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髓样分化蛋白2通过调控EGFR信号通路影响三阴性乳腺癌紫杉醇耐药性

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中华内分泌外科杂志 2022年第3期16卷 309-313页

作者：郑书荣黄奇迪傅维达卢康康郭贵龙温州医科大学附属第一医院乳腺外科温州325000

目的探讨髓样分化蛋白2(myeloid differentiation protein-2,MD-2)通过EGFR信号通路对三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)细胞紫杉醇耐药性的影响。方法采用免疫组织化学法检测TNBC患者癌组织和癌旁组织中MD-2的表达并分... 详细信息

目的探讨髓样分化蛋白2(myeloid differentiation protein-2,MD-2)通过EGFR信号通路对三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)细胞紫杉醇耐药性的影响。方法采用免疫组织化学法检测TNBC患者癌组织和癌旁组织中MD-2的表达并分析MD-2表达与患者临床病理参数的关系。构建TNBC紫杉醇耐药细胞株,干预细胞中MD-2的表达。Transwell检测细胞侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡。转录组测序筛选MD-2调控的信号通路,并通过Western blot验证。结果相较于癌旁组织,癌组织中MD-2表达显著增强。MD-2的高表达与临床分期、肿瘤大小、肿瘤复发转移等情况密切相关(χ^(2)=4.50,P=0.032;χ^(2)=2.55,P=0.011;χ^(2)=4.40,P=0.036)。细胞实验中,与正常乳腺细胞比较,TNBC细胞系中MD-2表达显著增强。与sh-NC组比较(100±11.52)(6.81±0.57),敲减MD-2能抑制紫杉醇耐药TNBC细胞的侵袭(61.44±6.78)(t=4.99,P=0.008)、促进凋亡(15.19±1.06)(t=12.06,P2主要通过对EGFR信号通路进行调控进而影响TNBC细胞的生物学行为。结论MD-2可促进TNBC细胞侵袭及紫杉醇耐药,该作用可能通过影响EGFR信号通路实现,MD-2有望成为TNBC治疗中的有效靶点。

关键词：三阴性乳腺癌髓样分化蛋白2 耐药 EGFR信号通路

髓样分化蛋白2基因沉默对高糖诱导的大鼠心肌细胞增殖抑制、凋亡及炎症反应的影响

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中国应用生理学杂志 2019年第3期35卷 273-279页

作者：林中民陈国荣张泉波王芳项兰婷曹琼洁温州医科大学附属第一医院病理科温州医科大学附属眼视光医院省部共建眼视光学和视觉科学国家重点实验室浙江温州325000

目的:研究髓样分化蛋白2(MD2)基因沉默对高糖(HG)诱导的大鼠心肌细胞增殖抑制、凋亡及炎症反应的影响及其机制。方法:体外大鼠心肌细胞系H9C2细胞随机分为4组(n=3):LG组、HG组、HG+NC组、HG+si-MD2组,分别转染MD2基因小干扰RNA(si-MD2)... 详细信息

目的:研究髓样分化蛋白2(MD2)基因沉默对高糖(HG)诱导的大鼠心肌细胞增殖抑制、凋亡及炎症反应的影响及其机制。方法:体外大鼠心肌细胞系H9C2细胞随机分为4组(n=3):LG组、HG组、HG+NC组、HG+si-MD2组,分别转染MD2基因小干扰RNA(si-MD2)或阴性对照24h后进行低糖或高糖处理48h。RT-qPCR检测MD2及细胞内炎症细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表达水平,MTS法、流式细胞术检测细胞增殖能力、细胞周期和细胞凋亡率,Westernblot法检测细胞内相关蛋白的表达水平及磷酸化水平。结果:转染si-MD2后,H9C2细胞中MD2的表达水平明显下降(P2细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA水平显著升高,细胞增殖能力下降并发生G1期阻滞,细胞凋亡率和CleavedCaspase-3蛋白水平升高(P2基因沉默可拮抗高糖对H9C2细胞增殖、细胞周期、凋亡及细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6mRNA水平的影响(P2细胞中细胞外信号调节激酶(ERK1/2)、P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)和C-Jun氨基末端激酶(JNK)蛋白的磷酸化水平明显升高,而MD2基因沉默可抑制高糖诱导下的ERK1/2、P38MAPK和JNK蛋白激活(P2基因沉默可能通过抑制ERK、P38MAPK和JNK信号通路的激活来减少高糖诱导的大鼠心肌细胞炎症细胞因子表达,减少心肌细胞凋亡,促进细胞增殖。

