rh-HGF联合rh-VEGF165促内皮细胞增殖及治疗实验性大鼠下肢缺血的实验研究

作     者：张滕 

作者单位：南昌大学 

学位级别：硕士

导师姓名：周为民

授予年度：2017年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 10[医学] 

主      题：重组人血管内皮生长因子165 重组人肝细胞生长因子 细胞增殖 血管新生 

摘      要：目的:构建实验性大鼠下肢缺血模型及培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),使用重组人血管内皮细胞生长因子165(rh-VEGF165)和重组肝细胞生长因子(rh-HGF)刺激,观察刺激后体外HUVECs的增殖及体外管腔形成情况,体内下肢毛细血管新生情况。方法:1.研究rh-VEGF165和rh-HGF刺激HUVECs的增殖情况:采用不同浓度的rh-VEGF165和rh-HGF(0 ng/ml、5 ng/ml、10 ng/ml、30 ng/ml、50 ng/ml、75ng/ml、100ng/ml、120ng/ml)培养HUVECs细胞,CCK-8(水溶性四唑盐比色法)检测HUVECs增殖情况。2.研究rh-VEGF165联合rh-HGF刺激HUVECs的增殖情况:采用联合不同浓度的rh-VEGF165和rh-HGF(0ng/ml+0ng/ml、5ng/ml+5ng/ml、10ng/ml+10ng/ml、30ng/ml+30ng/ml、50ng/ml+50ng/ml、75ng/ml+75ng/ml、100ng/ml+100ng/ml、120ng/ml+120ng/ml)培养HUVECs细胞,CCK-8检测HUVECs增殖情况。3.研究rh-VEGF165和rh-HGF刺激HUVECs的体外管腔形成情况:分别以对照组0.9%的生理盐水、100ng/ml rh-VEGF165、100ng/ml rh-HGF和100ng/ml rh-VEGF165联合100ng/ml rh-HGF培养HUVECs细胞,相差显微镜观察体外管腔形成情况。4.研究rh-VEGF165和rh-HGF在体内的作用情况:建立实验性大鼠下肢缺血模型,以对照组0.9%的生理盐水、100ng/ml rh-VEGF165、100ng/ml rh-HGF和100ng/ml rh-VEGF165联合100ng/ml rh-HGF作用于实验性大鼠,28天后取缺血下肢腓肠肌标本,做H-E染色观察肌组织核情况,免疫组化观察毛细血管新生情况。结果:***-VEGF165刺激HUVECs的增殖情况:随着rh-VEGF165的浓度升高,HUVECs的细胞光密度值(OD值)也随之升高,与对照组相比较差异均有统计学意义(P0.05)。***-HGF刺激HUVECs的增殖情况:随着rh-HGF的浓度升高,HUVECs的OD值也随之升高,与对照组相比较差异均有统计学意义(P0.05)。***-VEGF165联合rh-HGF刺激HUVECs的增殖情况:随着不同联合浓度改变,HUVECs的OD也随之升高,与对照组相比较差异均有统计学意义(P0.05)。***-VEGF165的浓度为100ng/ml、rh-HGF的浓度为100ng/ml、rh-VEGF165联合rh-HGF的浓度为100ng/ml+100ng/ml,rh-VEGF165联合rh-HGF的OD值rh-HGF的OD值rh-VEGF165的OD值,三者之间的OD值有统计学意义(P0.05),rh-VEGF165组、rh-VEGF165联合rh-HGF组与对照组间差异均有统计学意义(P0.05),rh-VEGF165组、rh-VEGF165联合rh-HGF组与对照组间差异均有统计学意义(P0.05),rh-VEGF165组、rh-VEGF165联合rh-HGF组间差异有统计学意义(P0.05)。结论:rh-VEGF165联合rh-HGF可成功在体内、体外促进血管新生,且作用强于单独使用的rh-VEGF165、rh-HGF,二者协同作用可促进血管内皮细胞增殖、毛细血管新生,改善下肢缺血部位症状。