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在顺铂耐药的A549/DDP人肺腺癌细胞中乙醛脱氢酶表达增加

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细胞与分子免疫学杂志 2015年第5期31卷 625-629页

作者：何进喜宋旭梅于亮李靖乔志雄氿睿余博刘晓明宁夏医科大学普胸外科宁夏银川750004 宁夏医科普胸外科宁夏银川750004 宁夏医科干细胞研究所宁夏银川750004

目的观察乙醛脱氢酶(ALDH)在A549/DDP人肺腺癌耐顺铂细胞中的表达及在顺铂耐药性中的功能。方法流式细胞术检测肿瘤干细胞标志分子CD44、CD90、CD73、CD105、上皮细胞黏附分子(Ep CAM)、ATP结合盒式超家族G成员2(ABCG2)以及ALDH在A549... 详细信息

目的观察乙醛脱氢酶(ALDH)在A549/DDP人肺腺癌耐顺铂细胞中的表达及在顺铂耐药性中的功能。方法流式细胞术检测肿瘤干细胞标志分子CD44、CD90、CD73、CD105、上皮细胞黏附分子(Ep CAM)、ATP结合盒式超家族G成员2(ABCG2)以及ALDH在A549细胞和A549/DDP细胞表达的阳性率;MTT法检测100μmol/L二乙氨基苯甲醛(DEAB)处理前后A549/DDP细胞的增殖能力和对顺铂的敏感性;实时定量PCR检测ALDH各亚型在A549细胞与A549/DDP细胞中的mRNA水平的表达;Western blot法检测实时定量PCR有明显差异结果的ALDH的亚型ALDH1A3和ALDH1B1在A549细胞与A549/DDP细胞中的蛋白水平的表达。结果与A549细胞相比,ABCG2和ALDH在A549/DDP细胞的阳性率增加,ALDH阳性率达97.7%,在A549细胞中仅仅为4.3%;CD44、CD90、CD73、CD105在二者间阳性率无明显差异,而Ep CAM在A549/DDP细胞阳性率降低;经100μmol/L DEAB处理后,A549/DDP细胞对顺铂的耐药性显著低于未处理前;与A549细胞相比,ALDH1A3和ALDH1B1的mRNA在A549/DDP细胞中表达水平增高;ALDH1B1蛋白表达升高,ALDH1A3表达降低。结论 ALDH可作为顺铂耐药人肺腺癌细胞的标志分子之一,其中ALDH1B1在顺铂耐药性中可能发挥一定作用,为临床上治疗肺腺癌耐药患者提供新的治疗靶点和策略。

关键词： A549/DDP 顺铂耐药乙醛脱氢酶

CircPTK2调节miR-761/CPEB2轴对结直肠癌细胞顺铂耐药性的影响

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热带医学杂志 2023年第12期23卷 1645-1653,1796页

作者：徐晓忠赵飞龙张家港市中医医院普外科江苏张家港215600

目的探讨环状RNA蛋白酪氨酸激酶2(circPTK2)对结直肠癌(CRC)细胞顺铂(DDP)耐药性的影响。方法收集56例CRC样本(CRC组)及癌旁正常组织样本(对照组),体外培养人CRC细胞系(LoVo、HT-29、HCT116、SW480和SW620)和人正常结直肠粘膜细胞系(FH... 详细信息