关键词：髓样分化蛋白2 大鼠心肌细胞炎症因子细胞凋亡增殖

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髓样分化蛋白2对重症急性胰腺炎的影响

山东医药 2011年第32期51卷 104-106页

作者：孙宁葛春林中国医科大学附属第一医院沈阳110005

脂多糖（LPS）是革兰氏阴性菌（G-）细胞壁的主要成分,它能被Toll样受体4（TLR4）所识别,并且TLR4是LPS跨膜信号转导的主要受体。已有研究表明,TLR4的表达在发生胰腺炎的胰腺中存在上调趋势,且急性坏死性胰腺炎时,肝、肺等组织中TLR4 m... 详细信息

脂多糖（LPS）是革兰氏阴性菌（G-）细胞壁的主要成分,它能被Toll样受体4（TLR4）所识别,并且TLR4是LPS跨膜信号转导的主要受体。已有研究表明,TLR4的表达在发生胰腺炎的胰腺中存在上调趋势,且急性坏死性胰腺炎时,肝、肺等组织中TLR4 mRNA的表达明显增强。所以,在SIRS和早期MODS,TLR4受体的激动即可被认为是诱导炎症反应失控的最初因素之一。本文主要就髓样分化蛋白2（MD2）在TLR4信号转导过程中的重要作用,及在其诱导下产生的炎症反应对重症急性胰腺炎（SAP）的影响和临床意义加以阐述。

关键词：胰腺炎,急性坏死性髓样分化蛋白2 脂多糖 Toll样受体4

胆红素对新生儿脐血单核细胞髓样分化蛋白-2、肿瘤坏死因子受体相关因子6mRNA表达的影响

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实用儿科临床杂志 2012年第2期27卷 91-94页

作者：袁西华陈昌辉刘会领李茂军吴青四川省医学科学院四川省人民医院儿科成都610072

目的观察脐血单核细胞(CBMC)经不同水平胆红素孵育后髓样分化蛋白2(MD-2)、TNF受体相关因子6(TRAF6)mRNA表达的变化。方法采集10例健康足月新生儿的脐血,经纤维蛋白结合法分离得CBMC,将其加入含不同水平胆红素(0μmol.L-1、17.1μmol.L-... 详细信息

目的观察脐血单核细胞(CBMC)经不同水平胆红素孵育后髓样分化蛋白2(MD-2)、TNF受体相关因子6(TRAF6)mRNA表达的变化。方法采集10例健康足月新生儿的脐血,经纤维蛋白结合法分离得CBMC,将其加入含不同水平胆红素(0μmol.L-1、17.1μmol.L-1、42.8μmol.L-1、102.6μmol.L-1、153.9μmol.L-1、220.6μmol.L-1和307.8μmol.L-1)的牛血清清蛋白溶液中孵育1 h,再加入脂多糖(LPS)刺激30 min。收集CBMC,采用反转录-PCR方法测定其MD-2、TRAF6 mRNA的表达水平。结果 1.LPS单独作用对CMBC MD-2 mRNA和TRAF6 mRNA表达水平无明显影响,低水平胆红素(17.1μmol.L-1、42.8μmol.L-1)单独作用对CBMC MD-2 mRNA和TRAF6 mRNA表达水平无明显影响。2.先经不同水平胆红素孵育,再接受LPS刺激,胆红素有抑制细胞MD-2 mRNA表达的趋势,随着胆红素水平的升高,抑制趋势越明显;先经不同水平胆红素孵育,再接受LPS刺激,低水平胆红素促进细胞TRAF6 mRNA的表达,当胆红素≥102.6μmol.L-1时,抑制TRAF6 mRNA表达,胆红素水平越高,抑制作用越明显。在相同胆红素水平作用下,随着MD-2 mRNA表达水平的降低,TRAF6 mRNA表达水平随之降低。结论低水平胆红素对CBMC MD-2 mRNA的表达无明显影响,对TRAF6 mRNA的表达有促进作用。高水平胆红素对二者的表达均有抑制作用,随着胆红素水平升高,抑制作用越来越明显。高胆红素血症患儿免疫功能低下可能与高浓度胆红素对免疫细胞的抑制作用有关。

