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骨髓源性生长因子对高糖诱导H9c2细胞焦亡的改善作用

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第三军医大学学报 2021年第10期43卷 923-929页

作者：张玉王艳赵然尊仇治梅龙仙萍李朝富陈文明石蓓遵义医科大学附属医院心内科贵州遵义563000

目的探讨骨髓源性生长因子(myeloid-derived growth factor,Mydgf)是否通过调控NLRP3改善高糖诱导的心肌细胞焦亡。方法培养大鼠心肌细胞株H9c2,实验分为4组:(1)正常组(normal,Nor)为正常培养的H9c2细胞;(2)高糖组(high glucose,HG)予以50 mmol/L葡萄糖干预H9c2细胞24 h;(3)Mydgf组采用25 ng/mL重组Mydgf蛋白处理细胞12 h,随后以50 mmol/L葡萄糖干预H9c2细胞24 h;(4)Necrosulfonamide组(NSA)采用32μmol/L NSA处理细胞0.5 h,然后予50 mmol/L葡萄糖干预H9c2细胞24 h。Western blot法检测H9c2细胞中天冬氨酸蛋白水解酶剪切体-1(cleaved Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ACS)、炎症复合体(NLRP3)及成孔蛋白gasdermin D(GSDMD)的表达水平。ELISA法检测细胞培养液中IL-1β和IL-18的分泌量。CCK-8法检测Mydgf及NLRP3对H9c2细胞活力的影响。将携带NLRP3的增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)慢病毒载体(NLRP3-EGFP)及空病毒载体(EGFP)分别转染至H9c2细胞,做回复实验,检测焦亡相关指标变化。结果Western blot结果显示,HG组焦亡相关蛋白cleaved Caspase-1、ACS、NLRP3、GSDMD表达量较正常组明显增高(P25 ng/mL的Mydgf明显降低H9c2细胞活力(P0.05),而NLRP3-EGFP组中NLRP3的mRNA及蛋白表达均显著增高(P<0.05)。回复实验的Western blot结果显示,在高糖环境中,与Mydgf组相比,Mydgf+NLRP3-EGFP组中焦亡相关蛋白NLRP3、ASC、cleaved Caspase-1表达显著增加(P<0.05);ELISA检测结果也表明IL-1β和IL-18表达较Mydgf组明显增高(P<0.05)。结论Mydgf可能通过抑制NLRP3来改善高糖诱导的心肌细胞焦亡。

关键词：骨髓源性生长因子 H9c2细胞细胞焦亡 NLRP3 糖尿病性心肌病

新诊断2型糖尿病患者血骨髓源性生长因子水平与颈动脉粥样硬化的相关性研究

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中华糖尿病杂志 2024年第7期16卷 740-745页

作者：覃文萱赵金牛晨晓向光大南方医科大学第一临床医学院广州510515 解放军中部战区总医院内分泌科武汉430070

目的探讨新诊断2型糖尿病(T2DM)患者血骨髓源性生长因子(MYDGF)水平与颈动脉粥样硬化(CAS)的关系。方法为横断面研究。选取2022年10月至2023年5月于解放军中部战区总医院内分泌科就诊的新诊断T2DM患者及同时期于该院体检中心进行体检的... 详细信息

