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浙江大学学报（农业与生命科学版） 2022年第3期48卷 377-382页

作者：王振杰张康梁莉熊晴晴杜华华浙江大学饲料科学研究所浙江省饲料与动物营养重点实验室杭州310058

本试验通过制备不同铁饱和度的猪乳铁蛋白(lactoferrin,Lf),探讨其对细菌生长的影响。根据铁饱和度将试验分为3组,对照组(不添加任何Lf)、铁不饱和乳铁蛋白处理组(Apo-Lf,铁饱和度为6.9%)和铁饱和乳铁蛋白处理组(Holo-Lf,铁饱和度为100.... 详细信息

本试验通过制备不同铁饱和度的猪乳铁蛋白(lactoferrin,Lf),探讨其对细菌生长的影响。根据铁饱和度将试验分为3组,对照组(不添加任何Lf)、铁不饱和乳铁蛋白处理组(Apo-Lf,铁饱和度为6.9%)和铁饱和乳铁蛋白处理组(Holo-Lf,铁饱和度为100.0%),分别处理大肠埃希菌K88、金黄色葡萄球菌和鼠伤寒沙门菌。结果表明:(1)天然Lf和Apo-Lf能显著抑制大肠埃希菌K88和金黄色葡萄球菌的生长,而Holo-Lf没有表现出抑菌活性。(2)补铁可以消除Apo-Lf对大肠埃希菌K88的抑制作用,说明Apo-Lf是通过螯合铁发挥抑菌功能的。(3)扫描电镜观察结果显示,Apo-Lf破坏了大肠埃希菌K88和金黄色葡萄球菌的细菌膜结构,但Holo-Lf对所有被测细菌都没有影响。(4)三维结构预测结果提示,Apo-pLf和Holo-pLf的三维结构开放程度明显不同,Apo-pLf的活性位点可能更容易与细菌直接作用。综上所述,猪乳铁蛋白的抑菌活性依赖于其铁饱和度,Apo-Lf既可以通过螯合铁的方式抑制细菌生长,也可以通过破坏细菌膜结构方式抑制大肠埃希菌K88和金黄色葡萄球菌的生长。

关键词：乳铁蛋白抑菌铁饱和度铁不饱和乳铁蛋白铁饱和乳铁蛋白

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牛源乳铁蛋白体外抗乙肝病毒感染HepG2细胞的研究

牛源乳铁蛋白体外抗乙肝病毒感染HepG2细胞的研究

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作者：李松涛东北农业大学

学位级别：硕士

目的：乳铁蛋白是一种具有多种生理功能的天然活性糖蛋白，研究表明乳铁蛋白能够抑制多种病毒，如人体免疫缺陷性病毒(HIV)、细胞巨化病毒、疱疹病毒1和2型、丙型肝炎病毒(HCV)等。本课题旨在研究牛源乳铁蛋白、锌饱和乳铁蛋白、铁饱和... 详细信息

目的：乳铁蛋白是一种具有多种生理功能的天然活性糖蛋白，研究表明乳铁蛋白能够抑制多种病毒，如人体免疫缺陷性病毒(HIV)、细胞巨化病毒、疱疹病毒1和2型、丙型肝炎病毒(HCV)等。本课题旨在研究牛源乳铁蛋白、锌饱和乳铁蛋白、铁饱和乳铁蛋白以及乳铁蛋白水解物对乙型肝炎病毒的抑制作用。方法：本研究采用天然HBV感染HepG2细胞建立病毒细胞模型，通过MTT法测定BLF、Zn-BLF、Fe-BLF及乳铁蛋白水解物的对细胞的毒性并确定最大无毒作用剂量，并以此剂量作倍比稀释进行抗病毒研究;试验采用ELISA法应用乙型肝炎表面抗原试剂盒检测乙型肝炎表面抗原的被抑制情况，同时采用荧光定量PCR法对HBV-DNA的被抑制情况进行测定。结果： (1)本实验通过对HepG2细胞的培养，确定了HepG2细胞接入培养板的浓度为5×10个·ml，并通过对其生长曲线的测定确定了应用含3％血清的培养液作为维持液来培养细胞。 (2)实验通过MTT法测定BLF、Zn-BLF、Fe-BLF及乳铁蛋白水解物的细胞毒性结果为：BLF的最大无毒剂量为3.0 g·L，其TC为11.08 g·L;Zn-BLF的最大无毒剂量为1.5 g·L;Fe-BLF的最大无毒剂量为3.0 g·L;乳铁蛋白水解物的最大无毒剂量为1.5 g·L。试验均采用其无细胞毒性剂量进行抗病毒研究。 (3)当HBV感染细胞以后，BLF、Zn-BLF、Fe-BLF均能显著抑制HBsAg分泌，并呈现出剂量效应关系，抑制效果(最大抑制率)为Zn-BLF(60.49％)＞BLF(58.34％)＞Fe-BLF(36.66％)，乳铁蛋白水解物对HBsAg分泌无抑制作用。BLF不能通过与HBV结合来抑制HBV对细胞的感染，但可以通过与细胞某位点结合来阻断HBV对细胞的侵染。 (4)当HBV感染细胞以后，BLF、Zn-BLF、Fe-BLF均能显著抑制HBV-DNA，而乳铁蛋白水解物对HBV-DNA只有微弱的作用。结论：本研究结果表明，在体外牛源乳铁蛋白及锌、铁饱和乳铁蛋白对乙型肝炎病毒有显著的抑制作用，但乳铁蛋白水解后对乙型肝炎病毒无明显抑制作用，这说明其抑制作用与乳铁蛋白的整体结构有关，但其作用机制应是多方面的，且有待于进一步探讨。

关键词：牛源乳铁蛋白锌饱和乳铁蛋白铁饱和乳铁蛋白乳铁蛋白水解物乙型肝炎病毒乙型肝炎表面抗原抑制作用 HepG2细胞系

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