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免疫性血小板减少症患者NK细胞数量及功能

中华医学杂志 2017年第16期97卷 1231-1235页

作者：张玉娇瞿文刘惠王一浩刘春燕李丽娟王化泉付蓉邢莉民邵宗鸿天津医科大学总医院血液科 300052

探讨免疫性血小板减少症（ITP）患者外周血中自然杀伤（NK）细胞数量及功能的变化。方法选取2015年9月至2016年5月天津医科大学总医院血液科住院的初诊ITP患者34例，完全缓解ITP患者32例及健康志愿者30名。采用流式细胞术检测外周血NK... 详细信息

探讨免疫性血小板减少症（ITP）患者外周血中自然杀伤（NK）细胞数量及功能的变化。方法选取2015年9月至2016年5月天津医科大学总医院血液科住院的初诊ITP患者34例，完全缓解ITP患者32例及健康志愿者30名。采用流式细胞术检测外周血NK细胞及其亚群比例，NK细胞表面分子激活性受体NKp44、抑制性受体NKG2A及CD16，胞质蛋白穿孔素及颗粒酶β的表达水平，并将其与ITP患者的免疫状态及血小板水平做相关性分析。结果（1）NK细胞及其亚群占外周血淋巴细胞比例：NK细胞：初诊组（10.99%±4.89%）及完全缓解组（9.73%±6.75%）低于对照组（14.67%±7.24%）（P＝0.023、0.003）；Bright亚群：初诊组（0.48%±0.23%）及完全缓解组（0.41%±0.33%）低于对照组（0.64%±0.32%）（P＝0.037、0.002）；Dim亚群：初诊组（10.16%±5.02%）及完全缓解组（8.07%±5.74%）低于对照组（14.16%±7.19%）（P＝0.009、0.007）。（2）各亚群占NK细胞的比例：Bright亚群：初诊组（6.48%±4.33%）高于对照组（4.21%±2.70%）（P＝0.020）；Dim亚群：初诊组（93.51%±4.33%）低于对照组（95.79%±2.70%）（P＝0.020）。（3）激活性受体NKp44：初诊组低于完全缓解组及对照组[0.28%（0.95%）比0.61%（2.05%）、0.92%（0.90%），P＝0.047、0.048]；抑制性受体NKG2A：初诊组高于对照组（42.34%±23.86%比29.25%±12.83%，P＝0.009）；CD16：初诊组低于对照组（93.51%±4.33%比95.79%±2.70%，P＝0.020）。（4）穿孔素：初诊组低于对照组[87.52%（25.29%）比91.55%（8.29%），P＝0.025]；颗粒酶β 3组之间差异无统计学意义。（5）NK细胞与外周血杀伤T细胞（CD3＋CD8＋）、B1细胞（CD5＋CD19＋）呈负相关（r＝－0.387、－0.273，P＝0.012、0.028），与外周血辅助/杀伤T细胞比值（CD3＋CD4＋/CD3＋CD8＋）、血小板计数呈正相关（r＝0.358、0.314，P＝0.028、0.011）。结论ITP患者外周血NK细胞数量下降，发育障碍、功能降低，对自身反应性T、B细胞的抑制不足导致疾病的发生。

关键词：血小板减少杀伤细胞天然受体自然杀伤细胞穿孔素颗粒酶类

重型再生障碍性贫血CD8^(+)T细胞SLAMF6表达与穿孔素和颗粒酶B的相关性及其临床意义

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中华检验医学杂志 2021年第3期44卷 233-238页

作者：商保军杨世伟马荣军袁晓莉姜丽雷平冲刘忠文李玉龙董晓燕张琳张茵朱尊民河南省人民医院血液病研究所郑州大学人民医院郑州45000 河南省人民医院血液科郑州450003 河南省干细胞分化与调控重点实验室郑州450003

目的探讨初诊重型再生障碍性贫血(SAA)患者外周血CD8^(+)T细胞信号转导淋巴细胞激活分子家族6(SLAMF6)表达与穿孔素、颗粒酶B的相关性及其临床意义。方法收集2016年1月至2019年6月河南省人民医院收治的32例初诊SAA患者的血常规及骨髓象... 详细信息