关键词：胆红素脐血单核细胞髓样分化蛋白2 肿瘤坏死因子受体相关因子6

髓样分化蛋白2在脂多糖所致大鼠急性肺损伤中的作用

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中国呼吸与危重监护杂志 2010年第6期9卷 614-618页

作者：任卫英华峰金建军曾海英朱蕾复旦大学附属中山医院老年科上海200032 复旦大学附属中山医院呼吸科上海200032 复旦大学附属中山医院中心实验室上海200032 复旦大学附属中山医院病理科上海200032

目的研究髓样分化蛋白2(MD-2)在脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织中的表达及其作用。方法 20只健康雄性SD大鼠随机分为LPS组和对照组,通过支气管肺泡灌洗分离肺泡巨噬细胞,采用RT-PCR、Western blot和免疫组化方法分别检测MD... 详细信息

目的研究髓样分化蛋白2(MD-2)在脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织中的表达及其作用。方法 20只健康雄性SD大鼠随机分为LPS组和对照组,通过支气管肺泡灌洗分离肺泡巨噬细胞,采用RT-PCR、Western blot和免疫组化方法分别检测MD-2 mRNA和蛋白的表达,ELISA方法测定血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。将MD-2 siRNA转染大鼠肺泡巨噬细胞系NR8383,以终浓度1μg/mL的LPS刺激细胞,采用RT-PCR和Western blot方法分别测定细胞MD-2mRNA和蛋白的表达,ELISA方法测定细胞培养上清液TNF-α水平。结果 LPS组大鼠肺泡巨噬细胞和肺组织标本中MD-2 mRNA和蛋白的表达均显著高于对照组(P2 mRNA和蛋白的表达显著增加(P2 siRNA处理后,NR8383细胞在LPS刺激下MD-2mRNA和蛋白的表达未见明显增加(P>0.05),细胞培养上清液中TNF-α水平未见明显升高(P>0.05)。结论 MD-2在LPS所致ALI大鼠肺组织中表达显著上调,沉默肺泡巨噬细胞MD-2基因可抑制LPS刺激引起的细胞因子分泌增加,提示MD-2在LPS所致大鼠ALI中起重要作用。

关键词：髓样分化蛋白2 急性肺损伤脂多糖肺泡巨噬细胞

维生素D_3对急性溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜Toll样受体2和髓样分化蛋白2及CD14表达的影响

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中华实用诊断与治疗杂志 2017年第7期31卷 649-652页

