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酒精对乳腺癌细胞表皮生长因子受体-钙激活中性蛋白酶通路及细胞迁移的影响

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中国癌症杂志 2016年第10期26卷 820-825页

作者：李勇杰于庆龙潘际刚王宏健宛蕾王旭东贵州医科大学基础医学院生理学教研室贵州贵阳550025 贵州医科大学基础医学院药理学教研室贵州贵阳550025

背景与目的:酒精(ethyl alcohol,Et OH)可促进乳腺癌的恶性演进,但其信号机制尚未完全明了。本研究通过观察Et OH对乳腺癌细胞钙激活中性蛋白酶(calcium-activated neutral protease,CANP)-周期蛋白E/局部黏着斑激酶(focal adhesion kin... 详细信息

背景与目的:酒精(ethyl alcohol,Et OH)可促进乳腺癌的恶性演进,但其信号机制尚未完全明了。本研究通过观察Et OH对乳腺癌细胞钙激活中性蛋白酶(calcium-activated neutral protease,CANP)-周期蛋白E/局部黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)信号通路和细胞迁移的影响,以及表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)在其中的介导作用,探讨Et OH促进乳腺癌细胞迁移的信号机制。方法:以人乳腺肿瘤细胞系MCF-7为模型细胞(MCF-10A乳腺上皮细胞为对照);采用蛋白[质]印迹法(Western blot)分析周期蛋白E和FAK蛋白剪切反应;通过伤口愈合实验观察细胞迁移效应;采用EGFR抑制剂(EGFR inhibitor,EGFR-I)或CANP抑制剂Calpeptin抑制EGFR或CANP活性,观察抑制剂对Et OH诱导CANP1大亚基、周期蛋白E/FAK蛋白剪切及细胞迁移的影响。结果:以Et OH(0.3%)处理模型细胞可观察到周期蛋白E和FAK出现明显蛋白剪切且该效应呈剂量和时间依赖性,还观察到Et OH刺激细胞迁移活动(+47.30%,P蛋白E/FAK蛋白剪切效应受到明显抑制;EGFR-I(3μmol/L)可显著抑制Et OH诱导的CANP1大亚基和周期蛋白E/FAK蛋白剪切及细胞迁移效应(-53.00%,P激活乳腺癌细胞CANP信号活动并促进细胞迁移,EGFR-CANP通路参与介导Et OH与EGF之间的串话,提示EGFR-CANP信号通路中的关键分子可为防止乳腺癌转移的潜在药物靶点。

关键词：酒精表皮生长因子受体钙激活中性蛋白酶细胞迁移乳腺癌

钙激活中性蛋白酶在肝癌细胞迁移能力中的作用

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贵阳医学院学报 2011年第3期36卷 235-237,241页

作者：唐佳艳洪阳向敏郑洋王艳胡晓霞潘娅王旭东周力陈腾祥贵阳医学院附院消化内科贵州贵阳550004 贵阳医学院生理学教研室贵州贵阳550004 贵阳市卫生局贵州贵阳550014 贵阳医学院附院儿科贵州贵阳550004

目的:观察不同转移能力肝癌细胞中钙激活中性蛋白酶(calpain)的表达情况,利用抑制剂抑制cal-pain活性,评价calpain对肝癌细胞迁移能力的影响。方法:用蛋白质印迹(Western blotting)检测不同转移能力肝癌细胞或肝细胞中calpain-1、calpai... 详细信息

目的:观察不同转移能力肝癌细胞中钙激活中性蛋白酶(calpain)的表达情况,利用抑制剂抑制cal-pain活性,评价calpain对肝癌细胞迁移能力的影响。方法:用蛋白质印迹(Western blotting)检测不同转移能力肝癌细胞或肝细胞中calpain-1、calpain-2和Src的表达和酶解情况;用划痕法观察calpain-2抑制剂对高转移性肝癌细胞(MHCC97-H)迁移能力的影响。结果:Western blot结果显示,不同肝细胞系中calpain-1、calpain-2及Src的表达水平和剪切成为低分子量(LMW)活性形式的程度不一样,其中calpain-2和Src的表达与肝癌细胞的迁移能力有相关性,calpain-2抑制剂明显下调MHCC97-H细胞中calpain-2和Src的表达,减少其被剪切的程度;划痕实验结果显示,calpain-2抑制剂能明显减少MHCC97-H细胞向划痕区域迁移,而且抑制剂浓度越大,细胞迁移能力被抑制的程度就越重。结论:calpain-2的表达上调和活性增强可通过激活Src增加肝癌细胞的迁移能力。