目的探讨新诊断2型糖尿病(T2DM)患者血骨髓源性生长因子(MYDGF)水平与颈动脉粥样硬化(CAS)的关系。方法为横断面研究。选取2022年10月至2023年5月于解放军中部战区总医院内分泌科就诊的新诊断T2DM患者及同时期于该院体检中心进行体检的健康体检者为研究对象。根据颈动脉血管彩超的检查结果将新诊断T2DM患者分为无颈动脉粥样硬化(NCAS)组和CAS组,健康体检者纳入健康对照组。收集研究对象MYDGF、颈动脉内中膜厚度(CIMT)、舒张压(DBP)、糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖(2hPG)、空腹胰岛素(FINS)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、载脂蛋白A1(Apo A1),并根据FPG和FINS结果计算稳态模型评估胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),测量其身高和体重并计算体重指数(BMI)。采用单因素方差分析、Kruskal-WallisH检验或χ^(2)检验进行组间比较,采用Spearman相关性分析法分析新诊断T2DM患者CIMT与其他指标的相关性,采用二元logistic回归分析法探讨新诊断T2DM患者合并CAS的影响因素。结果共纳入新诊断T2DM患者136例,其中,NCAS组62例,CAS组74例;健康对照组纳入60名研究对象。与健康对照者相比,NCAS组和CAS组新诊断T2DM患者血MYDGF均升高(均P性分析结果显示,新诊断T2DM患者的CIMT与BMI(r=0.400,P<0.001)、DBP(r=0.240,P=0.005)、HbA1c(r=0.428,P<0.001)、FPG(r=0.253,P=0.003)、HOMA-IR(r=0.456,P<0.001)、TC(r=0.239,P=0.005)均呈正相关,与MYDGF(r=-0.789,P<0.001)呈负相关。二元logistic回归分析结果显示,DBP(OR=1.149,95%CI 1.057~1.249,P=0.001)、HbA1c(OR=1.604,95%CI 1.060~2.427,P=0.025)、HOMA-IR(OR=1.443,95%CI 1.034~2.015,P=0.031)、TC(OR=9.839,95%CI 2.830~34.201,P<0.001)、MYDGF(OR=0.935,95%CI 0.906~0.964,P<0.001)均为新诊断T2DM患者合并CAS的影响因素。结论在新诊断T2DM患者中,MYDGF与CIMT呈负相关,MYDGF是新诊断T2DM合并CAS的影响因素。

关键词：糖尿病,2型颈动脉粥样硬化骨髓源性生长因子

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髓源性生长因子促进血管生成能力的实验研究

安徽医科大学学报 2021年第5期56卷 774-779页

作者：杨振文志江石龚文辉葛圣林安徽医科大学第一附属医院心脏大血管外科合肥230032 安徽医科大学基础医学院微生物教研室合肥230032

目的观察骨髓源性生长因子(MYDGF)对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管新生的促进作用,明确MYDGF对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖及成管能力的作用。方法新鲜种鸡蛋孵化7 d选择其中发育正常鸡胚随机分为对照组、PBS组、低剂量MYDGF组、中剂量MYDG... 详细信息

目的观察骨髓源性生长因子(MYDGF)对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管新生的促进作用,明确MYDGF对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖及成管能力的作用。方法新鲜种鸡蛋孵化7 d选择其中发育正常鸡胚随机分为对照组、PBS组、低剂量MYDGF组、中剂量MYDGF组、高剂量MYDGF,每组各10枚。通过气室分别向各组加入30μl样品(低、中和高剂量MYDGF组为溶于PBS中浓度分别为10、100和500 ng/ml的MYDGF溶液)。2 d后拍照记录CAM血管生长情况,利用计算机软件IPP 6.0分析血管生成面积(VA)与CAM面积并计算两者之比(VA/CAM)。体外培养HUVEC,用CCK-8法检测MYDGF对HUVEC细胞的增殖能力的影响。成管实验检测MYDGF对HUVEC成管功能的影响。结果血管交叉点数(VN)分别为PBS组(20.80±2.49)个,中剂量MYDGF组(27.60±3.17)个,高剂量MYDGF组(28.60±3.27)个,中剂量MYDGF组、高剂量MYDGF组分别与PBS组比较,差异有均统计学意义(P<0.05)。VA/CAM值分别为PBS组(23.53±1.96)%,中剂量MYDGF组(27.87±3.10)%,高剂量MYDGF组(29.26±2.73)%,中剂量MYDGF组、高剂量MYDGF组分别与PBS组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,MYDGF(100 ng/ml)可促进HUVEC增殖(P<0.05)、成管(P<0.05)的功能,差异有统计学意义。结论MYDGF可促进CAM血管新生,增强HUVEC细胞的增殖及成管能力。