目的探讨环状RNA蛋白酪氨酸激酶2(circPTK2)对结直肠癌(CRC)细胞顺铂(DDP)耐药性的影响。方法收集56例CRC样本(CRC组)及癌旁正常组织样本(对照组),体外培养人CRC细胞系(LoVo、HT-29、HCT116、SW480和SW620)和人正常结直肠粘膜细胞系(FHC),并建立DDP耐药的HCT116细胞(HCT116/DDP)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测组织/细胞中circPTK2、miR-761和细胞质多聚腺苷酸结合蛋白2(CPEB2)mRNA表达。取HCT116/DDP细胞分为对照(Control)组、si-NC组、si-circPTK2组、si-circPTK2+inhibitor-NC组、si-circPTK2+miR-761 inhibitor组。细胞计数试剂盒8(CCK-8)法测量各组细胞活力和DDP的半数抑制浓度(IC_(50))和增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell检测细胞迁移或侵袭数;Western blot检测细胞中CPEB2蛋白表达;qRT-PCR检测circPTK2水平;starBase数据库(http://***/)预测miR-761与circPTK2或CPEB2的互补位点;将含有miR-761结合位点的circPTK2或CPEB23’UTR的野生型(WT)序列克隆到psiCHECK-2载体中以形成相应的荧光素酶报告载体(WT-circPTK2和WT-CPEB2),双荧光素酶报告基因分析系统检测荧光素酶活性;RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)测定Ago2或IgG RIP复合物中circPTK2、miR-761和CPEB2的富集水平。结果与对照组比较,CRC组患者癌组织中circPTK2、CPEB2 mRNA表达水平升高[(2.03±0.36)vs.(1.02±0.13)、(2.55±0.44)vs.(1.01±0.12)],而miR-761表达水平降低[(0.41±0.07)vs.(1.00±0.10)],差异均有统计学意义(P均耐药患者癌组织中circPTK2、CPEB2 mRNA表达水平高于DDP敏感患者,而miR-761表达水平低于DDP敏感患者,差异均有统计学意义(t=12.983、10.352、12.459,P均<0.001)。与FHC细胞比较,CRC细胞系(LoVo、HT-29、HCT116、SW480和SW620)中circPTK2和CPEB2 mRNA的表达水平显著升高,miR-761的表达水平显著降低,差异均有统计学意义(P均<0.001);且HCT116细胞中circPTK2和CPEB2 mRNA的表达水平高于其他CRC细胞系,miR-761的表达水平低于其他CRC细胞系,因此,选择HCT116细胞进行后续实验。与Control组和siNC组比较,si-circPTK2组circPTK2、CPEB2 mRNA和蛋白水平显著降低,miR-761水平显著升高,差异均有统计学意义(P均<0.05);与si-circPTK2组、si-circPTK2+inhibitor-NC组比较,si-circPTK2+miR-761 inhibitor组CPEB2 mRNA和蛋白水平显著升高,miR-761水平显著降低,差异均有统计学意义(P均<0.05)。与Control组和si-NC组比较,sicircPTK2组HCT116/DDP细胞中DDP的IC_(50)、细胞增殖活力(48、72 h)、迁移细胞数和侵袭细胞数降低,差异均有统计学意义(P均<0.05);与si-circPTK2组、si-circPTK2+inhibitor-NC组比较,si-circPTK2+miR-761 inhibitor组HCT116/DDP细胞中DDP的IC_(50)、细胞增殖活力(48、72 h)、迁移细胞数和侵袭细胞数升高,差异均有统计学意义(P均<0.05)。与Control组和si-NC组比较,si-circPTK2组HCT116/DDP细胞凋亡率升高,差异均有统计学意义(P均<0.05);与si-circPTK2组、si-circPTK2+inhibitor-NC组比较,si-circPTK2+miR-761 inhibitor组HCT116/DDP细胞凋亡率降低,差异均有统计学意义(P均<0.05)。生物信息学分析显示,circPTK2和miR-761存在靶向结合序列;双荧光素酶检测结果显示,与转染miR-N

关键词：结直肠癌环状RNA蛋白酪氨酸激酶2 顺铂耐药 miR-761 细胞质多聚腺苷酸结合蛋白2

白杨素通过下调Annexin A3逆转人肺腺癌A549/DDP细胞顺铂的耐药性

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贵州医科大学学报 2023年第7期48卷 800-806页

作者：刘晖杰彭荣许华湖北文理学院附属襄阳市中心医院肿瘤科湖北襄阳441021 宜城市人民医院肿瘤科湖北襄阳441021 湖北文理学院附属襄阳市中心医院审计处湖北襄阳441021

