骨髓源性生长因子对高糖诱导H9c2细胞焦亡的改善作用

作     者：张玉 王艳 赵然尊 仇治梅 龙仙萍 李朝富 陈文明 石蓓 ZHANG Yu;WANG Yan;ZHAO Ranzun;QIU Zhimei;LONG Xianping;LI Chaofu;CHEN Wenming;SHI Bei

作者机构：遵义医科大学附属医院心内科贵州遵义563000 

出 版 物：《第三军医大学学报》 (Journal of Third Military Medical University)

年 卷 期：2021年第43卷第10期

页      面：923-929页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金地区科学基金(81860061,82060061) 贵州省高层次创新型人才培养“百层次”[黔科合人才(2015)4025] 遵义医科大学附属医院硕士科研启动基金[院字(2016)51号] 

主　　题：骨髓源性生长因子 H9c2细胞 细胞焦亡 NLRP3 糖尿病性心肌病 

摘      要：目的探讨骨髓源性生长因子(myeloid-derived growth factor,Mydgf)是否通过调控NLRP3改善高糖诱导的心肌细胞焦亡。方法培养大鼠心肌细胞株H9c2,实验分为4组:(1)正常组(normal,Nor)为正常培养的H9c2细胞;(2)高糖组(high glucose,HG)予以50 mmol/L葡萄糖干预H9c2细胞24 h;(3)Mydgf组采用25 ng/mL重组Mydgf蛋白处理细胞12 h,随后以50 mmol/L葡萄糖干预H9c2细胞24 h;(4)Necrosulfonamide组(NSA)采用32μmol/L NSA处理细胞0.5 h,然后予50 mmol/L葡萄糖干预H9c2细胞24 h。Western blot法检测H9c2细胞中天冬氨酸蛋白水解酶剪切体-1(cleaved Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ACS)、炎症复合体(NLRP3)及成孔蛋白gasdermin D(GSDMD)的表达水平。ELISA法检测细胞培养液中IL-1β和IL-18的分泌量。CCK-8法检测Mydgf及NLRP3对H9c2细胞活力的影响。将携带NLRP3的增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)慢病毒载体(NLRP3-EGFP)及空病毒载体(EGFP)分别转染至H9c2细胞,做回复实验,检测焦亡相关指标变化。结果Western blot结果显示,HG组焦亡相关蛋白cleaved Caspase-1、ACS、NLRP3、GSDMD表达量较正常组明显增高(P25 ng/mL的Mydgf明显降低H9c2细胞活力(P0.05),而NLRP3-EGFP组中NLRP3的mRNA及蛋白表达均显著增高(P0.05)。回复实验的Western blot结果显示,在高糖环境中,与Mydgf组相比,Mydgf+NLRP3-EGFP组中焦亡相关蛋白NLRP3、ASC、cleaved Caspase-1表达显著增加(P0.05);ELISA检测结果也表明IL-1β和IL-18表达较Mydgf组明显增高(P0.05)。结论Mydgf可能通过抑制NLRP3来改善高糖诱导的心肌细胞焦亡。