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重组人肝细胞生长因子在Celisor液中对无心跳供肝的保护作用及其机制

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中华实验外科杂志 2009年第8期26卷 1009-1011页

作者：李涛唐华美裘国强孙星彭志海上海交通大学附属上海市第一人民医院普外科 200080 上海交通大学附属上海市第一人民医院病理科 200080

目的探讨Celsior（CS）液中添加重组人肝细胞生长因子（rhHGF）对无心跳供肝（NHBD）的保护作用及其可能机制。方法利用大鼠肝移植模型，比较添加rhHGF（10μg/L）的CS液（实验组）与添加等量生理盐水的CS液（对照组）两组门静脉再通后... 详细信息

目的探讨Celsior（CS）液中添加重组人肝细胞生长因子（rhHGF）对无心跳供肝（NHBD）的保护作用及其可能机制。方法利用大鼠肝移植模型，比较添加rhHGF（10μg/L）的CS液（实验组）与添加等量生理盐水的CS液（对照组）两组门静脉再通后胆汁产生量、肝组织含水量及肝酶水平，观察生存率，TUNEL法检测肝细胞凋亡及常规病理组织学检查。结果与对照组比较，试验组NHBD供肝移植后在门静脉再通1h、3h及6h胆汁产生量明显增多（P〈0．05），ALT与AST水平明显降低（P〈0．05）；在门静脉再通1h肝组织含水量及肝细胞凋亡指数明显下降（P〈0．05）；7d大鼠生存率明显升高（P〈0．05），病理组织学提示肝细胞水肿变性明显减轻，无肝细胞坏死及肝窦淤血。结论CS灌注保存液中添加外源性rhHGF可明显改善其对NHBD供肝的保存效果，这可能与其减少肝细胞凋亡有关。

关键词：肝脏无心跳供体重组人肝细胞生长因子 Celisor液

重组人肝细胞生长因子真核表达的定性及定量检测

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生命科学研究 2001年第1期5卷 60-62页

作者：丘玉昌徐伟吴曙光第一军医大学药物研究所中国广东广州510515

将人肝细胞生长因子 ( human hepatocyte growth factor ,h HGF)全长 c DNA重组入 p EE1 4真核稳定表达质粒 ,用 lipofectin脂质体将 p EE1 4 /rh HGF转染入 CHO-K1细胞 ,蛋氨酸亚氨基代砜 ( methioninesulfoximine,MSX)筛选出阳性细胞... 详细信息

将人肝细胞生长因子 ( human hepatocyte growth factor ,h HGF)全长 c DNA重组入 p EE1 4真核稳定表达质粒 ,用 lipofectin脂质体将 p EE1 4 /rh HGF转染入 CHO-K1细胞 ,蛋氨酸亚氨基代砜 ( methioninesulfoximine,MSX)筛选出阳性细胞克隆 .利用 RT-PCR检测 rh HGF m RNA的表达 ,通过 ELISA法测定rh HGF的蛋白表达 ,3H掺入法检测培养上清液对大鼠原代培养肝细胞 DNA合成的影响 .结果表明转染p EE1 4 /rh HGF的细胞可扩增出 h HGF特异的 396bp RT-PCR片段 ,培养上清液明显促进大鼠肝细胞 DNA的合成 ,ELISA法测出上清液中 rh HGF的含量在 8μg/L以上 ,显示 rh HGF在

关键词：重组人肝细胞生长因子真核表达 ELISA法定性分析定量检测

重组人肝细胞生长因子在巴斯德毕赤酵母中的分泌表达

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中华实验外科杂志 2009年第4期26卷 530-530页

作者：董永红吕云福周鹏王爱萍徐钧西安交通大学第一医院肝胆外科 710061 海南省人民医院外一科中国热带农业大学生物技术研究所山西省人民医院

肝细胞生长因子（HGF）具有促进肝细胞再生、抑制肝纤维化及肝细胞凋亡、溶解硬变肝脏纤维组织、减轻肝损害等功能。其活性结构为仅α与β链通过二硫键连接而形成的异二聚体。

关键词：重组人肝细胞生长因子巴斯德毕赤酵母分泌表达肝细胞再生肝细胞凋亡肝纤维化纤维组织异二聚体

重组人肝细胞生长因子联合粒细胞集落刺激因子对血管新生的影响

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中华实验外科杂志 2010年第6期27卷 842-842页

