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作者：高泽龙中国人民解放军海军军医大学

学位级别：硕士

研究背景铁元素作为一种必需营养素,在机体生命活动中起到至关重要的作用,可参与氧的运输和氧化呼吸,还可通过影响细胞内多种酶活性和信号通路调控细胞的生理、病理进程。铁稳态失衡将对机体组织器官造成损害,导致诸多疾病。过量的铁可... 详细信息

研究背景铁元素作为一种必需营养素,在机体生命活动中起到至关重要的作用,可参与氧的运输和氧化呼吸,还可通过影响细胞内多种酶活性和信号通路调控细胞的生理、病理进程。铁稳态失衡将对机体组织器官造成损害,导致诸多疾病。过量的铁可在肝脏、心脏和内分泌腺等器官中积蓄,尤其是肝脏,并通过芬顿反应产生活性氧,引发氧化应激反应。肝脏是机体铁代谢、脂质代谢等途径的重要器官,研究表明,由饮食因素、行为因素、代谢性疾病甚至慢性肝病本身造成的肝脏铁过负荷人群日益扩大,由铁过负荷导致的疾病风险及问题日益严峻。肝脏铁过负荷时,常伴随脂质代谢紊乱,极易引起肝脏炎症、脂肪肝、肝纤维化、肝硬化、甚至诱导肝细胞癌变,其中由脂质蓄积引起的非酒精性脂肪性肝病较为常见,成为近些年肝脏疾病研究的一大热点。miR-122是肝细胞特异表达的micro RNA,具有广泛的生物学功能,与肝脏炎症密切相关,并能够参与调控肝脏糖、脂代谢。miR-122敲除可导致肝脏呈现炎症-脂肪变性-纤维化-肝硬化-肝癌累进性病变,同时也有研究表明,在非酒精性脂肪性肝病的发生发展过程中miR-122表达水平的下降。前期研究已证实,铁过负荷可引起机体脂代谢紊乱,且引起肝脏miR-122下调和肝脏脂肪变性。但miR-122在铁过负荷导致肝脏脂质过氧化损伤中是否具有调控作用,能否影响肝脏脂质代谢的变化,又是通过何种方式,这些问题都尚未完全明确。研究目的1.阐明miR-122调控肝脏脂代谢、抗脂质过氧化的分子机制,揭示miR-122在维持肝脏正常生理功能中的作用,推进人们对铁过负荷导致肝脏病理改变机制的理解;2.进一步明确miR-122调控分子网络在铁过负荷导致肝脏脂质过氧化损伤中的作用,预防非酒精性脂肪性肝病,开发非酒精性脂肪肝治疗新方法提供实验依据。研究方法1、miR-122敲除及动物实验通过CRISPR技术构建了miR-122敲除小鼠,采用8周龄成年雄性同窝miR-122+/+和miR-122-/-小鼠,分别设置对照饲料组和铁过负荷组（3%右旋糖酐铁）,共四组,每组小鼠8-10只,喂食3个月后检测肝脏脂质代谢情况。