检索结果-南通市图书馆

现代生物医学进展 2024年第17期24卷 3205-3210页

作者：唐敏怡莫广财区家铭王帅吴晓丽赵子建李芳红广东工业大学生物医药学院广东广州510006 南方医科大学顺德医院广东佛山528300

目的:构建重组pcdna3.1-6×HIS-mselenbp2质粒并探讨SELENBP2蛋白与FKBP38蛋白的相互作用。方法:首先以小鼠肝脏总RNA为模板,根据小鼠SELENBP2基因CDS序列设计的引物通过RT-PCR扩增SELENBP2蛋白编码序列,通过基因工程技术进行限制性核... 详细信息

目的:构建重组pcdna3.1-6×HIS-mselenbp2质粒并探讨SELENBP2蛋白与FKBP38蛋白的相互作用。方法:首先以小鼠肝脏总RNA为模板,根据小鼠SELENBP2基因CDS序列设计的引物通过RT-PCR扩增SELENBP2蛋白编码序列,通过基因工程技术进行限制性核酸内切酶酶切、与pcdna3.1-6×HIS载体连接并转化入JM108感受态大肠杆菌扩增,挑选阳性单克隆大肠杆菌并提取质粒后得到重组pcdna3.1-6×HIS-mselenbp2质粒。重组质粒经测序分析鉴定后,使用Lipofectamine 3000转染试剂转染至小鼠肝细胞--AML12细胞中培养30 h,采用Western blot法检测蛋白表达情况。使用AlphaFold-Multimer预测SELENBP2蛋白与FKBP38蛋白相互作用的可能性及可能相互作用的结构域。最后,将重组质粒转染入过表达FKBP38蛋白的AML12细胞中,培养30 h后收集细胞蛋白样品,进行免疫共沉淀实验。结果:重组pcdna3.1-6×HIS-mselenbp2质粒测序结果显示插入的SELENBP2蛋白编码序列与GenBank中SELENBP2基因CDS序列相同,且转染重组质粒后,AML12细胞能有效表达SELENBP2-HIS融合蛋白。AlphaFold-Multimer结果显示SELENBP2蛋白与FKBP38蛋白相互作用的可能性较高,且作用于FKBP38蛋白的TPR结构域。免疫沉淀实验结果显示,在AML12细胞中,SELENBP2蛋白与FKBP38蛋白存在相互作用。结论:重组pcdna3.1-6×HIS-mselenbp2质粒构建成功并能在AML12细胞中正确表达,为进一步研究SENELBP2蛋白的功能奠定了基础。SELENBP2蛋白与FKBP38蛋白相互作用,为SELENBP2蛋白的研究进一步拓宽了思路,为深入研究SELENBP2蛋白在肝脏中的生物学功能提供了新方向。

关键词： SELENBP2蛋白重组pcdna3.1-6xhis-mselenbp2质粒 FKBP38蛋白免疫共沉淀肝脏

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