作者：杨继武周业庭刘伟平张立飞姜志良邢壮杰江苏省沭阳县人民医院普通外科 223600 大连大学附属中山医院血管外科

有研究表明，重组人粒细胞集落刺激因子（rhG—CSF）和重组人肝细胞生长因子（rhG—HGF）均能诱导下肢缺血区域的血管生成。本实验旨在兔下肢缺血模型上观察rhG-CSF和rhG—HGF联合应用对缺血肢体侧枝血管新生的影响。

关键词：重组人粒细胞集落刺激因子重组人肝细胞生长因子血管新生 rhG-CSF 血管生成缺血区域缺血肢体联合应用

多拷贝重组人肝细胞生长因子(rhHGF)基因毕赤酵母分泌型表达载体的构建

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多拷贝重组人肝细胞生长因子(rhHGF)基因毕赤酵母分泌型表达载体...

重组人肝细胞生长因子保护四氯化碳染毒小鼠肝的效应

2005全国第二届核酸疫苗研讨会

作者：杜培革李贺安丽萍吕刚敬舒北华大学药学院北华大学附属医院

利用PCR方法以人胎肝cDNA文库为模板,克隆重组人肝细胞生长因子(rhHGF)全长cDNA,经序列分析后,插入pPIC9K中,构建多拷贝串联rhHGF基因酵母分泌型表达载体pPIC9K-rhHGF,转化酵母宿主菌Pichia Pastoris GS115。PCR检测证实多拷贝的pPIC9K-... 详细信息

利用PCR方法以人胎肝cDNA文库为模板,克隆重组人肝细胞生长因子(rhHGF)全长cDNA,经序列分析后,插入pPIC9K中,构建多拷贝串联rhHGF基因酵母分泌型表达载体pPIC9K-rhHGF,转化酵母宿主菌Pichia Pastoris GS115。PCR检测证实多拷贝的pPIC9K-rhHGF载体整合于酵母菌GS115。

关键词：重组人肝细胞生长因子巴斯德毕赤酵母

来源： cnki会议评论

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锦州医科大学学报 1997年第4期 20-20页

作者：宫德正邹原梅懋华大连医科大学生理教研室

为检测重组人肝细胞生长因子（ｒ－ｈＨＧＦ）的保肝作用，本工作观察到ｒ－ｈＨＧＦ降低ＣＣｌ４染毒小鼠血清ＡＬＴ和ＡＳＴ升高的幅度，减轻肝组织受损的程度和防止肝细胞器的破坏。而且，ｒ－ｈＨＧＦ的这种保肝效应所需剂量极小，... 详细信息

为检测重组人肝细胞生长因子（ｒ－ｈＨＧＦ）的保肝作用，本工作观察到ｒ－ｈＨＧＦ降低ＣＣｌ４染毒小鼠血清ＡＬＴ和ＡＳＴ升高的幅度，减轻肝组织受损的程度和防止肝细胞器的破坏。而且，ｒ－ｈＨＧＦ的这种保肝效应所需剂量极小，为１５ｎｇ／ｇ体重。根据上述资料推测，ｒ－ｈＨＧＦ具有保护小鼠肝以抗ＣＣｌ４损伤作用。

关键词：重组人肝细胞生长因子四氯化碳保护作用

Celsior液中HGF对大鼠肝移植后INF-γ、IL-4与IL-10水平的影响

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中华肝胆外科杂志 2010年第7期16卷 524-526页

作者：李涛唐华美孙星裘国强彭志海上海市器官移植中心、上海市第一人民医院肝胆胰外科 200080 上海市器官移植中心、上海市第一人民医院病理科 200080

目的探讨Celsior（CS）液中添加重组人肝细胞生长因子（recombinant human hepato-cyte growth factor,rhHGF）对大鼠肝移植后INF-γ、IL-4与IL-10水平的影响.方法利用无心跳供肝（non-heart beating donor,NHBD）大鼠肝移植模型,ELISA法检测实验组（CS添加rhHGF）和对照组（CS添加生理盐水）门静脉再通1h血清INF-γ、IL-4与IL-10水平,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）测定肝组织INF-γ、IL-4与IL-10 mRNA水平,并观察肝组织病理及大鼠生存率.结果与对照组相比,试验组NHBD供肝移植后在门静脉再通1 h后血清INF-γ水平及肝组织INF-γ mRNA水平明显低于对照组（P〈0.05）,血清IL-4与IL-10水平及相应肝组织IL-4与IL-10 mRNA水平明显高于对照组（P〈0.05）,实验组大鼠生存率明显高于对照组（P＜0.05）,病理组织学提示实验组肝细胞水肿变性减轻,无明显肝细胞坏死、肝窦淤血及门静脉充血.结论 CS灌注保存液中添加外源性rhHGF可改善其对NHBD供肝的保存效果,提高术后生存率,这可能与其下调INF-γ,上调IL-4与IL-10的产生有关.

