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索氏六须鲶受精细胞学研究

东北林业大学学报 2003年第6期31卷 46-48页

作者：尹洪滨孙中武刘玉堂潘伟志王宏伟中国水产科学研究院黑龙江水产研究所哈尔滨150070 东北林业大学

采用连续切片显微观察的方法对索氏六须鲶成熟卵的受精细胞进行了研究。结果显示 ,精子入卵刺激卵细胞形成胚盘 ,精子头部在胚盘中逐渐核化 ,形成雄性原核 ;卵母细胞放出第二极体 ,完成第二次成熟分裂 ,形成雌性原核 ,两性原核结合成合... 详细信息

采用连续切片显微观察的方法对索氏六须鲶成熟卵的受精细胞进行了研究。结果显示 ,精子入卵刺激卵细胞形成胚盘 ,精子头部在胚盘中逐渐核化 ,形成雄性原核 ;卵母细胞放出第二极体 ,完成第二次成熟分裂 ,形成雌性原核 ,两性原核结合成合子核 ;合子核膜消失 ,产生第一次卵裂 ,受精全过程历时 50min。

关键词：索氏六须鲶受精细胞学连续切片显微观察雄性原核卵母细胞雌性原核

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甘丙肽过表达基因片段的构建及显微注射

甘丙肽过表达基因片段的构建及显微注射

作者：郭永昌山西医科大学

学位级别：硕士

目的为了在整体水平研究甘丙肽的功能，构建了神经特异表达甘丙肽过表达载体，并进行显微注射以制作转基因小鼠。由于在正常生理过程中，甘丙肽表达水平比较低，只有在某些病态下甘丙肽表达才会有异常的变化，故制作转基因小鼠，以研... 详细信息

目的为了在整体水平研究甘丙肽的功能，构建了神经特异表达甘丙肽过表达载体，并进行显微注射以制作转基因小鼠。由于在正常生理过程中，甘丙肽表达水平比较低，只有在某些病态下甘丙肽表达才会有异常的变化，故制作转基因小鼠，以研究内源性释放的甘丙肽的功能及作用机制，为相关疾病提供新的治疗线索。方法首先提取C57BL/6J小鼠脑组织中总RNA和基因组DNA，分别以总RNA和DNA为模板，用RT-PCR技术获得甘丙肽的cDNA编码区，再用PCR技术获得甘丙肽5′非编码区和3′非编码区，然后用重叠延伸PCR技术连接上述片段，获得甘丙肽目的基因，将目的基因上游插入PDGFβ-链启动子，将重组质粒命名为PDGF-GAL;重组质粒PDGF-GAL经XbaⅠ、HindⅢ双酶切，将连接有启动子的甘丙肽基因片段回收纯化后，用显微注射法将甘丙肽基因注入受精卵的雄原核中，选取发育正常的受精卵移植到假孕母鼠的输卵管壶腹部，待其产仔。结果甘丙肽目的基因经测序鉴定，与GenBank中甘丙肽的基因序列相同;重组质粒PDGF-GAL经酶切鉴定正确无误;对甘丙肽重组质粒进行转化扩增，质粒经回收、酶切及纯化后，用TE缓冲液稀释成3 ng/μL，注射入受精卵的原核中，移植后顺利怀孕。结论成功构建神经特异表达的甘丙肽转基因载体，酶切后得到用以显微注射的甘丙肽基因片段，并用显微注射法成功将甘丙肽重组片段注入到受精卵并怀胎，所用技术均正确无误。

关键词：甘丙肽质粒雄性原核显微注射

显微注射用甘丙肽基因的制备及受精卵最佳显微注射时间的探索

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显微注射用甘丙肽基因的制备及受精卵最佳显微注射时间的探索

作者：司苏晋山西医科大学

学位级别：硕士

目的1.为了建立甘丙肽转基因小鼠进一步研究甘丙肽的功能,对甘丙肽基因进行克隆构建神经特异表达甘丙肽转基因载体,获得显微注射用甘丙肽基因片段,从而为进一步建立过量表达甘丙肽的转基因小鼠模型奠定基础。2.为了得到大而清晰的受精... 详细信息

