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高特异性σ2R/TMEM97配体FEM-1689可减轻神经病理性疼痛并抑制整合应激反应

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中国疼痛医学杂志 2024年第3期30卷 161-165页

作者：龙沙沙(译) 韩清见(校) 复旦大学脑科学研究院

在药理学界,σ2受体(σ2R)早在30多年前就被描述过,但其分子特征仍模糊不清,直到最近才被确认为跨膜蛋白97 (TMEM97)。经研究证明σ_(2)R/TMEM97配体可减轻小鼠神经病理性疼痛模型的机械超敏反应,其最大抗痛作用的时间为给药后24 h。该... 详细信息

在药理学界,σ2受体(σ2R)早在30多年前就被描述过,但其分子特征仍模糊不清,直到最近才被确认为跨膜蛋白97 (TMEM97)。经研究证明σ_(2)R/TMEM97配体可减轻小鼠神经病理性疼痛模型的机械超敏反应,其最大抗痛作用的时间为给药后24 h。该研究试图通过解决2个关键问题来了解其抗神经病理性疼痛效应:σ_(2)R/TMEM97化合物是否通过受体选择性地发挥作用,以及它们对痛觉神经元的下游机制是什么?该研究使用了一种Tmem97全身基因敲除小鼠,发现σ_(2)R/TMEM97结合化合物FEM-1689,需要该基因才能在小鼠神经损伤模型中产生抗痛作用。利用小鼠背根神经节原代神经元证明,FEM-1689能抑制整合应激反应(ISR),并通过σ_(2)R/TMEM97特异性作用促进神经元生长。随后,该研究扩展了其临床转化价值,证明FEM-1689可降低人类感觉神经元中的整合应激反应(ISR)和p-eIF2α水平,并可减轻甲基乙二醛对ISR的致病作用。同时,研究还证明了σ_(2)R/TMEM97在人类痛觉感受器和卫星胶质细胞中均有表达。这些结果证实了σ_(2)R/TMEM97有希望成为治疗神经病理性疼痛的靶点。

关键词：抗痛作用特异性作用受体选择性痛觉感受器甲基乙二醛神经病理性疼痛痛觉神经高特异性

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蕲蛇及其混淆品高特异性PCR鉴别

药物分析杂志 2006年第2期26卷 152-155页

作者：唐晓晶冯成强黄璐琦钱忠直崔光红张继中国中医研究院中药研究所北京100700 中国国家药典委员会北京100061 中国药品生物制品检定所北京100050

目的:建立一种准确、简便的蕲蛇药材 DNA 分子标记鉴别方法。方法:用 Cyt b 通用引物对蕲蛇及7种常见混淆品 PCR扩增后进行测序,依其序列间差异设计一对专用于中药材蕲蛇的鉴别引物 HQSL-1和 HQSH-1,用不同的复性温度 PCR 扩增,确立特... 详细信息

目的:建立一种准确、简便的蕲蛇药材 DNA 分子标记鉴别方法。方法:用 Cyt b 通用引物对蕲蛇及7种常见混淆品 PCR扩增后进行测序,依其序列间差异设计一对专用于中药材蕲蛇的鉴别引物 HQSL-1和 HQSH-1,用不同的复性温度 PCR 扩增,确立特异性反应条件。探讨适合中药材动物药的分子标记种类。结果:PCR 扩增结果是在50℃复性温度下,正品蕲蛇均得到约220bp 的扩增带,而混淆品在同样的条件下无扩增带。结论:所设计的鉴别引物对正品蕲蛇有高度的特异性。PCR 方法重复性高,同种不同个体间的种内差异对鉴定结果不会有影响。本方法简单、准确、快速。

关键词：蕲蛇高特异性 PCR鉴别

电鳐电器官膜上的高特异性、低亲和力TCP结合部位

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神经解剖学杂志 2002年第4期18卷 286-292页

作者：郭崇志池木根孙曼霁军事医学科学院毒物药物研究所北京100850

本研究对电鳐电器官中的膜受体与神经性毒剂和重活化剂间的作用进行了探讨。发现在电鳐电器官中有一个高特异性、低亲和力的 2 -噻吩基 -哌啶基 -1,1-环己烷 ( TCP)结合位点 ,这个结合位点具有可饱和性。 TCP和苯环利啶 ( PCP)为同类物 ... 详细信息