关键词：骨髓源性生长因子鸡胚尿囊膜血管血管生成

egr-miR-71过表达对绵羊PBMCs蛋白组的差异表达分析

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中国兽医科学 2020年第4期50卷 459-466页

作者：李雅婷杨静颜鲁军张永娥何贵天蔡梦婷郭小腊郑亚东丁军涛新疆大学生命科学与技术学院新疆干旱区生物资源保护与利用实验室新疆乌鲁木齐830046 中国农业科学院、兰州兽医研究所、家畜疫病病原生物学国家重点实验室、甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

为了探究细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)来源的miR-71(egr-miR-71)对绵羊外周血单核细胞(PBMCs)蛋白组的影响。本研究使用密度梯度离心法分离得到绵羊PBMCs,并使用电穿孔法将egr-miR-71转染至绵羊PBMCs,用qPCR检测转染效率。基... 详细信息

为了探究细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)来源的miR-71(egr-miR-71)对绵羊外周血单核细胞(PBMCs)蛋白组的影响。本研究使用密度梯度离心法分离得到绵羊PBMCs,并使用电穿孔法将egr-miR-71转染至绵羊PBMCs,用qPCR检测转染效率。基于iTRAQ方法,对比分析egr-miR-71过表达对绵羊PBMCs蛋白表达的影响,通过qPCR和Western-blotting对骨髓源性生长因子(MYDGF)转录水平和翻译水平进行验证。结果显示,绵羊PBMCs转染egr-miR-71模拟物后,miR-71的相对表达量极显著上调(P因子(MIF)、MYDGF、酰基辅酶A结合蛋白(ACBP)和碳酸酐酶(CAs)等。这些差异蛋白主要参与丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、转化生长因子-β(TGF-β)等信号通路。qPCR和Western-blotting结果显示,与对照组相比,模拟物转染组中MYDGF转录和翻译水平均显著下调(P<0.05)。通过对转染egr-miR-71后绵羊PBMCs的蛋白进行组学分析,初步了解了egr-miR-71对绵羊PMBCs表达蛋白的调控,鉴定出的差异蛋白可能在细粒棘球蚴与宿主互作中发挥重要作用。这为深入研究细粒棘球绦虫的感染机制提供了思路,也为新型抗包虫病药物的研发提供了理论依据。

关键词： egr-miR-71 绵羊外周血单核细胞蛋白组学分析骨髓源性生长因子

Gαi1/3介导MYDGF诱导的脑缺血再灌注后神经保护和血管新生的作用和分子机制研究

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Gαi1/3介导MYDGF诱导的脑缺血再灌注后神经保护和血管新生的作用...

作者：郑雨帆苏州大学

学位级别：硕士

研究背景及目的:脑卒中(stroke)是一类高发病率、高致死率和高致残率的脑疾病。本文第一部分重点关注了一种新的生长因子骨髓源性生长因子(Myeloid-derived growth factor,MYDGF)在脑缺血再灌注后神经保护及促血管新生的作用。课题组前... 详细信息