关键词：肝移植 Celisor液重组人肝细胞生长因子无心跳供体 INF-γ IL-4 IL-10

rh-HGF联合rh-VEGF165促内皮细胞增殖及治疗实验性大鼠下肢缺血的实验研究

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rh-HGF联合rh-VEGF165促内皮细胞增殖及治疗实验性大鼠下肢缺血的...

作者：张滕南昌大学

学位级别：硕士

目的:构建实验性大鼠下肢缺血模型及培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),使用重组人血管内皮细胞生长因子165(rh-VEGF165)和重组肝细胞生长因子(rh-HGF)刺激,观察刺激后体外HUVECs的增殖及体外管腔形成情况,体内下肢毛细血管新生情况。方法:1... 详细信息

目的:构建实验性大鼠下肢缺血模型及培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),使用重组人血管内皮细胞生长因子165(rh-VEGF165)和重组肝细胞生长因子(rh-HGF)刺激,观察刺激后体外HUVECs的增殖及体外管腔形成情况,体内下肢毛细血管新生情况。方法:1.研究rh-VEGF165和rh-HGF刺激HUVECs的增殖情况:采用不同浓度的rh-VEGF165和rh-HGF(0 ng/ml、5 ng/ml、10 ng/ml、30 ng/ml、50 ng/ml、75ng/ml、100ng/ml、120ng/ml)培养HUVECs细胞,CCK-8(水溶性四唑盐比色法)检测HUVECs增殖情况。2.研究rh-VEGF165联合rh-HGF刺激HUVECs的增殖情况:采用联合不同浓度的rh-VEGF165和rh-HGF(0ng/ml+0ng/ml、5ng/ml+5ng/ml、10ng/ml+10ng/ml、30ng/ml+30ng/ml、50ng/ml+50ng/ml、75ng/ml+75ng/ml、100ng/ml+100ng/ml、120ng/ml+120ng/ml)培养HUVECs细胞,CCK-8检测HUVECs增殖情况。3.研究rh-VEGF165和rh-HGF刺激HUVECs的体外管腔形成情况:分别以对照组0.9%的生理盐水、100ng/ml rh-VEGF165、100ng/ml rh-HGF和100ng/ml rh-VEGF165联合100ng/ml rh-HGF培养HUVECs细胞,相差显微镜观察体外管腔形成情况。4.研究rh-VEGF165和rh-HGF在体内的作用情况:建立实验性大鼠下肢缺血模型,以对照组0.9%的生理盐水、100ng/ml rh-VEGF165、100ng/ml rh-HGF和100ng/ml rh-VEGF165联合100ng/ml rh-HGF作用于实验性大鼠,28天后取缺血下肢腓肠肌标本,做H-E染色观察肌组织核情况,免疫组化观察毛细血管新生情况。结果:***-VEGF165刺激HUVECs的增殖情况:随着rh-VEGF165的浓度升高,HUVECs的细胞光密度值(OD值)也随之升高,与对照组相比较差异均有统计学意义(P0.05)。***-HGF刺激HUVECs的增殖情况:随着rh-HGF的浓度升高,HUVECs的OD值也随之升高,与对照组相比较差异均有统计学意义(P0.05)。***-VEGF165联合rh-HGF刺激HUVECs的增殖情况:随着不同联合浓度改变,HUVECs的OD也随之升高,与对照组相比较差异均有统计学意义(P0.05)。***-VEGF165的浓度为100ng/ml、rh-HGF的浓度为100ng/ml、rh-VEGF165联合rh-HGF的浓度为100ng/ml+100ng/ml,rh-VEGF165联合rh-HGF的OD值>rh-HGF的OD值>rh-VEGF165的OD值,三者之间的OD值有统计学意义(P0.05),rh-VEGF165组、rh-VEGF165联合rh-HGF组与对照组间差异均有统计学意义(P0.05),rh-VEGF165组、rh-VEGF165联合rh-HGF组与对照组间差异均有统计学意义(P细胞增殖、毛细血管新生,改善下肢缺血部位症状。