目的探讨初诊重型再生障碍性贫血(SAA)患者外周血CD8^(+)T细胞信号转导淋巴细胞激活分子家族6(SLAMF6)表达与穿孔素、颗粒酶B的相关性及其临床意义。方法收集2016年1月至2019年6月河南省人民医院收治的32例初诊SAA患者的血常规及骨髓象等指标并采集外周血标本进行回顾性分析,采用流式细胞术检测患者初诊时及治疗结束后半年[移植11例,免疫抑制治疗(IST)21例]的标本中CD8^(+)T细胞SLAMF6表达量、穿孔素及颗粒酶B分泌量。采用Pearson法分析临床指标与标本检测结果相关性,并以10名健康人的外周血标本(正常对照组)及13例初诊骨髓增生异常综合征/阵发性睡眠性血红蛋白尿症(MDS/PNH)患者(MDS/PNH组)为对照进行SLAMF6表达量、穿孔素及颗粒酶B分泌量的比较。结果(1)初诊时:SAA组SLAMF6表达量为(56.40±6.37)%,明显低于正常组的(84.34±5.81)%和MDS/PNH组的(82.24±4.98)%(P均颗粒酶B的表达量为(36.23±7.94)%,高于正常对照组的(21.67±5.05)%和MDS/PNH组的(21.79±5.10)%(P均颗粒酶B(r=-0.908)均呈负相关(P均颗粒酶B表达量均低于治疗前(P均颗粒酶B表达量低于移植前(P均颗粒酶B表达量均低于治疗前(P均颗粒酶B表达量与治疗前比较,差异无统计学意义(P均>0.05)。结论SLAMF6在初诊SAA患者中低表达,与CD8^(+)T细胞效应因子呈负相关,或作为负性调控因子参与SAA患者CD8^(+)T细胞免疫调控,SLAMF6在造血恢复后明显上调,而治疗无效患者无明显变化,或可作为诊断SAA或评价SAA临床疗效的指标。

关键词：贫血,再生障碍性 T淋巴细胞穿孔素颗粒酶类

骨髓单个核细胞Coombs试验阳性血细胞减少症患者NK细胞数量及功能研究

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中华血液学杂志 2016年第5期37卷 393-398页

作者：袁鑫付蓉刘惠王一浩李丽娟刘春燕王红蕾邵媛媛丁凯陈瑾阮二宝王化泉宋嘉王国锦邵宗鸿天津医科大学总医院血液内科 300052

目的检测骨髓单个核细胞Coombs试验阳性血细胞减少症（CBCPC）患者外周血NK细胞数量和功能，探讨NK细胞在CBCPC发病中的作用机制。方法采用流式细胞术检测20例CBCPC初治患者、22例CBCPC缓解患者和12名健康志愿者外周血NK细胞及其亚群比... 详细信息

目的检测骨髓单个核细胞Coombs试验阳性血细胞减少症（CBCPC）患者外周血NK细胞数量和功能，探讨NK细胞在CBCPC发病中的作用机制。方法采用流式细胞术检测20例CBCPC初治患者、22例CBCPC缓解患者和12名健康志愿者外周血NK细胞及其亚群比例，表面激活性受体NKG2D、NKp46、NKp44，抑制性受体CD158a、CD158b及穿孔素、颗粒酶13的表达。结果①初治组、缓解组患者CD3CD56＋NK细胞比例显著低于对照组[分别为（10．04±5．33）％、（11．62±6．80）％、（19．94±7.38）％，P值均〈0．01]。②初治患者NK细胞激活性受体NKG2D比例（74．03±18．24）％显著高于缓解组患者[（45．97±29．45）％]和对照组[（41．89±15．34）％]（P值均〈O．01）。③初治患者NK细胞抑制性受体CD158a中位水平为3．72％（7．88％），显著低于缓解组的16．10％（26．43％）和对照组的11．04％（22．87％）（P值分别为0．015、0．025）。④初治、缓解患者NK细胞穿孔素比例分别为（75．71±10．14）％、（77．88±22．82）％，均显著高于对照组的（60．22±14．58）％（P值分别为0．018、0．008）。⑤初治和缓解患者NK细胞比例与穿孔素比例乘积分别为（7．68±4．54）％、（8．24±5．80）％，均显著低于对照组的（12．13±5．19）％（P值分别为0．011、0．023）；初治和缓解患者NK细胞比例与颗粒酶B比例乘积分别为（7．83±5．26）％、（8．37±6．83）％显著低于对照组的（14．79±8．37）％（P值分别为0．008、0．012）。结论初治CBCPC患者NK细胞比例降低，激活性受体表达增加，抑制性受体表达降低，提示NK细胞在CBCPC发病机制中起保护作用，但代偿不足。