2、肝脏脂肪变性及脂质过氧化损伤检测取部分小鼠肝组织于4%多聚甲醛中固定24h,做石蜡切片用于HE染色观察组织形态、普鲁士蓝染色观察肝脏铁状态、天狼星红染色观察肝脏纤维化情况,做冰冻切片用于油红染色观察肝脏脂肪蓄积情况、α-SMA免疫组化染色观察肝脏纤维化情况。小鼠肝脏组织乙醇匀浆后取上清,采用生化检测试剂盒检测肝脏甘油三脂TG、低密度脂蛋白胆固醇LDL-C并检测小鼠血清中的ALT、AST含量。肝组织PBS匀浆后取上清,同样采用生化试剂盒检测肝脏及血清中脂质过氧化物MDA、LPO及抗氧化物还原型谷胱甘肽GSH含量。3、多组学研究通过液相-质谱检测铁过负荷和miR-122敲除小鼠肝脏代谢产物变化,聚焦肝脏脂质代谢通路;通过转录组测序检测铁过负荷和miR-122敲除小鼠肝组织基因表达情况,聚类差异基因,分析铁过负荷和miR-122敲除导致肝脏脂肪变性和脂质过氧化的关键分子并进行验证;通过i TRAQ技术检测铁过负荷和miR-122敲除小鼠肝组织蛋白表达情况,聚类差异表达蛋白,与代谢组鉴定的代谢通路、转录组测序结果对比验证,并对关键分子表达进行验证。4、脂肪酸检测使用全自动水解脂肪测定仪提取小鼠肝组织总脂肪,旋转蒸发仪浓缩至干,残留物为脂肪提取物。提取的脂肪的经皂化和脂肪酸甲酯化后与37种脂肪酸甲酯标准品经气相色谱仪（岛津GC-2030）分离、以色谱峰峰面积定量,经标准品及内标换算后测得肝组织中各类脂肪酸的含量变化,确定富铁膳食及miR-122敲除导致脂质过氧化的主要不饱和脂肪酸底物和产物。5、RNA表达检测Trizol试剂提取小鼠肝组织和原代肝细胞总RNA,测定浓度并将各样本浓度稀释至相同,使用反转录试剂盒反转录得到c DNA模板。c DNA与水、引物、ROX Reference Dye、SYBR Green混合配置q PCR反应体系,进行扩增,根据Ct值采用2-ΔΔCT法进行相对定量,检测脂质代谢酶AACS、AGPAT1、MOGAT2、SLC27A1、脂肪酸去饱和酶FADS2、氧化酶CYP2B9、CYP2A22、CYP3A11的RNA表达水平。6、蛋白表达检测使用加入蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA裂解液提取小鼠肝组织和原代肝细胞全蛋白,使用BCA试剂盒检测蛋白浓度,将各样本浓度稀释至相同。加入蛋白上样缓冲液混匀,煮沸变性后得到检测样品。Western Blot蛋白免疫印迹法检测脂质代谢酶AACS、AGPAT1、MOGAT2、SLC27A1、脂肪酸去饱和酶FADS2、氧化酶CYP2B9、CYP2A22、CYP3A11