目的观察白杨素对肺腺癌顺铂(DDP)耐药性细胞A549/DDP耐药敏感性的影响。方法取A549和A549/DDP细胞,qRT-PCR及Western blot法检测膜联蛋白A3(Annexin A3)基因及蛋白表达,CCK-8法测不同浓度白杨素(0、5、25、50、100 mmoL/L)干预后细胞... 详细信息

目的观察白杨素对肺腺癌顺铂(DDP)耐药性细胞A549/DDP耐药敏感性的影响。方法取A549和A549/DDP细胞,qRT-PCR及Western blot法检测膜联蛋白A3(Annexin A3)基因及蛋白表达,CCK-8法测不同浓度白杨素(0、5、25、50、100 mmoL/L)干预后细胞生存率;将A549/DDP细胞分为A549/DDP组、白杨素组(50 mol/L)、Annexin A3过表达组(Annexin A3mimic组)、Annexin A3阴性对照组(Annexin A3 NC)、白杨素+Annexin A3mimic组,另取A549细胞正常培养作为空白对照组;CCK-8法检测细胞对DDP的半数生存浓度(IC50)及耐药指数;qRT-PCR和Western blot法检测Annexin A3基因和蛋白表达水平,流式细胞义监测细胞凋亡率,小鼠荷瘤实验检测移植瘤体积。结果不同浓度的白杨素均能时效依赖性和剂量依赖性降低A549、A549/DDP细胞生存率(P耐药指数均升高,凋亡率降低(P耐药指数、Annexin A3 mRNA及蛋白表达降低,细胞凋亡率升高(P耐药指数、Annexin A3 mRNA及蛋白表达升高,细胞凋亡率降低(P耐药性。

关键词：肺腺肿瘤白杨素膜联蛋白A3 顺铂耐药 A549/DDP细胞

miR-149-5p靶向DCLK1基因对乳腺癌细胞MCF-7/DDP顺铂耐药的影响

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生物技术 2023年第2期33卷 202-207页

作者：朱会利王清云邯郸市中西医结合医院普外科河北邯郸056001 邢台医学高等专科学校第一附属医院检验科河北邢台054001

[目的]探讨miR-149-5p靶向双皮质素样激酶1(DCLK1)基因对乳腺癌细胞MCF-7/DDP顺铂耐药的影响。[方法]构建DDP耐药乳腺癌MCF-7细胞,然后按细胞转染质粒的不同分入对照组(不转染质粒)、空载组(转染空载质粒3.1)、miRNA-149-5p组(转染miRNA... 详细信息

[目的]探讨miR-149-5p靶向双皮质素样激酶1(DCLK1)基因对乳腺癌细胞MCF-7/DDP顺铂耐药的影响。[方法]构建DDP耐药乳腺癌MCF-7细胞,然后按细胞转染质粒的不同分入对照组(不转染质粒)、空载组(转染空载质粒3.1)、miRNA-149-5p组(转染miRNA-149-5p-AH质粒)。采用CCK-8法检测细胞存活率,划痕实验检测细胞迁移力,流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR检测细胞miRNA-149-5p和DCLK1 mRNA水平,Western Bloting检测细胞DCLK1蛋白表达水平。[结果] miRNA-149-5p组乳腺癌MCF-7/DDP细胞miRNA-149-5p水平、细胞凋亡率显著高于对照组和空载组,DCLK1 mRNA和蛋白水平、细胞存活率和细胞迁移率显著低于对照组和空载组,差异均有统计学意义(P0.05)。[结论]过表达miRNA-149-5p可减弱乳腺癌MCF-7/DDP细胞的顺铂耐药性,使乳腺癌细胞增殖和迁移率降低,凋亡增加,其机制可能与靶向抑制DCLK1的表达有关。

关键词： miRNA-149-5p 双皮质素样激酶1 乳腺癌顺铂耐药

miR-298通过抑制TAZ改善耐药肺癌细胞株的耐药性

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临床医学进展 2023年第3期13卷 4663-4672页