关键词： Coombs试验杀伤细胞天然穿孔素颗粒酶类

噬血细胞性淋巴组织细胞增生症患儿及其家系穿孔素和颗粒酶B的表达

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中华血液学杂志 2016年第3期37卷 227-232页

作者：周晓姮罗建明宾琼黄小花广西医科大学第一附属医院儿科南宁530021

目的了解穿孔素1（PRF1）基因突变型的噬血细胞性淋巴组织细胞增生症（HLH）患儿穿孔素和颗粒酶B的表达水平，初步探讨PRF1基因突变与患儿免疫细胞功能和临床表现的关系。方法将8例（例1-8）治疗后HLH患儿、5例（例1-5）患儿的父母及同... 详细信息

目的了解穿孔素1（PRF1）基因突变型的噬血细胞性淋巴组织细胞增生症（HLH）患儿穿孔素和颗粒酶B的表达水平，初步探讨PRF1基因突变与患儿免疫细胞功能和临床表现的关系。方法将8例（例1-8）治疗后HLH患儿、5例（例1-5）患儿的父母及同胞纳入研究，以30名门诊体检正常健康儿童作为正常对照；采用PCR法分段扩增PRF1、Unc13D、STX11、STXBP2、RAB27A、LYST、 SH2D1A、BIRC4基因并直接测序；通过ExPASy网站在线分析系统进行PRF1蛋白构象生物信息学分析；采用流式细胞术检测细胞毒T淋巴细胞（CD8＋ T细胞）和NK细胞穿孔素和颗粒酶B的表达。结果①8例患儿中有3例存在PRF1外显子编码区杂合错义突变：例1为复合杂合错义突变R4C和R33H，其父、兄也存在相同突变；例2为杂合错义突变V50L，其母、弟也存在相同突变；例3为杂合错义突变R489W，其父不存在R489W，其母未参与检测，推测其突变来自母亲。例1、2、3可明确诊断为家族性HLH第2亚型（FHL2）。②例1及其父、兄以及例2及其母、弟的外周血CD8＋ T细胞穿孔素阳性率（0-1.48%）和NK细胞的穿孔素阳性率（8.69%-32.10%）较正常对照组明显减少，但两组间颗粒酶B表达未见明显差异。结论R4C和R33H复合杂合突变以及V50L杂合突变均可导致CD8＋ T淋巴细胞和NK细胞穿孔素表达减少，为FHL的致病突变。

关键词：淋巴组织细胞增多症嗜血细胞性基因 PRF1 天然穿孔素颗粒酶类

穿孔素和颗粒酶B在儿童传染性单核细胞增多症肝损伤中的表达及意义

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临床肝胆病杂志 2018年第9期34卷 1956-1959页

作者：姜涛李黎平易思思欧阳文献谭艳芳李双杰湖南省儿童医院肝病中心长沙410007 湖南省儿童医院儿科医学研究所长沙410007

目的观察传染性单核细胞增多症(IM)患儿外周血单个核细胞(PBMC)中CD8+T淋巴细胞和NK细胞中穿孔素及颗粒酶B的变化,探索其在肝损伤中的临床意义。方法选择2016年1月-2017年6月在湖南省儿童医院住院且符合IM诊断标准的患儿60例,以30例健... 详细信息

目的观察传染性单核细胞增多症(IM)患儿外周血单个核细胞(PBMC)中CD8+T淋巴细胞和NK细胞中穿孔素及颗粒酶B的变化,探索其在肝损伤中的临床意义。方法选择2016年1月-2017年6月在湖南省儿童医院住院且符合IM诊断标准的患儿60例,以30例健康儿童志愿者为对照组;通过细胞表面标记和细胞内细胞因子染色技术,采用流式细胞术分析PBMC中CD8+T淋巴细胞和NK细胞及其穿孔素及颗粒酶B的表达。计量资料2组间比较采用t检验,3组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用Dunnett-t法。结果在60例IM患儿中,肝损伤发生率50%(30/60),其中ALT颗粒酶B的表达均明显升高(P值均颗粒酶B的表达均明显升高(P值均颗粒酶B及CD8+T淋巴细胞高表达是造成IM肝损伤的原因。

关键词：疱疹病毒4型,人传染性单核细胞增多症穿孔素颗粒酶类儿童

特应性皮炎患者外周血皮肤归巢的CD8＋T细胞研究

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中华皮肤科杂志 2014年第1期47卷 19-21页

作者：张宝祥林茂段志武张佃财山东省潍坊市益都中心医院皮肤性病科 262500 大连医科大学附属第二医院皮肤性病科

目的探讨特应性皮炎（AD）患者外周血CD8＋T细胞皮肤归巢及杀伤功能相关蛋白的表达。方法15例AD患者和14例健康人，用流式细胞仪，检测外周血CD8＋T细胞、表达皮肤淋巴细胞相关抗原的CD8＋T细胞（CLA＋CD8＋T细胞）的比例。结果CD8＋T... 详细信息