关键词： miR-122 铁过负荷脂质过氧化多不饱和脂肪酸 AACS FADS2

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铁过负荷影响YY1蛋白稳定性导致肝细胞核因子4α表达下降

铁过负荷影响YY1蛋白稳定性导致肝细胞核因子4α表达下降

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作者：牛筱雯中国人民解放军海军军医大学

学位级别：硕士

研究背景铁是人体必需的微量元素,铁缺乏会引起贫血。但是,铁过负荷同样会对机体产生很大的危害。大量研究证实,作为机体铁储存的主要器官,肝脏铁蓄积可引起或加重肝组织炎症并导致肝细胞损伤,与肝纤维化甚至肝癌的发生有关。然而,铁过... 详细信息

研究背景铁是人体必需的微量元素,铁缺乏会引起贫血。但是,铁过负荷同样会对机体产生很大的危害。大量研究证实,作为机体铁储存的主要器官,肝脏铁蓄积可引起或加重肝组织炎症并导致肝细胞损伤,与肝纤维化甚至肝癌的发生有关。然而,铁过负荷导致炎症的机制迄今没有完全阐明。以往学者大多认为,铁过负荷引起肝细胞氧化应激损伤并激活枯氏细胞进而引起炎症。但有研究显示,抗氧化治疗可以缓解铁过负荷引起的氧化应激损伤,但不能减轻炎症反应。有意义的是,我们的前期研究发现,输入性铁过负荷可以通过影响HNF4α/miR-122信号通路活性直接引发肝脏组织细胞发生炎症反应。肝细胞核因子4α(Hepatocyte nuclear factor 4 alpha,HNF4α)是细胞核受体超家族中的一员,HNF4α在胚胎时期肝脏的形成过程中,肝脏脂代谢、药物代谢等各种正常生理功能以及肝脏炎症反应、肝纤维化等各种病理过程中起着非常重要的作用,其表达下降可能是肝细胞癌发生的重要因素之一,过表达HNF4α则可以明显的抑制肝脏癌变和纤维化,延长植入了人类癌细胞小鼠的存活时间,在肿瘤内过表达HNF4α还可以使肿瘤生长的速度减慢。然而,迄今未见关于铁过负荷是如何导致HNF4α表达下降的相关报道。而阐明铁过负荷导致HNF4α表达下降的分子机制可能对深入了解铁过负荷对肝脏组织细胞的影响,以及铁过负荷相关疾病防治措施的研究都具有重要意义。因此,本课题拟在进一步了解铁过负荷导致HNF4α表达变化生物学特点的基础上,探索铁过负荷抑制HNF4α表达的分子机制。研究目的通过体外实验了解铁过负荷引起的HNF4α表达下降的生物学特点,阐明铁过负荷导致HNF4α表达下降的分子机制,为更深入的研究铁过负荷对肝脏组织细胞的影响提供线索,并为研究铁过负荷相关肝脏疾病的防治措施提供理论基础。研究方法1、细胞的培养L02细胞在含10%胎牛血清,1%双抗的1640培养基中培养。Huh7、G2细胞以及Hepa16细胞均在含10%胎牛血清,1%双抗的高糖DMEM培养基中培养。根据实验目的,各组分别加入Apo-Tf(终浓度30uM)、Holo-Tf(终浓度30uM)及FeSO4(终浓度100uM)对细胞进行干预培养(5%CO2,37°C)。2、RT-PCR用Trizol提取细胞、组织的总RNA,测定其浓度,再用反转录试剂盒将RNA反转录成cDNA。以cDNA为模板,与引物,SYBR green,水混匀后,在StepOne Plus实时定量PCR仪上进行扩增,得到结果,统计分析。3、Western blot用全蛋白提取试剂盒提取细胞、组织的总蛋白,测定浓度,变性后用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳,转膜,封闭,孵育一抗及荧光二抗,显像,分析。4、检测细胞内的铁含量细胞接种于12孔板,37°C培养至融合度为80%左右时,在培养液中加入终浓度为30uM的Holo-Tf,培养0.5h。去除含Holo-Tf的培养基,用适量PBS洗3次,加入PGFL(phen Green FL)二价铁荧光染料(DMSO配制),终浓度为5uM,避光孵育20min,加入适量PBS洗3次,在共聚焦显微镜下观察绿色荧光(波长490nm,发射波长520nm)强度的变化。5、甲基化检测将L02细胞铺于24孔板,并分为两组,IO组和IO+5-Aza-CdR(5-aza-2’-deoxycytidine,5-脱氧杂氮胞苷)组,IO组加入终浓度为30uM的Holo-Tf,IO+5-Aza-CdR组除了加入相同量的Holo-Tf,同时还加入了终浓度为2.5uM的5-Aza-CdR。细胞干预后,依次在0、1、2、4、8h进行收集。并通过实时定量PCR检测各组HNF4α的表达变化。6、转录因子结合活性芯片采用转录因子结合活性芯片,对对照组,Holo-Tf-1h(Holo-Tf干预1h)组,HNF4α组(加入了HNF4α片段)的L02细胞转录因子结合活性进行检测,筛选。7、染色质免疫共沉淀(ChIP)L02细胞接种于6cm培养皿中,分为对照组,Apo-Tf组和Holo-Tf组,培养1h,按照CST公司染色质免疫共沉淀说明书的步骤进行实验。8、蛋白稳定性检测放线菌酮(CHX)可以抑制蛋白合成,我们通过用CHX(终浓度0.6uM))干预对照及铁过负荷组的L02细胞,并在0、0.5、1、2、4、8 h收集细胞,提取总蛋白,用Western blot检测比较两组细胞蛋白的表达量变化,观察铁过负荷后YY1蛋白的稳定性情况。9、siRNA及过表达质粒转染L02细胞接种培养板,当融合度为80%时,按说明书进行转染。将siYY1或YY1过表达质粒以及转染试剂按体积1:1混匀后,室温静置15min,再加入各组培养基中,培养48-72h后收集细胞检测。10、实验动物小鼠分组及造模方法铁过负荷小鼠:5