研究背景及目的:脑卒中(stroke)是一类高发病率、高致死率和高致残率的脑疾病。本文第一部分重点关注了一种新的生长因子骨髓源性生长因子(Myeloid-derived growth factor,MYDGF)在脑缺血再灌注后神经保护及促血管新生的作用。课题组前期研究发现:传统观点认为只能和GPCR(G蛋白偶联受体)结合的G蛋白抑制性α亚单位1和3(Gαi1/3),在多个生长因子刺激下,也能和其受体结合,介导下游通路的活化。本课题第二部分将重点解析Gαi1/3在MYDGF信号转导及促血管生成中的作用。研究方法:大脑中动脉闭塞(MCAO)法建立小鼠脑缺血再灌注损伤模型,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹实验(Western blotting)检测缺血后MYDGF表达水平;对原代小鼠小胶质细胞、星型胶质细胞和皮层神经元进行体外糖氧剥夺再灌注(OGD/R)实验,检测这三种细胞中MYDGF的表达水平;对SH-SY5Y细胞和小鼠原代皮层神经元进行体外OGD/R实验,观察添加MYDGF后的神经细胞的保护作用;小鼠脑立体定位注射带有小胶质特异性启动子的MYDGF shRNA腺病毒,条件性敲减小胶质细胞中MYDGF表达;之后建立MCAO模型,进行脑缺血后小鼠神经功能行为学评分,通过TTC(2,3,5—氯化三苯基四氮唑)染色及CD31染色等研究MYDGF敲减对脑缺血再灌注后的缺血灶损伤面积及血管生成的影响;利用野生型小鼠和Gαi1/3-DKO(双敲除)小鼠建立MCAO模型,TTC染色检测脑缺血再灌注后Gαi1/3对缺血灶损伤面积的影响,通过CD31免疫荧光检测血管生成情况;在小鼠成纤维母细胞(MEFs)中通过多种基因手段,包括显性负性遗传、CRISPR/Cas9敲除、腺病毒表达载体等改变Gαi1/3表达及活化,后添加MYDGF处理,检测PI3K-Akt-mTOR以及Erk-MAPK通路的活化水平;转染慢病毒包裹的Gαi1/3 shRNA敲减人脑微血管内皮细胞(HCMEC)和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中Gαi1/3,检测MYDGF下游PI3K-Akt-mTOR以及Erk-MAPK通路活化水平,利用成管实验(tube formation)、细胞迁移实验(Transwell)和2’-脱氧-5-乙炔尿苷(EdU)方法检测内皮细胞成管、迁移和增殖。研究结果:MCAO模型脑缺血侧MYDGF的mRNA和蛋白表达升高;MYDGF主要由小胶质细胞分泌;添加MYDGF拮抗OGD/R诱导的神经元损伤;小鼠脑立体定位注射带有小胶质特异性启动子的MYDGF shRNA腺病毒,条件性敲减小胶质细胞中MYDGF表达,脑缺血后神经功能行为学评分检测发现MYDGF敲减后导致神经损伤严重,同时急性期(24小时)缺血灶损伤面积增大、恢复期(7-14天)新生血管数量减少;运用野生型小鼠和Gαi1/3-DKO(双敲除)小鼠建立MCAO模型,TTC染色发现Gαi1/3 DKO后缺血灶损伤面积显著增大,且恢复期缺血灶血管数量减少;MEFs中显性负性遗传抑制Gαi1/3的活化后,抑制MYDGF诱导的PI3K-Akt-mTOR和Erk-MAPK信号通路活化;CRISPR/Cas9敲除Gαi1/3后几乎阻断MYDGF诱导的PI3K-Akt-mTOR以及Erk-MAPK通路活化;而过表达Gαi1/3后强化MYDGF下游信号活化;在体外培养的血管内皮细胞中,添加MYDGF激活PI3K-Akt-mTOR和Erk-MAPK通路,并诱导内皮细胞体外成管,迁移和增殖;添加慢病毒包裹的Gαi1/3 shRNA下调Gαi1/3的表达,导致MYDGF诱导的PI3K-Akt-mTOR和Erk-MAPK信号通路被抑制,并显著抑制MYDGF诱导的内皮细胞成管,迁移和增殖。研究结论:脑缺血再灌注后,小胶质来源的MYDGF表达增加促神经保护(急性期作用)和血管新生(恢复期作用);Gαi1/3是MYDGF诱导的下游信号的关键分子。

关键词：神经保护血管新生骨髓源性生长因子 G蛋白抑制性α亚单位1和3