作者：王灵杰单立群章雪林温岭市第一人民医院胸外科浙江温岭

目的:寻找在肺癌耐药性生成中起到调节作用的miRNA,研究miR-298在肺癌耐药细胞株中的表达规律及作用,探讨miR-298通过靶向TAZ调节耐药肺癌细胞株的作用,为肺癌寻找新的治疗靶点。方法:利用生物信息学技术分析顺铂耐药与敏感的肺癌病人... 详细信息

目的:寻找在肺癌耐药性生成中起到调节作用的miRNA,研究miR-298在肺癌耐药细胞株中的表达规律及作用,探讨miR-298通过靶向TAZ调节耐药肺癌细胞株的作用,为肺癌寻找新的治疗靶点。方法:利用生物信息学技术分析顺铂耐药与敏感的肺癌病人中差异表达的miRNA,通过建立顺铂耐药的肺癌细胞株模型,验证miR-298表达下调。利用miR-298 mimics转染,验证miR-298对耐药肺癌细胞株的作用,通过转染WB,RT-PCR、双荧光素酶报告实验验证miR-298对TAZ的靶向调控作用,通过转染TAZ-siRNA检测TAZ在肺癌耐药株中的作用。结果:我们通过生物信息学技术发现miR-298在顺铂耐药的肺癌病人标本中低表达,在顺铂耐药肺癌细胞呈低表达,通过miR-298 mimics转染可以增高miR-298的表达量,可以在一定程度上改善顺铂的耐药性,同时抑制细胞的克隆形成。TAZ在肺癌耐药细胞中表达增高,miR-298可以靶向下调TAZ的表达,而敲低顺铂耐药细胞株中的TAZ,可以改善顺铂耐药,抑制细胞克隆形成。结论:miR-298在肺癌耐药中发挥重要的调节作用,通过上调miR-298可以改善肺癌的耐药性,miR-298可能是通过靶向抑制TAZ发挥作用的。

关键词： miR-298 非小细胞肺癌顺铂耐药 TAZ

LncRNA MVIH通过调节let-7b-5p促进胃癌细胞顺铂耐药

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包头医学院学报 2023年第10期39卷 11-17,22页

作者：胡婷李琦梅汪婷婷曾会会汪子书蚌埠医学院第一附属医院肿瘤内科安徽蚌埠233000

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)MVIH与胃癌细胞顺铂耐药的关系及其调控机制。方法:构建胃癌顺铂耐药细胞,CCK8法检测细胞增殖能力和顺铂半数抑制浓度(IC50),并计算耐药系数;实时定量PCR(qRT-PCR)分析耐药细胞中lncRNA MVIH和let-7b-5p... 详细信息

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)MVIH与胃癌细胞顺铂耐药的关系及其调控机制。方法:构建胃癌顺铂耐药细胞,CCK8法检测细胞增殖能力和顺铂半数抑制浓度(IC50),并计算耐药系数;实时定量PCR(qRT-PCR)分析耐药细胞中lncRNA MVIH和let-7b-5p的表达情况;流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白Bax和Caspase3的表达;通过lncLocator数据库和lncRNASNP2数据库分析lncRNA MVIH在细胞中的分布情况和可能调控的miRNA,双萤光素酶报告基因实验进行验证;生物信息学分析let-7b-5p在胃癌和癌旁组织的表达情况以及对胃癌预后的影响。结果:胃癌顺铂耐药细胞MGC803R中lncRNA MVIH的表达高于其亲本细胞MGC803(P顺铂诱导的细胞凋亡,凋亡相关蛋白Bax和Caspase3显著上调,同时抑制了其增殖(P顺铂敏感性的调控。结论:LncRNA MVIH通过调节let-7b-5p促进胃癌细胞顺铂耐药。

关键词： LncRNA MVIH 胃癌顺铂耐药 let-7b-5p

E3泛素连接酶RNF216通过激活ERK信号通路促进非小细胞肺癌顺铂耐药

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E3泛素连接酶RNF216通过激活ERK信号通路促进非小细胞肺癌顺铂耐药