关键词：铁过负荷 HNF4α YY1 炎症反应

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铁过负荷对miR-122表达的影响及其在肝脏炎症发生过程中的作用

铁过负荷对miR-122表达的影响及其在肝脏炎症发生过程中的作用

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作者：吴璐莎第二军医大学

学位级别：硕士

研究背景铁是人体必需的微量营养素,参与多种生理生化过程,但是铁过负荷会对机体产生危害。因此,铁代谢受到机体的严格调控。肝脏是调控铁稳态的重要器官。但是有许多疾病(诸如酒精性脂肪肝、酒精性脂肪肝、糖尿病、血色素沉着病和地中... 详细信息

研究背景铁是人体必需的微量营养素,参与多种生理生化过程,但是铁过负荷会对机体产生危害。因此,铁代谢受到机体的严格调控。肝脏是调控铁稳态的重要器官。但是有许多疾病(诸如酒精性脂肪肝、酒精性脂肪肝、糖尿病、血色素沉着病和地中海贫血等)的患者中存在不同程度的肝铁沉积,同时还存在轻至中度炎症。近期有研究发现,铁代谢的紊乱与多脏器衰竭和慢性肝衰竭急性发作的早期死亡率有关。有研究者提出铁过负荷可能与炎症有关。尽管肝铁过负荷对机体的危害一直受到相关领域研究者高度重视,但是,迄今为止肝铁负荷与炎症之间的联系并没有完全阐明。miRNA-122是肝脏特异性表达的miRNA,其表达变化在肝脏炎症的发生以及肝脏肿瘤的发生发展过程中具有重要作用。近年的研究发现,miRNA-122通过下调铁调素(Hepcidin)的表达参与机体铁稳态的调控。然而,miR-122的表达异常和铁过负荷之间是否存在联系,尤其是铁过负荷是否通过miR-122引起或加重炎症反应,未见报道。因此,本课题就铁过负荷对miR-122表达的影响及其在肝脏炎症反应中的作用进行了探索。研究目的通过动物实验和细胞实验,了解铁过负荷与肝脏组织细胞炎症的联系,明确miR-122的表达下降在铁过负荷引起的肝脏炎症发生过程中的作用,并在此基础上探讨铁过负荷miR-122表达下降的分子机制,为铁过负荷肝脏炎症的预防和治疗方法提供新的线索。研究方法1.实验动物小鼠分组及造模方法1.1纯化饲料组：四周龄雄性C57小鼠(购自上海斯莱克公司,体重(13±2)g。按体重随机分为1周组、2周组和4周组,自由进食(购自Research Diets公司的AIN-93去铁小鼠配方饲料,铁含量为3ppm)饮水,在12h/12h昼夜节律,22±2℃环境中饲养3天后,每组进一步分为铁缺乏组、铁过负荷组和适铁组(对照组)。铁缺乏组腹腔注射等体积的生理盐水,每周2次;适铁组每周2次腹腔注射2mg/ml右旋糖酐铁,每次注射剂量为20mg/kg小鼠体重(每只小鼠1周注射铁总量为0.6mg,2周为1.2 mg,4周为2.4mg,相当与小鼠相同时间内进食全价饲料中的铁摄入量;铁过负荷组每周腹腔注射2次20mg/ml右旋糖酐铁,每次注射剂量为200mg/kg小鼠体重(每只小鼠1周注射铁总量为6mmg,2周为12mg,4周为24mg)。1.2全价饲料组：小鼠来源、性别、体重、饲养环境同纯化饲料组,自由进食(购自我校实验动物中心的全价小鼠饲料,铁含量为200mg/kg)饮水,按体重随机分为1周组、2周组和4周组,每组进一步分对照组和铁过负荷组。对照组每周2次腹腔注射等体积的生理盐水;铁过负荷组每周2次腹腔注射20mg/ml右旋糖酐铁,每次注射剂量为200mg/kg小鼠体重。