本研究对电鳐电器官中的膜受体与神经性毒剂和重活化剂间的作用进行了探讨。发现在电鳐电器官中有一个高特异性、低亲和力的 2 -噻吩基 -哌啶基 -1,1-环己烷 ( TCP)结合位点 ,这个结合位点具有可饱和性。 TCP和苯环利啶 ( PCP)为同类物 ,它们作用于 TCP/ PCP同一位点。 [3H] TCP结合的 Bmax=1.16pmol/ mg protein,KD=16.13nmol/ L。有机磷毒剂能竞争性地抑制标记化合物 [3H] TCP与 TCP结合位点的结合 ,终浓度 10 - 3mol/ L的 Vx,梭曼 ,沙林及塔崩分别可产生 81% ,48% ,41%及38%的抑制。而膦酰化乙酰胆碱脂酶的四种重活化剂 HI-6、LuH6 、2 -PAM及 TMB4也对 [3H] TCP与 TCP受体的结合产生5 3%、48%、30 %及 30

关键词：电鳐电器官膜上高特异性低亲和力 TCP结合部位受体神经性毒剂

黄曲霉毒素及其前体杂色曲霉毒素高灵敏高特异性单克隆抗体研制

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黄曲霉毒素及其前体杂色曲霉毒素高灵敏高特异性单克隆抗体研制

作者：李敏中国农业科学院

学位级别：硕士

随着经济的快速发展，生活质量的不断改善，真菌毒素污染等对农产品及食品安全产生的影响已成为近几年以来政府重视、社会关注、世界瞩目的热点问题。其中黄曲霉毒素是威胁农产品及食品安全的毒性最强的一类真菌毒素，黄曲霉毒素及其生... 详细信息

随着经济的快速发展，生活质量的不断改善，真菌毒素污染等对农产品及食品安全产生的影响已成为近几年以来政府重视、社会关注、世界瞩目的热点问题。其中黄曲霉毒素是威胁农产品及食品安全的毒性最强的一类真菌毒素，黄曲霉毒素及其生物合成前体物杂色曲霉毒素的污染，不仅严重威胁人民的身体健康和生命安全，而且对我国的经济贸易有巨大的负面影响。因此，研究建立准确、灵敏、便捷的黄曲霉毒素和杂色曲霉毒素免疫分析技术势在必行。抗体是免疫分析的关键核心试剂，靶标免疫分析灵敏度直接取决于其特异性抗体的特性。本课题组前期研制出了居国际领先水平的系列黄曲霉毒素单克隆抗体，其中黄曲霉毒素B1和黄曲霉毒素M1单克隆抗体与国内外抗体同比特异性最高。然而，黄曲霉毒素B1迄今特异性最强的单克隆抗体3G1仍与黄曲霉毒素B2有6.4%的交叉反应，且灵敏度有待大幅度提高;黄曲霉毒素M1迄今特异性最强的单克隆抗体2C9灵敏度仍有待提高。杂色曲霉毒素作为黄曲霉毒素的合成前体物，制备抗杂色曲霉毒素的单克隆抗体，可将其作为一种黄曲霉毒素前体物通用抗体探明黄曲霉毒素发生积累标志分子，从而为风险评估和污染防控提供理论依据，然而，国内外杂色曲霉毒素抗体研制方面鲜有报道。因此，研制同时具备高灵敏度和高特异性的黄曲霉毒素及其前体杂色曲霉毒素单克隆抗体，研发基于该抗体的免疫快速检测技术和产品，对于农产品质量安全风险评估及预警，保障人民的农产品、食品消费安全，促进农业产业的可持续发展，打破贸易技术瓶颈均具有重要的意义。针对上述黄曲霉毒素及其前体杂色曲霉毒素高灵敏高特异性抗体缺乏的关键性技术难题，本论文的主要研究内容和创新点如下：1.选育出黄曲霉毒素B1抗体杂交瘤细胞株1B5等，研制出高灵敏高特异性黄曲霉毒素B1单克隆抗体，灵敏度提高了100倍以上。制备高质量抗体的关键是制备高质量的人工抗原，人工抗原制备最关键的是半抗原结构的设计，本研究参考Christian Cervin所述方法，并在此基础上进行改进，合成了一种新的黄曲霉毒素完全抗原AFB2-GA-BSA;同时，按照经典肟化方法合成了AFB1-BSA。AFB2-GA-BSA按传统免疫剂量（50μg/次）免疫小鼠，AFB1-BSA按照加大剂量(150μg/次)免疫小鼠，均通过细胞融合、半固体培养基培养、两步梯度法筛选，最终，利用加大剂量的AFB1-BSA免疫小鼠，选育出了4株性能良好的单克隆细胞株，分别是1F11、2F12、2C7、1B5。采用间接竞争ELISA测定系列抗体的灵敏度，并计算交叉反应率，抗体针对黄曲霉毒素B1反应灵敏度高，与B2，G1，G2的几乎不存在交叉反应。并且以灵敏度和特异性为综合分析点，与国内外同类抗体对比后可以发现，1B5是迄今最好的针对黄曲霉毒素B1的单克隆抗体。以单克隆抗体1B5为基础，研究建立了AFB1间接竞争酶联免疫吸附分析技术（Enzyme-linkedimmunosorbent assay, ELISA）。其中包被抗原AFB2-GA-BSA的浓度为0.0625μg/mL，1B5单克隆抗体稀释度为1:20000。并对封闭试剂、pH值、盐离子浓度等理化参数进行了优化。2.选育出黄曲霉毒素M1抗体杂交瘤细胞株LM13等，研制出高灵敏高特异性黄曲霉毒素M1单克隆抗体，灵敏度均提高了2倍以上。为获得更高灵敏度，高特异性AFM1抗体，在前期基础上，加大了免疫剂量，延长了免疫周期。通过细胞融合技术，半固体培养基基，两步梯度法筛选最终获得9株抗AFM1单克隆细胞株，分别命名为LM47、LM15、LM16、LM54、LM13、LM32、LM44、LM48、LM46，采用间接竞争ELISA对上述纯化抗体进行灵敏度检测，并计算交叉反应率，结果显示，所得抗体灵敏度均比2C9抗体提高2倍以上，大部分抗体与AFB1，AFB2，AFG1，AFG2交叉反应较低。以灵敏度最高的单克隆抗体LM13为基础，研究建立了AFM1间接竞争ELISA方法。其中包被抗原AFM1-BSA的浓度为0.0625μg/mL，LM13单克隆抗体稀释度为1:120000。并对封闭试剂、pH值、盐离子浓度等理化参数进行了优化。3.选育出能稳定分泌抗杂色曲霉毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株ST3等，研制出高灵敏高特异性杂色曲霉毒素单克隆抗体。本研究通过打开ST分子结构中双呋喃环的双键与蛋白实现偶联，并将ST人工抗原进行紫外扫描，结果表明其特征吸收峰与BSA和ST的特征吸收峰有明显差异，BSA与ST成功偶联。利用新合成的ST完全抗原免疫小鼠，通过细胞融合、半固体培养基培养、两步梯度法筛选，最终筛选得到3株性能良好的单克隆细胞株，分别是ST3，ST4，ST6。采用间接竞争ELISA测定系列抗体的灵敏度，并计算交叉反应率，灵敏度均很高，且不与AFB