关键词：重组人血管内皮生长因子165 重组人肝细胞生长因子细胞增殖血管新生

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基因工程下游标准化体系工艺技术研究

基因工程下游标准化体系工艺技术研究

作者：刘道洁山西医科大学

学位级别：硕士

基因工程产品的生产是一项十分复杂的系统工程，可分为上游和下游两个阶段，以分离目的基因、构建工程菌为主要内容的上游工艺是研制基因工程产品必不可少的基础，而作为下游工艺核心内容的工程菌的发酵培养、目的蛋白的分离纯化却直接... 详细信息

基因工程产品的生产是一项十分复杂的系统工程，可分为上游和下游两个阶段，以分离目的基因、构建工程菌为主要内容的上游工艺是研制基因工程产品必不可少的基础，而作为下游工艺核心内容的工程菌的发酵培养、目的蛋白的分离纯化却直接控制着整个基因工程产品的质量、产量。本课题利用基因工程技术，重点从基因工程下游阶段着手研究，利用最新现代生物技术研究并建立经优化的高密度发酵工艺模式及高效分离纯化包涵体重组蛋白模式。一．研究并建立一种适于目的蛋白高效表达的高密度发酵工艺模式高密度发酵中，人们最关心的问题主要是质粒稳定性的维持、外源基因的高效表达及对下游纯化的影响。针对这些问题，我们采用分批补料培养的方法优化发酵培养基配方及部分发酵条件，探索出即适于外源基因高效表达，又利于产品纯化的发酵工艺。以我室构建并稳定表达的重组质粒pBV220-γ-IFN、pBV220-HGFα、pBV220-HGFβ、pBV220-hPK5为模型，分别从不同的表达宿主菌中筛选出一种适合大规模生产的菌种BL21(DE3)，该工程菌株连续传代100代表达质粒不丢失，表达量稳定;采用***公司的BIOSTAT-C15L自控发酵罐，运用分批补料技术分别进行四种工程菌的高密度发酵，通过优化工程菌发酵的培养基配方及优化部分发酵条件(通气量、搅拌速度、补料速度)，最终建立一种适于目的基因高效表达的高密度发酵工艺模式。发酵密度OD=40—42，SDS—PAGE及凝胶密度扫描分析目的基因产物占菌体总蛋白20％以上。二．研究并建立一种包涵体中高效分离纯化目的蛋白的优化模式重组蛋白分离纯化工艺中分离效率的提高、生物活性效率的提高及工艺的稳定性是尤其重要的，针对这些问题，我们在层析纯化前尽山西医科大学生物化学与分子生物学 2003届硕士学位论文可能地提高包涵体纯度，并选择合适层析方法的同时合理的组合色谱分离单元。以大肠杆菌内包涵体形式表达的重组蛋白重组人Y一工FN、 HGFa、HGFp、hPKS为模型，系统研究包涵体的洗涤及其色谱层析纯化工艺，采用超声接合溶菌酶法破碎菌体后，用含有低浓度尿素的包涵体洗涤液反复超声洗涤，采用最新反相色谱纯化技术SOUCE30RPC分离包涵体蛋白，经SDS一PAGE及凝胶密度扫描分析，目的基因产物占菌体总蛋白的90%以上，杂蛋白明显减少;包涵体复性后，采用AKTA purifier层析仪、Sepharose Fast Flow、Sephaerayl系列凝胶填料以及HitraP Selection Kit及XK型系列层析柱利用不同目的蛋白的各种理化特性不同运用三步纯化策略对重组人7一IFN、HGFa、HGFp、 hPKS分别进行高效色谱纯化，筛选优化条件从而建立了一种有效的从包涵体中分离纯化目的蛋白易于放大的工艺模式，纯化产物纯度>98 %。结论: 总之，通过对发酵罐中重组工程菌各种培养因素的研究，建立了一种高密度、高表达发酵工艺体系，为重组蛋白的后续纯化提供了大量、稳定的原料供应;通过对不同目的蛋白的色谱行为的系统研究，建立了一种高效稳定、快速简洁、易于放大的包涵体重组蛋白分离纯化体系。目前，利用基因工程技术生产目的蛋白已在我国得到广泛发展，对于重组产物而言其下游工艺尤其重要，本课题为基因工程下游发酵、纯化工艺路线探索出一个切实可行的程序，同时也为基因工程产品产业化放大提供了一个有益的借鉴。

关键词：分批补料高密度发酵包涵体纯化重组人γ-干扰素重组人肝细胞生长因子