1.3右旋糖酐铁溶液配制：20ml/mg右旋糖苷铁溶液由100mg/ml右旋糖酐铁稀释5倍得到(100ml/mg右旋糖苷铁：生理盐水=1ml:4ml,充分混匀;2ml/mg右旋糖酐铁由20ml/mg右旋糖苷铁稀释10倍得到(20ml/mg右旋糖苷铁：生理盐水=1ml:9ml,充分混匀)。2.基因表达谱芯片采用基因表达谱芯片(Affymetrix GeneChip Mouse Gene 1.0 ST Array),对铁缺乏组,铁过负荷组和对照组C57小鼠(每组5只)进行mRNA表达谱检测,利用随机方差模型(RVM)进行差异基因筛选,分析工具为MultiClassDif。3.肝脏组织普鲁士蓝染色,HE染色及炎症病理评分肝脏样本固定在4%的多聚甲醛,包埋石蜡,然后切片(4μm),用苏木精和伊红染色,普鲁士蓝染色,荧光显微镜观察并采集图像。4.实时定量荧光PCR用Trizol提取肝脏组织或细胞的总RNA,测定其浓度,再用反转录试剂盒将RNA反转录成cDNA;miRNA采用特殊的miRNA茎环RT引物(购自广州锐博公司),将miRNA反转录成cDNA。以cDNA为模板,与引物,SYBR green,水混匀后,在StepOne PlusRT-PCR仪上进行扩增。根据RQ值,动物以18S(细胞以β-actin, miRNA以U6)为内参照,标准化后进行统计分析。5. Western-blot用凯基全蛋白试剂盒提取肝脏组织或细胞的总蛋白,测定浓度,变性,然后SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳,转膜,封闭,孵育一抗：CCL2抗体(1：400)、p65抗体(1：1000)、IκBα抗体(1:1000)、p-IκBα抗体(1:1000)、TNFα (1:1000)、内参照抗体(β-actin抗体,1：3000),漂洗后,孵育二抗,漂洗后,显像,条带采用quantity one图像分析系统进行灰度分析。6.肝脏组织免疫荧光小鼠石蜡切片脱蜡,经抗原修复后,加一抗(CD68, TNFα, IL-1β),二抗(含F

关键词：铁过负荷炎症 miR-122 趋化因子CCL2 rAAV8 HNF4α

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孕中期铁过负荷的不良影响

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现代妇产科进展 2010年第8期19卷 614-616页

作者：徐宜清田静南京医科大学附属南京妇幼保健院南京210004

铁是人体重要的微量元素,缺铁可引起各种生理障碍,但铁过负荷同样能破坏正常的生理过程,并导致各种病理状态的形成[1].现已知孕期适当补充铁剂可减少新生儿出生体重过低和早产的发生率[2].但目前妊娠中期铁过负荷对妊娠结局的影响研究甚... 详细信息

铁是人体重要的微量元素,缺铁可引起各种生理障碍,但铁过负荷同样能破坏正常的生理过程,并导致各种病理状态的形成[1].现已知孕期适当补充铁剂可减少新生儿出生体重过低和早产的发生率[2].但目前妊娠中期铁过负荷对妊娠结局的影响研究甚少.本研究测定了妊娠中期体内血清铁蛋白的水平,着重探讨妊娠中期铁过负荷对孕期糖脂代谢的影响,以及对妊娠糖尿病(GDM)、妊娠期高血压疾病、代谢综合征发生的影响.

