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口服表达胸腺肽和鸡干扰素融合蛋白的重组乳酸乳球菌对鸡肠道菌群影响的研究

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中国预防兽医学报 2023年第10期45卷 1045-1053页

作者：刘增琪王贺胡洪娇崔子扬邱宇张素华崔红玉王云峰何高明石河子大学动物科技学院新疆石河子832002 哈尔滨国生生物科技股份有限公司黑龙江哈尔滨150028 河北北方大学临床医学院河北张家口075000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所黑龙江哈尔滨150069

为构建表达胸腺肽和鸡γ干扰素融合蛋白(Tα1-cIFN-γ)的重组乳酸乳球菌并检测其作为口服免疫增强剂对鸡外周血单个核细胞(PBMC)的增殖活性及鸡肠道菌群的影响,本研究将鸡胸腺肽(Tα1)和鸡干扰素(cIFN-γ)的编码基因序列(去除干扰素信... 详细信息

为构建表达胸腺肽和鸡γ干扰素融合蛋白(Tα1-cIFN-γ)的重组乳酸乳球菌并检测其作为口服免疫增强剂对鸡外周血单个核细胞(PBMC)的增殖活性及鸡肠道菌群的影响,本研究将鸡胸腺肽(Tα1)和鸡干扰素(cIFN-γ)的编码基因序列(去除干扰素信号肽编码基因序列),并按照宿主菌乳酸乳球菌NZ3900株的基因组优化密码子后,以经G4S-linker连接的Tα1-cIFN-γ基因为模板,采用PCR扩增携带表达载体p NZ8149同源臂及HA标签的目的基因序列(Tα1-cIFN-γ-HA);通过PCR扩增携带Tα1-cIFN-γ-HA基因序列同源臂的全长p NZ8149载体序列,利用同源重组的方式将这两段基因连接构建重组质粒p NZ8149-Tα1-cIFN-γ-HA,并经PCR和测序鉴定正确后电转化乳酸乳球菌NZ3900感受态细胞中,构建重组乳酸乳球菌p NZ8149-Tα1-cIFN-γ-HA/NZ3900(r ***-Tα1-cIFN-γ)并经PCR和测序鉴定;将重组乳酸乳球菌r ***-Tα1-cIFN-γ经乳酸链球菌素(Nisin)诱导6 h~7 h,离心超声破碎后取上清采用western blot鉴定Tα1-cIFN-γ的表达。结果显示,r ***-Tα1-cIFN-γ经PCR扩增到3185 bp的目的基因片段,测序结果显示目的片段完全正确;且在约25 ku处出现特异性条带,与目的蛋白Tα1-cIFN-γ大小相符,利用BCA蛋白测定试剂盒构建标准曲线,对Tα1-cIFN-γ绝对定量显示其含量为31μg/m L。以重组乳酸乳球菌裂解液(含重组蛋白40μg/m L,重组菌2×10^(9)cfu/mL)经口服免疫21日龄SPF鸡,并于28日龄加强免疫一次,于首免后2周、4周、7周采血分离PBMC,并分别采用Con A+Ionomycin、Con A+PMA及LPS刺激后,采用CCK-8法检测鸡PBMC的增殖活性。结果显示,经刺激后的各实验组鸡于首免后2周、4周、7周PBMC的增殖活性均极显著高于阴性对照组(口服PBS的鸡)(P乳酸杆菌属、普拉梭菌属和黏液真杆菌属等有益菌群显著增加;而拟杆菌门中的瘤胃菌属、另枝菌属等机会致病菌属显著减少。菌种重要性的LEf Se分析结果显示,与阴性对照组相比,口服r ***-Tα1-cIFN-γ对SPF鸡肠道菌群的组成有显著影响,来自杆菌纲、乳杆菌目、乳杆菌科、乳杆菌属和厚壁菌门等有益菌成为肠道菌群内的重要菌种。上述结果首次表明,口服r ***-Tα1-cIFN-γ不仅显著提高鸡PBMC的增殖活性等细胞免疫反应,而且还可以改善肠道菌群结构和组成,提高有益菌属的丰度,降低机会致病菌的丰度。本研究为天然绿色新型口服免疫增强剂和免疫佐剂的研制奠定了基础。