作者：高鸿亮周禾姚萍新疆医科大学第一附属医院消化科乌鲁木齐830000

目的探讨维生素D_3对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)大鼠肠黏膜Toll样受体2(Toll-like receptor 2,TLR2)和髓样分化蛋白2(myeloid differentiation protein 2,MD2)及CD14表达的影响,及辅助治疗UC的可能机制。方法 30只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组和维生素D_3干预组各10只。模型组和维生素D_3干预组将质量分数5%2,4,6-三硝基苯磺酸与体积分数50%乙醇等体积混合后以0.4mL/100g剂量缓慢注入大鼠肠道制备UC模型,正常对照组以等量生理盐水灌肠。维生素D_3干预组在造模成功后第10天起给予胆维丁乳原液1 875u灌胃,模型组和正常对照组给予等剂量生理盐水灌胃,均1次/d,连续10d;比较3组大鼠一般情况及维生素D_3干预第10天疾病活动指数(disease activity index,DAI)评分;维生素D_3干预第10天处死大鼠,取结肠黏膜进行组织病理学评分(histopathological score,HPS),采用免疫组织化学法检测3组结肠黏膜组织TLR2、MD2和CD14的表达情况。结果维生素D_3干预第10天,模型组与维生素D_3干预组DAI[(8.07±1.87)、(5.15±2.40)分]、HPS评分[(14.33±0.97)、(10.01±2.23)分]高于正常对照组(0、0分)(P2、MD2和CD14均在肠黏膜上皮细胞细胞质、细胞核中着色;结肠黏膜组织TLR2、MD2和CD14阳性表达率在模型组(90%、80%、100%),维生素D_3干预组(80%、50%、50%)均高于正常对照组(0、0、0),且模型组高于维生素D_3干预组(P2、MD2和CD14高表达可能与UC发病有关,维生素D_3可通过抑制TLR2、MD2和CD14表达减轻UC大鼠的肠道炎症反应,发挥辅助治疗UC的作用。

关键词：溃疡性结肠炎维生素D3 Toll样受体2 髓样分化蛋白2 CD14

地塞米松对早期脂多糖大鼠肝组织髓样分化蛋白2及核因子-κB表达的影响

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海南医学 2015年第21期26卷 3121-3123页

作者：雷贤英李雨昕雷贤蓉甘辞海胡丽蓉薛钰婷泸州医学院附属医院ICU 四川泸州646000 泸州医学院护理学院四川泸州646000 泸州医学院附属医院供应室四川泸州646000

目的观察地塞米松对脂多糖大鼠早期急性肝损伤时肝组织髓样分化蛋白2(MD-2)基因及核因子-κB(NF-κB)蛋白表达的影响。方法 15只雄性SD大鼠被随机分为正常组、脂多糖组和治疗组(脂多糖+地塞米松组),每组各5只。自大鼠尾静脉穿刺置留置... 详细信息

目的观察地塞米松对脂多糖大鼠早期急性肝损伤时肝组织髓样分化蛋白2(MD-2)基因及核因子-κB(NF-κB)蛋白表达的影响。方法 15只雄性SD大鼠被随机分为正常组、脂多糖组和治疗组(脂多糖+地塞米松组),每组各5只。自大鼠尾静脉穿刺置留置针以备给药,正常组自大鼠尾静脉注射生理盐水10 ml;脂多糖组静脉注射脂多糖10 mg/kg(10 min以上注射完);治疗组静脉注射脂多糖10 mg/kg(10 min以上注射完)和地塞米松0.1 mg/kg。所有大鼠均于注射后1 h被处死,抽取左心室血行生化检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)。剪取部分肝右叶制成肝组织匀浆液(保存于-20℃条件下以备用),以检测肝组织MD-2基因,另取部分肝组织检测NF-κB蛋白的表达水平。结果 (1)正常组大鼠转氨酶值波动于正常范围,脂多糖组大鼠ALT、AST明显增高,与脂多糖组比较,治疗组转氨酶值明显下降,差异有统计学意义(P2)正常的肝组织中可见少量MD-2基因、NF-κB蛋白表达;与正常组比较,脂多糖组和治疗组肝组织MD-2基因及NF-κB蛋白的表达水平均明显,差异均有统计学意义(P2基因及NF-κB蛋白的表达较脂多糖组明显减少,差异均有统计学意义(P2基因和NF-κB蛋白表达水平的减少有关。