目的探讨特应性皮炎（AD）患者外周血CD8＋T细胞皮肤归巢及杀伤功能相关蛋白的表达。方法15例AD患者和14例健康人，用流式细胞仪，检测外周血CD8＋T细胞、表达皮肤淋巴细胞相关抗原的CD8＋T细胞（CLA＋CD8＋T细胞）的比例。结果CD8＋T细胞比例在AD组和对照组之间差异无统计学意义（P〉0．05）；CD8＋T细胞穿孔素、颗粒酶B和FasL的表达在两组间差异亦无统计学意义（均P〉0．05oCLA＋CD8＋T细胞比例在AD组（3．80％±1．46％）高于健康对照组（2．18％±0．85％）（t=3．636，P〈0．叭），AD组CLA＋CD8＋T细胞比例与sc0RAD（SCORingofAtopicDermatitis）评分呈正相关（r=0．565，P〈0．05）；CCR4在CD8‘T细胞表达在AD组（13．86％±4．42％）高于健康对照组（9．50％±2．14％）（t=3．738，P〈0．01），而CCR10和CXCR6的表达在两组间差异均无统计学意义（P〉0．05）.CLA＋CD8＋T细胞穿孔素的表达在AD组（74．27％±15．94％）高于健康对照组（57．20％±14．64％）（t=2．998，P〈0．01），颗粒酶B的表达在AD组（70．90％-4-13．85％）也高于健康对照组（56．41％±11．00％）（t=3．104，P〈0．01），而FasL的表达在两组间差异无统计学意义（P〉0．05）.CLA＋CD8＋T细胞CCR4、CCR10和CXCR6的表达在AD组与对照组间差异无统计学意义（均P〉0．05o结论AD患者外周血CLA＋CD8＋T细胞数量增加，杀伤功能相关蛋白穿孔素、颗粒酶B的表达增强，可能参与了AD的发病。

关键词：皮炎特应性 CD8阳性T淋巴细胞皮肤淋巴细胞相关抗原颗粒酶类受体趋化因子

重型再生障碍性贫血患者CD8~+HLA-DR~+T淋巴细胞效应因子mRNA的表达

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中华医学杂志 2012年第18期92卷 1240-1243页

作者：刘春燕付蓉王珺梁勇瞿文阮二宝王化泉李丽娟刘惠王国锦刘鸿吴玉红王晓明宋嘉邢莉民关晶王红蕾张田刘晓邵宗鸿天津医科大学总医院血液肿瘤科

目的观察重型再生障碍性贫血(SAA)患者外周血CD8~+HLA-DR~+T淋巴细胞效应因子水平,进一步探讨SAA的免疫发病机制。方法采用免疫磁珠分选24例SAA初治患者及23名健康对照外周血CD8~+HLA-DR~+效应T细胞,半定量反转录PCR检测分选细胞穿孔素... 详细信息

目的观察重型再生障碍性贫血(SAA)患者外周血CD8~+HLA-DR~+T淋巴细胞效应因子水平,进一步探讨SAA的免疫发病机制。方法采用免疫磁珠分选24例SAA初治患者及23名健康对照外周血CD8~+HLA-DR~+效应T细胞,半定量反转录PCR检测分选细胞穿孔素、颗粒酶B、Fas配体(FasL)、肿瘤坏死因子β(TNF-β)mRNA表达情况。结果 SAA初治组CD8~+HLA-DR~+效应T细胞的穿孔素、颗粒酶B、FasL、TNF-βmRNA的表达量分别为0.66±0.25、0.56±0.26、0.77±0.24、0.58±0.16,均明显高于健康对照(0.53±0.14、0.40±0.13、0.61±0.16、0.46±0.15,P=0.042、0.012、0.011、0.011)。结论 CD8~+HLA-DR~+效应T细胞可能通过穿孔素、颗粒酶B途径、Fas/FasL途径及TNF-β途径损伤SAA患者骨髓造血细胞,在SAA免疫发病过程中发挥了重要作用。

关键词：贫血,再生障碍性颗粒酶类肿瘤坏死因子类穿孔素 Fas配体

槐耳清膏在小鼠心脏移植排斥反应中作用的初步探讨

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中华外科杂志 2009年第12期47卷 931-933页