关键词：铁过负荷血清铁蛋白妊娠中期

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动物铁过负荷的临床和实验室诊断技术

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贵州农业科学 2009年第5期37卷 123-125页

作者：刘俊伟葛亚明银梅王天有河南科技学院动物科学学院河南新乡453003

为动物铁过负荷建立简单、快捷的临床和实验室诊断技术,利用临床自然病例,采用病理解剖学、组织学和组织化学染色技术,对病猪及病犬的淋巴结、脾脏、肺脏、肝脏和肾脏进行了病理解剖学和组织病理学观察和研究。结果表明,随着铁过负荷的... 详细信息

为动物铁过负荷建立简单、快捷的临床和实验室诊断技术,利用临床自然病例,采用病理解剖学、组织学和组织化学染色技术,对病猪及病犬的淋巴结、脾脏、肺脏、肝脏和肾脏进行了病理解剖学和组织病理学观察和研究。结果表明,随着铁过负荷的程度不同,富含巨噬细胞的淋巴结呈现出由棕黄色至棕褐色的不同色泽;在H.E染色的组织学标本中,可见巨噬细胞内含有数量不等的棕黄色含铁血黄素颗粒;在普鲁氏蓝染色的组织学标本中,含铁血黄素颗粒则呈蓝色。动物发生铁过负荷时,过剩的铁主要沉积在单核巨噬细胞系统的胞浆内,其次是肝细胞的胞浆内。

关键词：铁过负荷巨噬细胞内皮细胞含铁血黄素颗粒普鲁氏兰染色 H.E染色

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H.E染色和普鲁氏染色在动物铁过负荷诊断的比较

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中国饲料 2011年第19期 38-39页

作者：张静江苏畜牧兽医职业技术学院

本试验研究比较铁过负荷猪的淋巴结、脾脏、肝脏、肺脏、肾脏的H.E染色、革兰氏染色的变化。

关键词：铁过负荷巨噬细胞铁血黄素颗粒 H.E染色普鲁氏兰染色

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断奶仔猪铁过负荷的组织病理学观察

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安徽农业科学 2006年第18期34卷 4620-4621,4624页

作者：王天有钟华赵恒章王相如尚伟杰河南科技学院动物科学学院河南新乡453003

采用冰冻切片、组织化学染色技术,对铁过负荷断奶仔猪的淋巴结、脾脏、肝脏等重要器官进行了组织学观察和研究。结果表明,猪饲料中添加过量的补铁剂可造成猪的铁过负荷,过剩的铁以铁血黄素的形式,广泛沉积于单核吞噬细胞系统的细胞和肝... 详细信息

采用冰冻切片、组织化学染色技术,对铁过负荷断奶仔猪的淋巴结、脾脏、肝脏等重要器官进行了组织学观察和研究。结果表明,猪饲料中添加过量的补铁剂可造成猪的铁过负荷,过剩的铁以铁血黄素的形式,广泛沉积于单核吞噬细胞系统的细胞和肝窦及脾窦的内皮细胞,从而使这些细胞呈现Perlps染色阳性。

关键词：断奶仔猪铁过负荷单核吞噬细胞系统含铁血黄素颗粒普鲁氏兰染色

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维生素E对铁过负荷肝脏组织细胞氧化应激和炎症反应的影响

维生素E对铁过负荷肝脏组织细胞氧化应激和炎症反应的影响

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作者：王鑫第二军医大学

学位级别：硕士

研究背景铁是人体必需的微量元素之一,参与机体多种生理生化过程,包括氧气运输、DNA合成、电子传递等。以往的研究主要集中在缺铁性贫血,近年来,研究者发现铁过负荷同样对机体具有严重危害。肝脏是调控机体铁稳态的主要器官,许多疾病伴... 详细信息