关键词：脂多糖髓样分化蛋白2 核因子-κB(NF-κB) 急性肝损伤地塞米松

灵芝酸通过髓样分化蛋白2调控小胶质细胞活化改善小鼠脑缺血损伤

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中国药理学与毒理学杂志 2021年第10期35卷 792-792页

作者：马昂王淑园全亚竹李敏杨宝学北京大学基础医学院药理学系北京100191

目的灵芝酸是灵芝的主要生物活性成分之一,具有免疫调节及抗炎的作用。本研究旨在观察灵芝酸对小鼠脑缺血损伤是否具有保护作用及可能的作用机制。方法通过线栓法缺血60 min再灌注制备小鼠脑缺血再灌注损伤模型。小鼠随机分为假手术组... 详细信息

目的灵芝酸是灵芝的主要生物活性成分之一,具有免疫调节及抗炎的作用。本研究旨在观察灵芝酸对小鼠脑缺血损伤是否具有保护作用及可能的作用机制。方法通过线栓法缺血60 min再灌注制备小鼠脑缺血再灌注损伤模型。小鼠随机分为假手术组、假手术给药组、模型组和灵芝酸治疗组。灵芝酸(1.25,5和20 mg·kg^(-1))于再灌同时ip给药。体外实验应用经典的脂多糖(LPS)诱导小胶质细胞神经炎症损伤模型。结果灵芝酸可呈剂量依赖性改善小鼠脑缺血后神经功能缺失、减小脑梗死体积、减轻脑水肿程度。与模型组相比,灵芝酸治疗组可显著抑制脑缺后神经元的凋亡,抑制小胶质细胞过度激活,减少损伤侧脑组织中炎症相关蛋白iNOS,COX-2和TNF-α的表达,NF-κB及MAPK信号通路的蛋白(ERK,JNK和P38)磷酸化水平也显著降低。体外实验结果表明,灵芝酸同样可呈剂量依赖性地减少LPS诱导后小胶质细胞炎症相关蛋白iNOS,COX-2和TNF-α的表达水平,并抑制NF-κB及MAPK信号通路。我们利用超高效液相色谱-串联质谱检测灵芝酸的组成,并将含量较高的单体进行提取和纯化,通过ELSIA法筛选有效的抗炎单体,应用表面等离子共振技术、蛋白芯片技术、分子对接技术以及免疫共沉淀等方法对筛选出的灵芝酸可能的作用靶点进行检测和验证。结果表明,灵芝酸混合物主要由19种灵芝酸单体组成,其中含量较高的8种单体均可抑制小胶质细胞炎症因子的分泌,并且髓样分化蛋白2(MD2)可能为灵芝酸抑制小胶质细胞炎症反应的关键靶点,灵芝酸单体可通过与MD2结合,抑制其与TLR4形成复合物,进而影响下游的NF-κB及MAPK信号通路。在8种灵芝酸单体中灵芝酸K的抗炎活性最为突出,且与MD2亲和力也最强。MD2基因敲除及MD2基因敲除后给予灵芝酸对小胶质细胞炎症反应及脑缺血再灌注损伤的实验结果表明,脑缺血再灌注损伤后,损伤侧脑组织中MD2的表达明显升高,MD2基因敲除后显著抑制脑缺血再灌注后小胶质细胞的过度激活。并且MD2基因敲除可抑制LPS引起的小胶质的炎症反应,减少脑缺血再灌注后脑梗死体积,在MD2基因敲除基础上给予灵芝酸,以上作用无显著差异。表明灵芝酸发挥脑缺血再灌注损伤保护作用依赖于MD2。结论灵芝酸具有抗脑缺血损伤的作用,其机制主要是通过与MD2结合,抑制MD2与TLR4形成复合物,下调MAPK及NF-κB信号通路,进而抑制小胶质细胞过度激活,减少炎症因子的表达。