关键词：肝癌细胞钙激活中性蛋白酶细胞迁移印迹法,蛋白质

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钙激活中性蛋白酶家族潜在治疗作用的新发现

国外医学（药学分册） 2007年第2期34卷 135-137页

作者：乔虹军事医学科学院毒物药物研究所北京100850

钙激活中性蛋白酶(卡配因,calpain)家族是一组与钙浓度有关的半胱氨酸蛋白酶类,它参与细胞与钙浓度有关的一些功能,如信号转导、细胞增殖和分化及细胞凋亡。在一些人类疾病中发现了钙激活中性蛋白酶活性的改变。特异性钙激活中性蛋白酶... 详细信息

钙激活中性蛋白酶(卡配因,calpain)家族是一组与钙浓度有关的半胱氨酸蛋白酶类,它参与细胞与钙浓度有关的一些功能,如信号转导、细胞增殖和分化及细胞凋亡。在一些人类疾病中发现了钙激活中性蛋白酶活性的改变。特异性钙激活中性蛋白酶抑制剂能够治疗神经肌肉及神经退行性疾病。而钙激活中性蛋白酶活化剂可以治疗一些钙激活中性蛋白酶活性降低导致的疾病,如2型糖尿病及代谢综合征。

关键词：钙激活中性蛋白酶神经变性疾病 2型糖尿病肿瘤

钙激活中性蛋白酶-1在小鼠肝衰竭的表达及意义

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钙激活中性蛋白酶-1在小鼠肝衰竭的表达及意义

钙激活中性蛋白酶在肝癌细胞迁移能力中的作用的研究

第四届中国医师协会感染科医师大会暨传染病诊治高峰论坛、浙江省医学会肝病、感染病学学术年会

作者：李凤竹杨宝山海阳市人民医院感染科哈尔滨医科大学附属第二临床医学院感染科

目的本研究以脂多糖/D-氨基半乳糖(Lps/D-Gal)诱导暴发性肝衰竭的动物模型,通过检测不同时点钙激活中性蛋白酶-1、Caspase-3及细胞色素C的表达,探讨钙激活中性蛋白酶-1在急性肝衰竭参与凋亡过程的机制,以及其抑制剂对肝衰竭的保护作用... 详细信息

目的本研究以脂多糖/D-氨基半乳糖(Lps/D-Gal)诱导暴发性肝衰竭的动物模型,通过检测不同时点钙激活中性蛋白酶-1、Caspase-3及细胞色素C的表达,探讨钙激活中性蛋白酶-1在急性肝衰竭参与凋亡过程的机制,以及其抑制剂对肝衰竭的保护作用。材料和方法雄性昆明种小鼠分为正常组和模型组和保护组,给予脂多糖(50ug/kg)和D-氨基半乳糖(800mg/kg)及钙激活中性蛋白酶-1抑制剂(10mg/kg)建造模型。采用HE和RT-PCR法进行检测,并采眼球血送检化验室检测血清谷丙转氨酶(ALT)总胆红素(TBIL)白蛋白(ALB)数值,观察各组生化指标的变化。结果病理学检查模型组6小时肝细胞明显水肿疏松,可见小坏死灶,凋亡细胞明显增多。8小时坏死灶明显增多,凋亡细胞减少。肝血窦内淤血,汇管区有大量的中性粒细胞浸润;血清生化指标:模型组的肝功改变明显异常,而保护组的肝功较模型组数值变化减低,二者改变情况比较有统计学意义(P蛋白的表达水平是增加的,4h表达有所升高,6h表达量最高和8小时表达量明显增多。而保护组各小时表达量明显减少,二者之间统计学比较有显著性差异(p钙激活中性蛋白酶-1在小鼠急性肝衰竭肝组织中的表达是增加的。钙激活中性蛋白酶-1抑制剂能减少内毒素肝损伤小鼠肝细胞凋亡,下调钙激活中性蛋白酶-1、Caspase-3及细胞色素C的表达,提示其可能通过抑制肝细胞凋亡,在急性肝衰竭中起到了保护作用。

关键词：钙激活中性蛋白酶抑制剂氨基半乳糖肝衰竭模型组

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钙激活中性蛋白酶在肝癌细胞迁移能力中的作用的研究

成年与老年心房颤动犬钙激活中性蛋白酶表达及心房结构的比较

贵州省中西医结合学会2011年消化系病学术交流会暨消化系病新进展学习班

作者：唐佳艳洪阳向敏郑洋王艳胡晓霞王旭东周力陈腾祥贵阳医学院附属医院贵阳市卫生局

目的观察不同转移能力肝癌细胞中钙激活中性蛋白酶(calpain)的表达情况,利用抑制剂抑制calpain活性,评价calpain对肝癌细胞迁移能力的影响。方法用蛋白质印迹(Western blot)检测转移能力肝癌细胞或肝细胞中calpain-1和calpain-2的表达... 详细信息