研究背景铁是人体必需的微量元素之一,参与机体多种生理生化过程,包括氧气运输、DNA合成、电子传递等。以往的研究主要集中在缺铁性贫血,近年来,研究者发现铁过负荷同样对机体具有严重危害。肝脏是调控机体铁稳态的主要器官,许多疾病伴有不同程度的肝铁沉积,例如β-地中海性贫血(β-Thalassemia),该病患者由于反复输血导致肝脏铁沉积(又称输入性铁过负荷),同时可见血清丙二醛(malonyldialdehyde, MDA)含量、炎性因子和转氨酶升高。大量研究证实,铁通过催化Fenton反应产生活性氧(Reactive oxidative species, ROS),损害脂质、蛋白、核酸,造成氧化应激损伤,进而激活巨噬细胞导致炎症反应。近年来有研究报道,miR-122和miR-146a的表达变化在炎症反应中具有重要作用。有意义的是,本课题组前期研究发现,肝脏铁过负荷除了可以引起肝脏组织细胞氧化应激损伤之外,还可以抑制肝细胞核转录因子4a (Hepatocyte nuclear factor 4a, HNF4a)和miR-122和miR-146a表达,进而激活NF-κB信号通路,引起炎症反应。Vit.E (Vitamin E, Vit.E)作为一种广泛应用的抗氧化维生素,可清除体内多余的ROS,维持机体氧化与抗氧化系统的平衡。有研究报道,Vit.E补充可降低铁过负荷导致的氧化应激。但是,另有研究报道,过量的Vit.E补充可加重铁过负荷氧化应激状态。Vit.E对铁过负荷氧化应激的影响存在争议。已知,临床采用Vit.E防治地中海贫血患者红细胞氧化损伤,其是否可以防治铁过负荷引起的肝脏组织细胞氧化应激损伤以及炎症反应未见报道。研究目的本课题通过动物和细胞实验,观察Vit.E补充对铁过负荷肝脏组织细胞氧化应激和炎症反应的影响,为今后临床上是否采用Vit.E补充这一方法防治铁过负荷肝脏损伤相关疾病提供实验依据。研究方法一、动物分组与处理24只雄性4周龄C57BL/6小鼠,按体重随机分组：对照组(Ctrl)、铁过负荷(IO)组、铁过负荷+玉米油(IO+corn oil)组、铁过负荷+Vit.E (IO+Vit.E)组,每组6只。对照组腹腔注射0.9%生理盐水,其余三组腹腔注射右旋糖酐铁(20 mg/ml),每次0.15ml,每周2次,共2周,总铁量12 mg。IO+Vit.E组小鼠每天灌胃溶于玉米油的Vit.E(100 mg/kg·bw), IO+corn oil组小鼠每天灌胃与Vit.E等体积的玉米油,共2周,IO+corn oil作为溶剂对照组。二、部分血清生化参数和肝铁含量的检测采用全自动血生化仪检测各组小鼠血清中血清铁(SI)、转铁蛋白饱和度(TS)、总铁结合力(TIBC)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)等参数。硝化法测肝铁含量。肝脏普鲁士蓝染色观察肝铁沉积情况。三、肝脏氧化应激指标的检测ROS含量测定：制备小鼠肝脏组织匀浆液,离心吸取上清液,用ROS检测探针DCF 37℃避光孵育1 h (DCF终浓度为5μM),酶标仪检测荧光强度。丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽(GSH)含量检测：肝脏组织匀浆处理,然后按说明书操作进行。8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG):采用免疫荧光方法,操作按照说明书进行。四、肝脏HE染色及炎症病理评分肝脏组织用4%多聚甲醛固定,石蜡包埋。摊片,厚度为4μm,然后用苏木精和伊红染色。显微镜下观察并拍照,按照1985年***评价慢性肝炎合并HDV感染方法进行炎症病理评分。五、细胞培养与处理人肝癌细胞株Huh7细胞分为对照组、Holo-Tf组(Holo-transferrin)和Holo-Tf+Vit.E组。Holo-Tf组加入Holo-Tf(终浓度为30 μM),Holo-Tf+Vit.E组同时加入Holo-Tf(终浓度为30μM)和Vit.E(终浓度为50 μM),对照组加入无菌RNase Free ddH2O,干预时间为24h。细胞羟自由基(·OH)含量、SOD活性、MDA含量、GSH含量的检测：细胞用添加Holo-Tf和Vit.E的培养液培养后,制备肝细胞悬液,然后按说明书操作进行。六、实时定量荧光PCR用Trizol裂解组织或者细胞,按比例加入氯仿进行萃取。离心取上层水相,用异丙醇沉淀RNA。75%乙醇将沉淀洗2遍,得到的白色絮状沉淀即为RNA。加入20μl左右RNase Free ddH2O溶解。测RNA浓度,再将RNA反转录成cDNA。按照目的基因的正反引物及内参基因正反引物,SYBR Green, cDNA, DEPC水进行实时定量荧光聚合酶链式反应。动物内参为18S,细胞内参为β-actin。根据扩增得到的Ct值计算RQ值,并进行统计