关键词：黄曲霉毒素B1 黄曲霉毒素M1 杂色曲霉毒素高灵敏度高特异性单克隆抗体酶联免疫吸附测定(ELISA)

高纯度人血红蛋白及高特异性抗人血红蛋白单克隆抗体的制备

同方学位论文库评论

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同方学位论文库

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广西医科大学学报 2015年第3期32卷 361-364页

作者：孙菁李珏燕陈智平张成林蔡豪斌广西医科大学公共卫生学院南宁530021 桂林英美特生物技术有限公司桂林541001 桂林师范高等专科学校化学药学系桂林541001

目的:获得高纯度的人血红蛋白(Hb)抗原,并用其免疫小鼠,筛选获得高特异性抗人血红蛋白单克隆抗体(mAb-Hb),为建立高灵敏度、高特异性人粪便潜血免疫检测法提供关键试剂。方法:选择CM-Sepharose Fast Flow(CM50)阳离子柱进行分离纯化获... 详细信息

目的:获得高纯度的人血红蛋白(Hb)抗原,并用其免疫小鼠,筛选获得高特异性抗人血红蛋白单克隆抗体(mAb-Hb),为建立高灵敏度、高特异性人粪便潜血免疫检测法提供关键试剂。方法:选择CM-Sepharose Fast Flow(CM50)阳离子柱进行分离纯化获得高纯度Hb,进而用其免疫小鼠,经融合制备获得了11株可特异性分泌mAb-Hb的杂交瘤细胞。获得的11株mAb-Hb用双抗夹心方法竞争配对,及与其他实验动物Hb进行交叉反应来筛选检测mAb-Hb的特异性。结果:获得的11株mAb-Hb经双抗夹心法进行竞争配对及与其他实验动物Hb进行交叉反应,得到7E12、1H7两株高特异性的mAb-Hb,且7E12和1H7、1D11、6C4配对效果较好。结论:用此方法获得了配对效果较好的mAb-Hb,可用于纯化Hb抗原的鉴定;筛选获得的高特异性mAb-Hb,可进一步应用于高灵敏度、高特异性免疫法检测粪便潜血(FOB)。

关键词：血红蛋白纯化血红蛋白单克隆抗体双抗夹心法高特异性

EPCA-2:前列腺癌高特异性血清肿瘤标志物

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临床泌尿外科杂志 2007年第10期22卷 799-800页

作者：乔勇（译）徐月敏（校）上海交通大学附属第六人民医院泌尿外科上海200233

前列腺特异抗原(PSA)的发现对于前列腺癌的早期诊断具有里程碑意义.PSA筛选的广泛应用使转移阶段的前列腺癌、早期浸润前列腺癌获得了有效的治疗,并降低了疾病的死亡率.

