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柔嫩艾美耳球虫保守蛋白CHP39基因特性的初步研究

柔嫩艾美耳球虫保守蛋白CHP39基因特性的初步研究

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中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十三次学术研讨会

作者：翟颀黄兵董辉朱顺海赵其平梁思婷李莎杨斯涵韩红玉中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点实验室上海师范大学生命与环境科学学院云南农业大学动物科学技术学院

本实验室前期利用酵母双杂交技术,以柔嫩艾美耳球虫顶体膜抗原1(EtAMA1)为诱饵,筛选了柔嫩艾美耳球虫子孢子酵母双杂交cDNA文库,获得一些潜在的与EtAMA1相互作用蛋白的ESTs序列。本研究选择其中一条编号为CHIP39的EST序列进行研究。该... 详细信息

本实验室前期利用酵母双杂交技术,以柔嫩艾美耳球虫顶体膜抗原1(EtAMA1)为诱饵,筛选了柔嫩艾美耳球虫子孢子酵母双杂交cDNA文库,获得一些潜在的与EtAMA1相互作用蛋白的ESTs序列。本研究选择其中一条编号为CHIP39的EST序列进行研究。该序列含有3,末端的Ploy(A)尾,利用5’RACE技术获得了该基因的全长cDNA序列,并对该基因的生物信息学信息、转录水平分析、免疫定位分析和体外抑制等进行了研究。研究结果表明,该基因全长1344bp,ORF长873bp,编码290个氨基酸,预测分子量为32.6kDa,无跨膜结构和信号肽,没有保守结构域,具有多个抗原位点,与柔嫩艾美耳球虫保守的假象蛋白(hypothetical protein,conserved,ETH 00029745)100%同源,因此,将该基因命名为EtCHP39。EtCHP39基因在球虫4个发育阶段均有转录,但转录水平不同,其中在孢子化卵囊阶段转录水平最高,其次在未孢子化卵囊的转录水平高于子孢子和裂殖子的,表明其转录水平受到虫体阶段性的调控。对EtCHP39蛋白进行原核表达,纯化,制备多抗。Western-blot分析表明重组蛋白EtCHP39具有良好的抗原性。采用间接免疫荧光技术对EtCHP39蛋白在球虫不同发育阶段的分布进行了分析,发现其在入侵前主要位于子孢子的顶端,当准备入侵时分泌到子孢子的表面以及顶端;子孢子入侵细胞2h后,该蛋白主要位于虫体的顶端,24h后,蛋白的表达增加,且逐渐往虫体的后端分泌,当虫体发育为裂殖子时,该蛋白主要位于裂殖子的顶端。通过体外抑制实验检测不同浓度的EtCHP39多抗对子孢子入侵DF-1细胞的影响,发现anti-rEtCHP39抗体作用子孢子后,与对照组相比,子孢子入侵DF-1细胞的能力下降,且随着抗体浓度的不断增大,作用后子孢子入侵力逐渐降低,抗体抑制率逐渐升高,当抗体浓度为400μg/mL,抑制率为30%左右。以上结果为进一步研究柔嫩艾美耳球虫CHP39蛋白的功能提供了重要参考依据。

关键词：球虫顶体膜抗原1 保守蛋白 EtCHIP39 入侵

来源： cnki会议评论

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