关键词：维生素E 铁过负荷氧化应激炎症反应

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铁过负荷对2型糖尿病患者糖脂代谢和胰岛β细胞功能的影响

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临床内科杂志 2008年第6期25卷 389-390页

作者：金杰苏青董艳邢惠莉上海交通大学医学院附属新华医院内分泌科 200092

目的探讨铁过负荷对2型糖尿病患者糖脂代谢和胰岛β细胞功能的影响。方法302例2型糖尿病患者根据血清铁蛋白水平分为铁蛋白升高组。比较两组的空腹和餐后2小时的血糖、C肽、糖化血红蛋白(HbA1C)、血清总胆固醇、甘油三酯的水平。结果铁... 详细信息

目的探讨铁过负荷对2型糖尿病患者糖脂代谢和胰岛β细胞功能的影响。方法302例2型糖尿病患者根据血清铁蛋白水平分为铁蛋白升高组。比较两组的空腹和餐后2小时的血糖、C肽、糖化血红蛋白(HbA1C)、血清总胆固醇、甘油三酯的水平。结果铁蛋白升高组的空腹和餐后2小时血糖、HbA1C高于铁蛋白正常组,餐后2小时C肽低于铁蛋白正常组。结论铁过负荷可能对2型糖尿病患者的胰岛β细胞功能和血糖控制产生负面影响。

关键词： 2型糖尿病血清铁蛋白铁过负荷胰岛β细胞功能

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铁过负荷与非酒精性脂肪性肝病

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国外医学（生理病理科学与临床分册） 2003年第5期23卷 545-547页

作者：刘芳路长赵英仁西安交通大学第一医院传染科陕西西安710061

当机体出现铁过负荷时 ,肝脏是首先受到损害并且损害最严重的靶器官。铁过负荷在非酒精性脂肪性肝病 (NAFLD)中的作用尚不十分明确。目前认为 ,铁过负荷是NAFLD疾病进展的一个辅助因素 ,其中HFE基因起重要作用 ,该过程可能由胰岛素抵抗... 详细信息

当机体出现铁过负荷时 ,肝脏是首先受到损害并且损害最严重的靶器官。铁过负荷在非酒精性脂肪性肝病 (NAFLD)中的作用尚不十分明确。目前认为 ,铁过负荷是NAFLD疾病进展的一个辅助因素 ,其中HFE基因起重要作用 ,该过程可能由胰岛素抵抗所激发 ,免疫机制也可能参与其中。

关键词：铁过负荷非酒精性脂肪性肝病铁非酒精性脂肪肝

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