作者：程琪朱鹏李丹黄致远梁慧芳陈义发陈孝平华中科技大学同济医学院附属同济医院肝脏外科中心武汉430030

目的探讨槐耳清膏在小鼠心脏移植急性排斥反应中的作用。方法实验分为3组：A组：同种异基因移植后槐耳清膏处理组（槐耳清膏组）；B组：同种异基因移植对照组（移植排斥组）及c组：同系移植对照组（同系移植组）。观察各组移植心脏的存... 详细信息

目的探讨槐耳清膏在小鼠心脏移植急性排斥反应中的作用。方法实验分为3组：A组：同种异基因移植后槐耳清膏处理组（槐耳清膏组）；B组：同种异基因移植对照组（移植排斥组）及c组：同系移植对照组（同系移植组）。观察各组移植心脏的存活时间、术后第5天供心的组织病理改变。用免疫荧光检测移植心脏中CD8^＋T淋巴细胞的浸润和颗粒酶B的表达水平。结果A组移植心脏的平均存活时间为（6．38±0．69）d，与B组（8．31±0．59）d相比明显缩短（P〈0．01）；心肌组织呈3级急性排斥反应病理改变，CD8^＋T淋巴细胞弥漫性浸润及颗粒酶B表达与两个对照组相比明显增强（P〈0．05）。结论在术后早期单用槐耳清膏会促进小鼠心脏移植物的急性排斥反应，可能机制是促进CD8^＋T淋巴细胞的组织浸润并增强颗粒酶B的表达。

关键词：心脏移植移植物排斥颗粒酶类

慢性乙型肝炎病毒感染者外周血自然杀伤细胞免疫效应分子的表达

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中华肝脏病杂志 2010年第2期18卷 96-100页

作者：李曼姚嫣高月求上海中医药大学附属曙光医院肝肾疾病病证教育部重点实验室 200021

目的研究慢性HBV感染者外周血自然杀伤细胞（NK细胞）免疫效应分子表达与感染状态的相关性。方法健康人作为对照组，慢性HBV感染者根据感染状态分为肝功正常高病毒复制组、肝功能正常低病毒复制组、肝功能异常高病毒复制组、肝功能异常... 详细信息

目的研究慢性HBV感染者外周血自然杀伤细胞（NK细胞）免疫效应分子表达与感染状态的相关性。方法健康人作为对照组，慢性HBV感染者根据感染状态分为肝功正常高病毒复制组、肝功能正常低病毒复制组、肝功能异常高病毒复制组、肝功能异常低病毒复制组。应用流式细胞法检测外周血NK细胞的穿孔素（PF）、颗粒酶B（Gr B）、颗粒溶素（GNLY）、肿瘤坏死因子（TNF）α和干扰素（IFN）γ的表达，分析其与感染状态的相关性。组间比较用单因素方差分析；相关性分析采用直线相关Pearson分析。结果阳性细胞百分比同对照组（31．50％±27．64％）相比，肝功能正常高病毒复制组（59．74％±30．82％）和肝功能正常低病毒复制组（61．89％±33．30％）的GNLY表达增加有统计学意义；同对照组（57．38％±23．69％）相比，肝功正常高病毒复制组（39．89％±21．30％）、肝功能异常高病毒复制组（37．54％±18．79％）的IFNγ表达降低，P值均〈0．05，差异有统计学意义；肝功能正常高病毒复制组的PF、Gr B、GNLY（阳性细胞百分比分别为56．98％±38．34％、81．53％±19．58％、59．74％±30．82％）和肝功能正常低病毒复制组的PF、Gr B、GNLY（阳性细胞百分比分别为62．95％±31．98％、84．51％±14．57％、61．89％±33．30％）表达高于肝功能异常高病毒复制组（阳性细胞百分比分别为35．47％±29．64％，66．55％±22．92％，42．03±33．17％），P值均〈0．05，差异有统计学意义；除了TNFα和GNLY不具有相关性外，PF、Gr B、GNLY、TNF仅和IFNY之间呈两两正相关关系。结论高病毒复制水平的HBV感染者外周血NK细胞表达的IFNγ明显低于正常对照组；肝功能正常的HBV感染者外周血NK细胞表达的PF、Gr B、GNLY水平明显高于肝功能异常者。

关键词：肝炎病毒,乙型颗粒酶类干扰素γ 肿瘤坏死因子α 穿孔素颗粒溶素