目的观察不同转移能力肝癌细胞中钙激活中性蛋白酶(calpain)的表达情况,利用抑制剂抑制calpain活性,评价calpain对肝癌细胞迁移能力的影响。方法用蛋白质印迹(Western blot)检测转移能力肝癌细胞或肝细胞中calpain-1和calpain-2的表达和酶解情况;用划痕法观察calpain抑制剂对高转移性肝癌细胞(MHCC97-H)迁移能力的影响。结果Western blot结果显示,不同肝细胞系中calpain-1、calpain-2及Src的表达水平和剪切成为低分子量(LMW)活性形式的程度不一样,其中calpain-2和Src的表达与肝癌细胞的迁移能力有相关性,calpain抑制剂明显下调MHCC97-H细胞中calpain-2和Src的表达,减少其被剪切的程度。划痕实验结果显示,calpain抑制剂能明显减少MHCC97-H细胞向划痕区域迁移,而且抑制剂浓度越大,细胞迁移能力被抑制的程度就越严重。结论calpain家族中,calpain-2的表达上调和活性增加可通过激活Src增加肝癌细胞的迁移能力。

关键词：肝癌细胞钙激活中性蛋白酶细胞迁移

来源： cnki会议评论

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中国心脏起搏与心电生理杂志 2017年第5期31卷 437-442页

作者：董丽君周贤惠李耀东张疆华邢强芦颜美汤宝鹏新疆医科大学第一附属医院心脏起搏电生理科新疆乌鲁木齐83054

目的研究在心房颤动(简称房颤)时左房肌钙激活中性蛋白酶(calpain1、calpain2)、钙蛋白酶抑素(calpastatin)与L-型电压依赖钙通道a1c亚基(LVDCC_(a1c))的表达变化,探讨房颤发生、维持的分子机制。方法健康杂种犬28只,雌雄不限。根据年... 详细信息

目的研究在心房颤动(简称房颤)时左房肌钙激活中性蛋白酶(calpain1、calpain2)、钙蛋白酶抑素(calpastatin)与L-型电压依赖钙通道a1c亚基(LVDCC_(a1c))的表达变化,探讨房颤发生、维持的分子机制。方法健康杂种犬28只,雌雄不限。根据年龄大小、节律随机分为成年窦律组、老年窦律组、成年房颤组、老年房颤组,每组各7只。各房颤组通过持续快速心房起搏建立持续性房颤犬模型。取100g左房组织,用实时荧光定量聚合酶反应(Realtime PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)方法检测犬calpain1、calpain2、calpastatin及LVDCC_(a1c)在mRNA和蛋白质表达水平变化。应用光镜、电镜检测细胞病理及超微结构改变,用DNA断裂的原位末端标记法(TUNEL法)检测细胞凋亡情况。结果与成年组比较,老年组LVDCC_(a1c)在mRNA和蛋白质表达水平显著地降低(P蛋白质表达水平呈现负相关(r=-0.583,P=0.019)。与成年和窦律组比较,老年和房颤组犬心肌纤维化程度加重、细胞超微结构改变(肌原纤维退化,线粒体变性,核固缩)及凋亡指数增加。结论钙激活中性蛋白酶特异性生物活性随年龄及节律改变,可能是心房重构的分子机制之一。

关键词：心血管病学心房颤动钙激活中性蛋白酶 L-型钙通道心房结构重构

人钙激活中性蛋白酶-1及-2催化亚基的生物信息学分析

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贵阳医学院学报 2011年第4期36卷 335-339,343页

作者：徐国强胡晓霞潘娅董宇华张金娟张敏张祥令臧贵勇熊英王旭东陈腾祥贵阳医学院生理学教研室贵州贵阳550004 贵阳医学院机能实验室贵州贵阳550004 贵阳医学院组织胚胎学教研室贵州贵阳550004 贵阳医学院解剖学教研室贵州贵阳550004

目的:对人钙激活中性蛋白酶(calpain)的2个亚家族成员calpain-1和calpain-2进行功能的比较分析。方法:以美国生物技术国家中心(NCBI)的蛋白质数据库获取人calpain-1和calpain-2的参考序列号(Ref-Seq)和氨基酸序列,通过UniProt数据库检索... 详细信息

