1)HG组VEGF、VCAM-1 mRNA表达增加,分别为NG组的1.91倍和1.56倍(P值均高糖通过诱导HUVECs PKCβ2核转位激活,进而调控PPARα表达,增加VEGF、VCAM-1 mRNA的表达。第二部分蛋白激酶Cβ2-活性氧交互环介导高糖致人内皮细胞损伤记忆效应目的以人脐静脉内皮细胞(HUVECs)作为体外模拟高血糖记忆的研究对象,观察蛋白激酶C(PKC)β2、活性氧(ROS)对其表达血管内皮生长因子(VEGF)、血管细胞粘附分子1(VCAM-1)mRNA的影响,并探讨PKCβ2、ROS在其中可能的交互作用。方法将培养的HUVECs分为以下5组:正常糖(NG,5 mmol/L D-葡萄糖×3周)组、高糖(HG,25 mmol/L D-葡萄糖×3周)组、记忆(M,25 mmol/L D-葡萄糖×2周+5 mmol/L D-葡萄糖×1周)组、记忆PKCβ2转染(MB,25 mmol/L D-葡萄糖×2周+5 mmol/L D-葡萄糖×1周+ Ad5-PKCβ2)组、记忆+α-硫辛酸(MA,25 mmol/L D-葡萄糖×2周+5 mmol/L D-葡萄糖×1周+62.5μmol/Lα-硫辛酸)组。以RT-PCR法检测VEGF、VCAM-1 mRNA表达水平,用荧光显微镜和荧光酶标仪测定ROS水平,采用激光共聚焦检测PKCβ2蛋白的表达和转位。结果(1)HG组和M组VEGF、VCAM-1 mRNA表达增加,分别为NG组的1.76倍、1.35倍和1.69倍、1.43倍(P值均高糖记忆效应,PKCβ2-ROS交互环可能介导了这个效应的发生。第三部分高糖波动激活蛋白激酶Cβ2损伤人内皮细胞及二甲双胍的干预作用目的观察波动性高糖与持续性高糖对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管内皮生长因子(VEGF)、血管细胞粘附分子1(VCAM-1)mRNA表达及活性氧(ROS)水平的

关键词：蛋白激酶Cβ2 过氧化物酶体增殖物激活受体α 人脐静脉内皮细胞高糖糖尿病视网膜病变蛋白激酶Cβ2 活性氧人脐静脉内皮细胞血糖高糖记忆蛋白激酶Cβ2 血糖波动人脐静脉内皮细胞二甲双胍

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