目的1.为了建立甘丙肽转基因小鼠进一步研究甘丙肽的功能,对甘丙肽基因进行克隆构建神经特异表达甘丙肽转基因载体,获得显微注射用甘丙肽基因片段,从而为进一步建立过量表达甘丙肽的转基因小鼠模型奠定基础。2.为了得到大而清晰的受精卵雄性原核,对受精卵最佳显微注射时间进行探索,为下一步显微注射做好准备。方法第一部分：从小鼠脑组织中提取出总RNA和基因组DNA,应用RT-PCR技术,得到甘丙肽的cDNA编码区,应用PCR技术得到甘丙肽5’非翻译区和3’非翻译区。应用重叠延伸PCR技术,得到甘丙肽目的基因。将其与T载体连接,经酶切鉴定无误后,送公司测序,命名为pMD19T-GAL。双酶切重组质粒pMD19T-GAL,获得目的基因。将目的基因连接到质粒pUC18上,命名为pUC18-GAL。在重组质粒pUC18-GAL中甘丙肽的上游插入PDGFB-链启动子,将鉴定正确的重组质粒命名为PDGF-GAL,提示构建神经特异表达甘丙肽转基因载体成功。双酶切重组质粒PDGF-GAL,得到显微注射用甘丙肽基因片段,回收纯化后即可用于显微注射。第二部分：采用孕马血清促性腺激素(pregnant mare'serum gonadotropin, PMSG)和人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotrophin, HCG)对4-6周龄的雌性小鼠进行超数排卵,在注射人绒毛膜促性腺激素后不同的时间点获取受精卵,观察受精卵的发育状态,从而选择最佳的受精卵的显微注射时间。结果通过重叠延伸PCR的方法得到的甘丙肽目的基因,经测序鉴定后,其序列同GenBank中甘丙肽的基因序列相同。经酶切鉴定证明神经特异表达甘丙肽转基因载体构建成功,得到了显微注射用甘丙肽基因片段,经浓度纯度测定后可用于下一步显微注射。在注射HCG后的20-25小时,随着时间的推移,出现受精卵雄原核的比例逐渐增加。注射HCG后的26小时开始,受精卵出现雄性原核的比例开始下降。在注射hCG后的20-25小时,受精卵的质量随着时间的推移而逐步提高。在注射HCG20、21、22小时后,受精卵雄性原核比较小,在注射HCG后的23、24、25小时,雌雄原核清晰可见,受精卵雄原核较大,位于受精卵的中心,在注射HCG后的26、27、28小时,卵胞质稍微不均质,雄性原核和雌性原核较大而且相互之间比较靠近,位于卵胞质中央,受精卵即将分裂。结论1.成功构建了神经特异表达甘丙肽转基因载体,获得了显微注射用甘丙肽基因片段,从而为进一步建立过量表达甘丙肽的转基因小鼠模型奠定了基础。2.注射HCG后的25小时,出现雄性原核的受精卵占受精卵总数的比例最大,并且雌雄原核清晰可见,雄原核较大,位于受精卵的中心,最适合显微注射。

关键词：显微注射甘丙肽受精卵雄性原核

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栉孔扇贝受精卵减数分裂的细胞学研究

中国水产科学 1999年第3期6卷 97-99页

作者：杨爱国王清印孔杰刘志鸿刘萍李锋王如才姜明中国水产科学研究院黄海水产研究所!青岛266071

1　材料与方法1.1　材料栉孔扇贝(Ｃｈｌａｍｙｓｆａｒｒｅｒｉ)亲贝,1997年5月取自青岛石老人养殖场,入池后雌雄分开暂养。ＤＡＰＩ(4’,6-ｄｉａｍｉｄｉｎｏ-2-ｐｈｅｎｙｌｉｎｄｏｌｅｄｉｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ)为美国Ｓｉ... 详细信息

1　材料与方法1.1　材料栉孔扇贝(Ｃｈｌａｍｙｓｆａｒｒｅｒｉ)亲贝,1997年5月取自青岛石老人养殖场,入池后雌雄分开暂养。ＤＡＰＩ(4’,6-ｄｉａｍｉｄｉｎｏ-2-ｐｈｅｎｙｌｉｎｄｏｌｅｄｉｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ)为美国Ｓｉｇｍａ公司产品。1.2　方法挑选性腺?..