关键词：灵芝酸髓样分化蛋白2 小胶质细胞脑缺血损伤

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细菌内毒素FRET检测方法研究

细菌内毒素FRET检测方法研究

作者：王政中南民族大学

学位级别：硕士

细菌内毒素(Lipopolysaccharide,LPS)是革兰氏阴性菌裂解后的产物,为外源性“热原”,可引起发热、微循环障碍、内毒素休克及播散性血管内凝血等。传统的内毒素检测方法鲎试验法存在假阳性和大量捕杀鲎导致环境破坏的缺陷,因此需要开发... 详细信息

细菌内毒素(Lipopolysaccharide,LPS)是革兰氏阴性菌裂解后的产物,为外源性“热原”,可引起发热、微循环障碍、内毒素休克及播散性血管内凝血等。传统的内毒素检测方法鲎试验法存在假阳性和大量捕杀鲎导致环境破坏的缺陷,因此需要开发灵敏特异和环境友好的内毒素检测方法。本论文选取对LPS特异识别的内源蛋白或多肽构建识别元件,荧光蛋白对m Turquoise/m Neon Green作为报告元件,构建荧光共振能量转移(FRET)蛋白质传感器,实现对LPS的灵敏、特异和快速检测。本研究主要包括以下四个方面:基于内毒素结合肽(LPS-binding peptide,LBP)检测LPS的FRET生物传感器构建。本研究将FRET供体m Turquoise和受体m Neon Green基因序列与对内毒素特异性识别的内毒素结合肽基因序列融合,构建重组载体p PIC9k-LBP-m Neon Green和p PIC9k-LBP-m Turquoise,转化进入毕氏酵母GS115,使用毕氏酵母表达重组蛋白LBP-m Turquoise和LBP-m Neon Green,对重组蛋白的生化性质和光谱特性进行鉴定。基于内毒素结合肽FRET传感器检测LPS。首先优化检测体系的供体模块和受体模块的浓度比例,然后使用最优比例对LPS标准品检测,确定线性关系范围10 ng/m L-200 ng/m L,线性方程为Y=0.09834 log C+0.08543(R=0.99),检测限为2.03 ng/m L。并对检测体系中可能存在的干扰物质进行检测,探究体系的选择性。最后基于内毒素结合肽FRET传感器用于环境水样品的内毒素检测,与鲎试验方法检测值比较,评估基于内毒素结合肽FRET传感器的可靠性,并且内毒素结合肽FRET传感器能很好区分革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌。基于人源Toll样受体4(TLR4)和髓样分化蛋白2(MD2)的FRET蛋白质传感器的构建。本方法利用LPS能特异性引发MD2-TLR4形成双拷贝四聚体复合物的特性,将FRET供体m Turquoise和受体m Neon Green基因序列与对内毒素特异性识别的MD2-TLR4基因序列融合,构建重组载体p PIC9k-md2-toll4-m Turquoise和p PIC9k-md2-toll4-m Neon Green,转化毕氏酵母GS115,使用毕氏酵母表达重组蛋白MD2-TLR4-m Turquoise和MD2-TLR4-m Neon Green,对重组蛋白的生化性质和光谱特性进行鉴定。基于人源Toll4样受体4(TLR4)和髓样分化蛋白2(MD2)的FRET蛋白质传感器检测LPS。首先优化检测体系的供体模块和受体模块的浓度比例,然后使用最优比例对LPS标准品检测,确定线性关系范围为10 ng/m L-100 ng/m L,线性方程Y=0.01625 log C+0.19118(R=0.98),检测限为3.24 ng/m L,并对检测体系中可能存在的干扰物质进行检测,探究体系的选择性。最后基于MD2-TLR4 FRET传感器用于环境水样品的内毒素检测,与鲎试验方法检测值比较,评估基于MD2-TLR4 FRET传感器的可靠性,并且该FRET传感器能很好区分革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌。

关键词：内毒素内毒素结合肽人源Toll4样受体髓样分化蛋白2 荧光共振能量转移蛋白质传感器