作者：郭鑫苏州大学

学位级别：硕士

泛素化在真核生物的信号转导、细胞分裂和分化等方面都有至关重要的作用。研究发现E2泛素结合酶、E3泛素连接酶和去泛素化酶与多种癌症的转移相关,且E3泛素连接酶在调节多能性肿瘤干细胞的化疗耐药方面也发挥着不可忽视的作用。迄今为... 详细信息

泛素化在真核生物的信号转导、细胞分裂和分化等方面都有至关重要的作用。研究发现E2泛素结合酶、E3泛素连接酶和去泛素化酶与多种癌症的转移相关,且E3泛素连接酶在调节多能性肿瘤干细胞的化疗耐药方面也发挥着不可忽视的作用。迄今为止E3泛素连接酶在癌症中参与调节化疗耐药的作用机制仍不清楚,有待进一步探索。非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)是肺癌的主要类型,易转移且耐化疗。顺铂化疗是目前治疗NSCLC最有效的方法,而肿瘤细胞耐药性的发展是NSCLC顺铂化疗失败的主要因素。我们了解到泛素化分为单泛素化和多泛素化,泛素化分子之间通过赖氨酸或蛋氨酸残基(如K48、K63和M1)结合,形成结构上和功能上不同的泛素聚合物(Ub)。K48-Ub利用26S蛋白酶体复合物对底物进行降解,而K63-Ub调节信号转导和基因表达。有研究表明环指蛋白 216(Ring finger protein 216,RNF216)是一种 E3 泛素化连接酶,具有 K48-Ub和K63-Ub的功能。然而RNF216是否参与NSCLC顺铂耐药以及其相关机理仍待研究。本论文研究中,通过分析数据库中NSCLC患者与健康受试者RNF216的表达情况,发现NSCLC患者样本中RNF216的表达高于健康受试者;在高表达RNF216的NSCLC细胞株中我们敲低RNF216的表达,探讨RNF216调节NSCLC的作用机制。通过研究发现,敲低RNF216可以促使顺铂诱导的NSCLC细胞处于G2/M期并且抑制Twist的表达。进一步研究发现RNF216可以通过上调切除修复交叉互补基因 1(Excision repair cross-complementation group 1,ERCC1)促进修复顺铂诱导的DNA损伤和Twist入核发挥作用,诱导肿瘤细胞耐药。研究表明,RNF216可以通过K63-Ub激活细胞外调节蛋白激酶(Extracellular regulated protein kinases,ERK)信号通路;并且顺铂对裸鼠体内敲低RNF216的异种移植瘤有很好的治疗效果。综上,我们发现RNF216通过促进P-ERK的K63-Ub泛素化,从而激活ERK信号通路,促进修复顺铂诱导的DNA损伤和Twist入核,诱导肿瘤细胞耐药。

关键词： E3泛素化连接酶RNF216 NSCLC 顺铂耐药 ERK信号通路

干扰COL11A1基因表达对人卵巢癌细胞侵袭及耐药性影响

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中华肿瘤防治杂志 2019年第13期26卷 908-916页

作者：冯晓杰李雷郑州大学附属肿瘤医院妇瘤科

目的卵巢癌是常见妇科恶性肿瘤之一,耐药是上皮性卵巢癌治疗的一大挑战,克服耐药在卵巢癌临床治疗中至关重要.本研究旨在探讨COL11A1基因表达对卵巢癌顺铂耐药细胞(A2780-cis/IGROV1-cis)影响及其可能机制.方法采用免疫荧光技术和蛋白... 详细信息