关键词：栉孔扇贝受精卵减数分裂雌性原核雄性原核多精入卵

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酶工程

生物技术通报 1990年第11期6卷 50-62页

902986 人血管紧张肽原酶基因在转基因小鼠中的组织特异性表达[英]/Fukamizu,A.…//***.-1989,165(2).-826～832[译自DBA,1990,9(5),90-02910]将质粒 phRNTM15 微注射到受精的C57BL/6J 小鼠卵的雄性原核中。产生了带有人血管紧张肽原酶(... 详细信息

关键词：酶工程转基因小鼠血管紧张肽原酶基因克隆雄性原核木聚糖酶基因鼠卵芽抱杆菌组织特异性表达拟杆菌

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草魚卵子受精的细胞学研究

湖南师范大学自然科学学报 1966年第5期 73-84页

作者：刘筠陈淑羣王义铣寿孝鐘河南师院生物系河南师院生物系进修生河南省生物研究所

一前言草魚(Ctenopharyngodon idellus)是我国淡水养殖最有經济价值的魚类。对这种魚的生殖細胞的发育已作过研究(刘筠等1962),受精細胞学和胚胎发育的工作正在进行。本文是专作受精细胞学的討論。由于魚类卵子的卵黄含量多,染色体及分... 详细信息

一前言草魚(Ctenopharyngodon idellus)是我国淡水养殖最有經济价值的魚类。对这种魚的生殖細胞的发育已作过研究(刘筠等1962),受精細胞学和胚胎发育的工作正在进行。本文是专作受精细胞学的討論。由于魚类卵子的卵黄含量多,染色体及分裂图形都很小,加之又不易着色,切片和显微观察都很感困难,魚类受精細胞学和胚胎发育工作不多的原因,不无与此有关。早在上世紀末期Boehm(1891)和Blanc(1894)对鱒魚(Salmo)卵进行过观察,认为魚卵是第一次成熟分裂期間受精的,朱洗教授(1936)在金魚卵子上及日本学者***(1943)在鲤魚卵子上观察到这些魚类是在第二次成熟分裂中期受精的。苏联学者在鱘魚方面的工作做得比

关键词：受精孔精子入卵受精膜放射膜雄性原核卵子受精性成熟

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蓖麻蚕卵受精的研究

昆虫学报 1962年第4期 341-346页

作者：金心梅张果中国科学院实验生物研究所

我们从细胞形态上的研究,证明:蓖麻蚕卵在成熟期分裂的中期(同一横剖面),基组数染色体是14;分作两圈,内层4个,外层10个。成熟卵停止在第一次中期分裂,纺锤体与卵膜垂直,待精子入卵后继续向前分裂,并发现有染色质消散的现象。第二次成熟... 详细信息

我们从细胞形态上的研究,证明:蓖麻蚕卵在成熟期分裂的中期(同一横剖面),基组数染色体是14;分作两圈,内层4个,外层10个。成熟卵停止在第一次中期分裂,纺锤体与卵膜垂直,待精子入卵后继续向前分裂,并发现有染色质消散的现象。第二次成熟期分裂结果获得3个极体和1个雌性原核。正常的卵平均能接受2—3条精子,它们入卵后起收缩、囊化成雄性原核;其中一个与雌性原核合并为“双组核”。剩余的过数精核分裂缓慢,终于中心体离纺锤体作异形的分裂。

关键词：蓖麻蚕雌性原核鹤木蚕受精膜精子生殖细胞雄性原核朱洗精子入卵卵受精极体染色质卵膜染色体

论朱洗和张果关于进入卵细胞的“剩余”精子命运的研究工作

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科学通报 1953年第5期 70-73+69页

作者： Я.Е.艾连戈恩 М.И.列平尼娜應幼梅

不是一个精子,而是许多个精子参加受精过程(动物有机体和植物有机体都是一样),如今,可以认为已经是确立的事实,当然,多精入卵的特征,可能是多种多样的。例如Е·И·乌斯奇诺娃(1951)在植物有机体里观察到许多精子进入卵细胞的现象。В.... 详细信息

不是一个精子,而是许多个精子参加受精过程(动物有机体和植物有机体都是一样),如今,可以认为已经是确立的事实,当然,多精入卵的特征,可能是多种多样的。例如Е·И·乌斯奇诺娃(1951)在植物有机体里观察到许多精子进入卵细胞的现象。В.А.柏度布娜娅(1951)研讨了高等植物的双精子和多精子的特殊问题。但是这些进入卵细胞,却又不

关键词：朱洗受精卵星光天峨雄性原核精子生殖细胞雌性原核张果

两种牛血清白蛋白用于人精子获能效果的比较研究

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癌变．畸变．突变 1991年第2期3卷 152-153页

作者：李丹漆黄天华四川省计划生育科学研究所

血清白蛋白是人精子在离体条件下获能必需的物质。在人精子染色体制备中其质量对实验能否成功影响很大,血清白蛋白的不同种类(人、牛血清白蛋白)。

关键词：血清白蛋白精子数获能染色体制备受精指数雄性原核受精率透明带鼠卵生物制品研究所