关键词：血清肿瘤标志物前列腺癌高特异性前列腺特异抗原细胞核改变 PSA 早期诊断早期浸润

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一种高特异性的改良降落PCR(英文)

生命科学研究 2002年第4期6卷 314-317页

作者：张贵星袁保梅许培荣王建民薛乐勋郑州大学医学院生物工程实验室中国河南郑州450052

为提高基因组DNA中的基因PCR检出的特异性,设计了一种改良的降落PCR程序,并分别用TaqDNA聚合酶及高保真PfuDNA聚合酶进行实验.自盐藻Dunaliellabardawil中提取基因组DNA作为PCR模板,使用TaqDNA聚合酶及PfuDNA聚合酶,运用普通PCR和降落PC... 详细信息

为提高基因组DNA中的基因PCR检出的特异性,设计了一种改良的降落PCR程序,并分别用TaqDNA聚合酶及高保真PfuDNA聚合酶进行实验.自盐藻Dunaliellabardawil中提取基因组DNA作为PCR模板,使用TaqDNA聚合酶及PfuDNA聚合酶,运用普通PCR和降落PCR程序,扩增胡萝卜素生物合成相关基因(cbr)上游启动子序列,并电泳比较PCR扩增产物的特异性.结果显示,使用普通Taq酶PCR,普通PCR程序产生200bp,500bp和1272bp长的三条带,而TD PCR程序仅克隆出1272bp的特异带;利用高保真的PfuDNA聚合酶作PCR,在TD PCR泳道中仅有1272bp一条带,而普通PCR除了1272bp的特异带外,还出现一条500bp的非特异带.无论使用普通Taq酶或高保真酶Pfu,改良的降落PCR程序均明显提高PCR的特异性,类似的降落PCR程序可望用于克隆用普通PCR难以克隆的基因片段,或在假阳性难以去除的情况下提高PCR的特异性.

关键词：高特异性改良降落PCR PfuDNA聚合酶

基于生物纳米材料构建高灵敏高特异性细胞传感器

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基于生物纳米材料构建高灵敏高特异性细胞传感器

大肠杆菌抗K88ac抗原提纯及高特异性抗血清制备

中国化学会第30届学术年会

作者：刘亚青高金婷林晓东邓健康郭婷天津科技大学

癌症被是世界范围内公认的一种致命性的疾病,而中国新增病例和死亡人数均居世界首位1。目前,仅依靠治疗全球无法赢取与癌症的抗争,早发现早治疗才是大幅提高成功治疗可能性的长期战略。但是癌症的初期症状并不明显,一旦症状出现己到中晚... 详细信息

癌症被是世界范围内公认的一种致命性的疾病,而中国新增病例和死亡人数均居世界首位1。目前,仅依靠治疗全球无法赢取与癌症的抗争,早发现早治疗才是大幅提高成功治疗可能性的长期战略。但是癌症的初期症状并不明显,一旦症状出现己到中晚期,很难治愈。因此,研发肿瘤等重大疾病早期诊断新方法尤为重要。各种各样的用于检测癌细胞的方法陆续地被报道,包括细胞学检测、荧光成像、磁共振成像、正电子放射层扫描术、电脑层析成像、X-射线成像、超声等。然而,大多数的方法实验过程花费昂贵、对仪器要求较高,而且这些方法可能有放射的危险。因此,发展新型检测癌细胞技术越来越迫切。纳米技术的出现为癌症的早期诊断带来了新的希望。而核酸适配体与靶分子的高特异性识别为提高检测特异性提供了保障2。我们的研究将核酸适配体与纳米材料相结合,发展了多种高灵敏度高特异性的细胞传感器,可在大量正常细胞存在下,选择性检测其中的癌细胞,检出限达到10cells/mL。

关键词：细胞传感器核酸适配体纳米材料高特异性高灵敏度

来源： cnki会议评论

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中国预防兽医学报 1985年第2期 27-29页

作者：罗清华李安丽军事医学科学院基础医学研究所

K88抗原是使肠致病性大肠杆菌植入到猪小肠的一种纤毛。它与致病性大肠杆菌在宿主体内的定居力密切相关,是引起仔猪腹泻的重要病因,

关键词：抗原电泳纯 K88ac 抗血清高特异性大肠杆菌大肠埃希氏菌埃希氏杆菌属