目的卵巢癌是常见妇科恶性肿瘤之一,耐药是上皮性卵巢癌治疗的一大挑战,克服耐药在卵巢癌临床治疗中至关重要.本研究旨在探讨COL11A1基因表达对卵巢癌顺铂耐药细胞(A2780-cis/IGROV1-cis)影响及其可能机制.方法采用免疫荧光技术和蛋白质印迹法检测COL11A1基因在卵巢癌顺铂耐药细胞(A2780-cis/IGROV1-cis)和敏感性细胞(A2780/IGROV1)中表达情况;采用蛋白质印迹法检测COL11 A1在耐药组细胞(A2780-cis/IGROV1-cis)和干扰组细胞(A2780-cis/IGROV1-cis细胞转染COL11A1 siRNA质粒)和对照组(A2780-cis/IGROV1-cis细胞转染空载质粒)细胞中表达情况;采用Transwell侵袭实验、细胞划痕实验和平板克隆形成实验检测COL11A1对A2780 cis/IGROV0 cis细胞迁移、侵袭和克隆形成能力影响;流式细胞术检测COL11A1对A2780 cis/IGROV0 cis细胞凋亡影响;蛋白质印迹法检测卵巢癌干细胞标志物CD44、ALDH1和SOX2蛋白表达水平.结果耐药组细胞COL11A1荧光强度以及蛋白表达与敏感组细胞相比增强.A2780-cis组:COL01A1干扰组细胞COL11A1表达量为0.240±0.049,低于对照组(0.847±0.035)和耐药组(0.883±0.020),F=95.78,P耐药组(0.887±0.035),F=72.91,P顺铂处理48 h后,A2780 cis细胞:干扰组细胞克隆形成能力为55±8,低于对照组(270±8),t-19.91,P耐药组.结论干扰COL11A1基因表达可逆转卵巢癌顺铂耐药细胞的耐药性,COL11A1与干细胞标志物联合可能具有预后预测意义.

关键词： COL11A1 卵巢癌顺铂耐药 A2780-cis/IGROV1-cis

MARK2在骨肉瘤细胞顺铂耐药中的作用及机制研究

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MARK2在骨肉瘤细胞顺铂耐药中的作用及机制研究

作者：魏贤府山东大学

学位级别：硕士

研究背景骨肉瘤是儿童和青少年中最常见的原发性恶性骨肿瘤。骨肉瘤的治疗方案主要包括手术,新辅助化疗和辅助化疗,在标准治疗方案下非转移性骨肉瘤患者的五年生存率保持在70%左右。但转移性患者的预后降低,对初始治疗的反应不佳,5年总... 详细信息