目的:对人钙激活中性蛋白酶(calpain)的2个亚家族成员calpain-1和calpain-2进行功能的比较分析。方法:以美国生物技术国家中心(NCBI)的蛋白质数据库获取人calpain-1和calpain-2的参考序列号(Ref-Seq)和氨基酸序列,通过UniProt数据库检索2个蛋白的一般蛋白质功能注释,获取相关结构域信息;利用DNA-MAN软件对结构域进行序列比对,用蛋白质结构数据(PBD)和蛋白修饰数据库(PhosphoSit Plus)进行修饰位点空间分布的分析及用String9.0软件进行蛋白质-蛋白质相互作用分析。结果:结构域比对分析显示,人calpain-1和calpain-2的钙蛋白酶催化结构域保守性程度高,而EF-hand结构域的差异比较大;翻译修饰分析发现,2个蛋白的修饰有明显的不同,人calpain-1的修饰比较单一,仅发现在赖氨酸(K84)有乙酰化修饰,而calpain-2的修饰形式和位点相对多样,分布在分子表面、间隙内及分子内部。相互作用分析发现,与人calpain-1和calpain-2相互作用的蛋白质有少部分是相同的,而多数是不同的,分别与不同细胞活动有关。结论:人calpain-1和cal-pain-2的钙蛋白酶催化结构域是高度保守的,二者功能上差异主要是由于调控位点(EH-hand和翻译后修饰位点)的差异引起。

关键词：钙激活中性蛋白酶催化亚基生物信息学结构域翻译后修饰

红景天苷对大鼠体外培养海马神经元物理缺氧损伤钙离子含量、钙激活中性蛋白酶及钙通道蛋白表达的影响

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新乡医学院学报 2012年第4期29卷 260-264页

作者：寇天雷张永亮武警后勤学院附属医院病理科天津300162 武警后勤学院科研部天津300162

目的研究红景天苷对大鼠海马神经元物理缺氧损伤的保护作用及机制。方法体外原代培养新生SD大鼠海马神经元并鉴定。以尼莫地平为阳性对照药,通过苏木素-伊红染色、激光共聚焦显微镜技术观察各实验组神经元形态,通过荧光分光光度法检测... 详细信息

目的研究红景天苷对大鼠海马神经元物理缺氧损伤的保护作用及机制。方法体外原代培养新生SD大鼠海马神经元并鉴定。以尼莫地平为阳性对照药,通过苏木素-伊红染色、激光共聚焦显微镜技术观察各实验组神经元形态,通过荧光分光光度法检测各实验组神经元细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i),实时定量聚合酶链反应检测各实验组钙通道蛋白NMDAR1、Cav1.3 mRNA的表达差异,免疫细胞化学染色法检测各实验组钙激活中性蛋白酶Calpain 1蛋白质的表达差异,分析红景天苷对大鼠海马神经元物理缺氧损伤的保护作用。结果红景天苷各剂量组均可提高缺氧神经元存活率。与模型组比较,红景天苷各剂量组神经元[Ca2+]i显著降低(P钙通道和NMDAR亚基的表达抑制钙超载,对神经元起保护作用。

关键词：红景天苷神经元缺氧损伤钙超载钙激活中性蛋白酶

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蚕豆病与钙激活中性蛋白酶原—酶体系

生命的化学(中国生物化学会通讯) 1988年第5期 8-9页

作者：卢义钦刘俊凡唐建生湖南医科大学生化教研室邵阳卫生学校生化教研组

G6PD(6-磷酸葡萄糖脱氢酶)是磷酸戊糖途径的关键酶(EC 1.***.1.49),一般是由分子量4.97～5.9万的相同亚基组成的二聚体,后者也可能聚集为活性的四聚体或寡聚物.对A~+型、B型和Hektoen G 6PD的结构,已完成了部分氨基酸的序列分析.红细胞G6P... 详细信息

G6PD(6-磷酸葡萄糖脱氢酶)是磷酸戊糖途径的关键酶(EC 1.***.1.49),一般是由分子量4.97～5.9万的相同亚基组成的二聚体,后者也可能聚集为活性的四聚体或寡聚物.对A~+型、B型和Hektoen G 6PD的结构,已完成了部分氨基酸的序列分析.红细胞G6PD同NADP~+牢固结合,在G 6PD催化下,能保证红细胞内NADPH的不断供应.而NADPH又是

关键词：钙激活中性蛋白酶患者蚕豆病胡豆黄病植物性食物中毒香豌豆