研究背景骨肉瘤是儿童和青少年中最常见的原发性恶性骨肿瘤。骨肉瘤的治疗方案主要包括手术,新辅助化疗和辅助化疗,在标准治疗方案下非转移性骨肉瘤患者的五年生存率保持在70%左右。但转移性患者的预后降低,对初始治疗的反应不佳,5年总生存率低于25%。顺铂（DDP）为主的化疗方案是骨肉瘤的标准治疗方案。化疗耐药性,尤其是顺铂耐药性是骨肉瘤复发和预后的主要挑战。研究报道有很多机制可以导致化疗耐药,包括减少药物流入、增加药物流出、解毒系统的激活、药物靶点的改变、增强DNA修复、细胞凋亡受损和癌基因表达的改变。因此,迫切需要寻找一种可以有效影响骨肉瘤化疗耐药性和改善预后的新型生物标志物。微管亲和调节激酶2（MARK2）是MARK家族成员之一,是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,在神经分化、神经变性、细胞极化、细胞内转运和细胞迁移等方面发挥重要作用。近年来的研究发现,MARK2与肿瘤的恶性生物学行为和耐药性密切相关。在顺铂耐药的Hela细胞株中发现了 MARK2的过度表达。MARK2基因沉默后,宫颈癌细胞对顺铂的敏感性增加,但对长春新碱和紫杉醇的敏感性没有明显变化。MARK2与非小细胞肺癌的DNA损伤反应和顺铂耐药相关。然而,MARK2在骨肉瘤顺铂耐药中的作用及机制尚不清楚。增加药物外排和抑制细胞凋亡是化疗耐药的两个重要原因。P-糖蛋白（P-gp）是一种跨膜糖蛋白,被认为是一种能量依赖性药物外排泵,可降低细胞内化疗药物浓度。越来越多的证据表明P-gp的过度表达在肿瘤的多药耐药中起重要作用。此外,研究表明P-gp的高表达与骨肉瘤的化疗耐药有关,并与预后不良有关。细胞凋亡是化疗诱导细胞死亡的主要方式,而且研究表明,凋亡相关基因p53、BCL-2、BAX等的表达与骨肉瘤的细胞耐药有关。先前的研究表明,在很多肿瘤中,P-gp的表达与化疗耐药相关,并且受PI3K/AKT/NF-κB通路的调控。此外,研究表明AKT/NF-κB通路参与调节骨肉瘤的耐药性。然而,MARK2是否通过PI3K/AKT/NF-κB信号途径调节P-gp的表达和细胞凋亡从而促进骨肉瘤细胞对顺铂的耐药,尚待进一步研究。研究目的化疗耐药是骨肉瘤治疗和预后的主要临床挑战。本研究旨在探讨MARK2在骨肉瘤顺铂耐药中的作用和分子机制。研究方法我们首先分析了公开数据库骨肿瘤患者中MARK2与化疗耐药和临床预后的关系。接下来,蛋白质印迹实验（Western blot）分析了 MARK2在骨肉瘤细胞系和正常成骨细胞系中的表达情况。然后在体内和体外实验中研究了 MARK2在骨肉瘤顺铂耐药中的作用。使用CCK-8分析、蛋白质印迹实验、免疫荧光实验、qRT-PCR、细胞凋亡和挽救实验来研究MARK2过表达和沉默后对顺铂耐药、P-gp表达、细胞凋亡和PI3K/AKT/NF-κB信号通路的影响。研究结果1.GEO数据库分析表明,MARK2高表达的骨肉瘤患者总生存率较低,对化疗反应较差。Spearman秩相关分析发现骨肉瘤患者MARK2和P-gp mRNA表达之间呈正相关的关系。与正常成骨细胞相比,MARK2在骨肉瘤细胞中表达显着上调。小干扰siRNA敲低了 MG-63和MNNG/HOS细胞系的MARK2水平后,P-gp表达水平随着下降。抑制P-gp可以降低骨肉瘤细胞顺铂耐药。这些结果说明MARK2的高表达与骨肉瘤的预后不良有关,可能与化学耐药呈正相关。2.在体外和体内实验中,过表达和敲低MARK2分别促进和抑制骨肉瘤细胞对顺铂的耐药性。过表达MARK2增加了骨肉瘤细胞系对顺铂的IC5。,同时抑制了裸鼠异种移植骨肉瘤中顺铂诱导的肿瘤体积减少率。敲低MARK2,降低了骨肉瘤细胞系对顺铂的IC50,同时增加了异种移植骨肉瘤肿瘤中顺铂诱导的肿瘤体积减少率。3.过表达MARK2促进骨肉瘤细胞P-gp的表达,抑制骨肉瘤细胞的凋亡率,并且促进 PI3K/AKT/NF-κB 信号通路中 p-PI3K p85,p-AKT,p-NF-κB/p65 和p-IκB-α的蛋白水平升高。敲低MARK2,抑制骨肉瘤细胞P-gp的表达,促进骨肉瘤细胞的凋亡,并且抑制PI3K/AKT/NF-κB信号通路中p-PI3K p85,p-AKT,p-NF-κB/p65 和 p-IκB-α 的蛋白水平。4.挽救实验证明,在过表达MARK2并用LY294002处理的骨肉瘤细胞中,顺铂IC50值部分下调,同时凋亡细胞比例部分升高,P-gp,p-AKT,p-NF-κB/p65和BCL-2的表达受到抑制,而BAX和cleaved caspase 3的表达水平则升高。MARK2的表达不受影响。这表明PI3K抑制剂一定程度上挽救了 MARK2过表达对顺铂耐药性的作用,进一步明确了 MARK2通过激活PI3K/AKT/NF-κB信号通路来调节P-gp表达和细胞凋亡,从而促进骨肉瘤细胞的顺铂耐药。结论MARK2的高表达与骨肉瘤的不良预后和化疗耐药有关。MARK2可以通过

关键词：骨肉瘤微管亲和调节激酶2 顺铂耐药 P-糖蛋白细胞凋亡