关键词：胸腺肽鸡干扰素重组乳酸乳球菌 16S rDNA 肠道菌群

鸭坦布苏病毒E蛋白抗体的制备和重组乳酸乳球菌载体的构建

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鸭坦布苏病毒E蛋白抗体的制备和重组乳酸乳球菌载体的构建

作者：温锦芳广东海洋大学

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鸭坦布苏病毒病是由鸭坦布苏病毒（Duck Tembusu virus,DTMUV）感染引起鸭的致病性传染病,引起感染的肉鸭和蛋鸭饲料吸收率降低、产蛋量下降,以及一系列的输卵管疾病和神经功能障碍等症状。该病毒可在不同日龄的鸭群中广泛传播,更重要... 详细信息

鸭坦布苏病毒病是由鸭坦布苏病毒（Duck Tembusu virus,DTMUV）感染引起鸭的致病性传染病,引起感染的肉鸭和蛋鸭饲料吸收率降低、产蛋量下降,以及一系列的输卵管疾病和神经功能障碍等症状。该病毒可在不同日龄的鸭群中广泛传播,更重要的是其宿主不断扩大,相继在其他禽类如鹅、鸡、鸽子、麻雀中发现。目前市场上的商品化疫苗均需经肌肉注射进行免疫,容易引起应激,且免疫程序繁琐。因此,研制出一种安全性高且能口服的抗病毒疫苗十分必要。乳酸乳球菌具有调节机体免疫的功能,还能表达细菌和病毒抗原以进行疫苗安全接种。本研究首先制备了鸭坦布苏病毒E蛋白多克隆抗体和单克隆抗体,以此为基础,建立了表达DTMUV E蛋白domain I/II结构域蛋白的重组乳酸乳球菌NZ3900-p NZ8149-domain I-II,经Nisin诱导剂诱导获得高表达的目的蛋白,为后期制备鸭坦布苏病毒的口服免疫疫苗奠定坚实的实验基础。具体研究如下:（1）鸭坦布苏病毒E蛋白多克隆抗体和单克隆抗体的制备。构建原核表达重组质粒p ET28a-E并成功表达E蛋白,经IPTG诱导,SDS-PAGE实验结果显示E蛋白以包涵体蛋白形式表达,分子量大小为40 KDa左右。将重组蛋白免疫新西兰耳大白兔制备多克隆抗体,经Western blot检测证明多克隆抗体能特异性识别E蛋白;将重组蛋白免疫BALB/c小鼠,达到融合效价的小鼠进行细胞融合和亚克隆筛选,最终得到一株能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株,命名为2G10。收获2G10的细胞上清和制备的腹水,经过western blot检测证明上清和腹水能够特异性识别E蛋白。（2）鸭坦布苏病毒E蛋白重组乳酸乳球菌载体的构建。将优化后的E基因和domain I/II结构域基因、domain III结构域基因,截短E基因片段分别与线性化的p NZ8149构建重组质粒,制备乳酸乳球菌NZ3900感受态,将p NZ8149-E、p NZ8149-domain I-II、p NZ8149-domain III、p NZ8149-E（截短）重组质粒分别转入NZ3900感受态获得重组乳酸乳球菌载体,Nisin诱导目的蛋白表达,超声波破碎获取蛋白,以自行制备的抗体作一抗,western blot检测结果可知,domain I/II结构域蛋白表达量高,其余片段蛋白表达未能经制备的抗体识别或没表达。三因素三水平验证domain I/II结构域蛋白最大表达量条件为Nisin:1 ng/m L、OD=0.5,时间=5 h,蛋白表达位置检测为上清和沉淀都有表达,本研究成功构建鸭坦布苏病毒E蛋白及其不同结构域蛋白的重组乳酸乳球菌,并以自行制备的抗体检测出domain I/II结构域蛋白蛋白的表达,为后续继续研究新型DTMUV口服疫苗提供参考。

关键词：鸭坦布苏病毒 E蛋白多克隆抗体单克隆抗体重组乳酸乳球菌

表达PEDV S蛋白重组乳酸乳球菌的构建及其免疫原性的研究

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表达PEDV S蛋白重组乳酸乳球菌的构建及其免疫原性的研究

作者：蒋飞洋山西农业大学

学位级别：硕士

猪流行性腹泻(PED)是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的一种高度传染性的猪肠道疾病,主要侵袭小肠上皮细胞,具有致仔猪严重急性水样腹泻、高发病率和高死亡率等特点,给全球猪肉行业造成巨大经济损失。PEDV属于RNA病毒,具有高突变性,所以... 详细信息

猪流行性腹泻(PED)是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的一种高度传染性的猪肠道疾病,主要侵袭小肠上皮细胞,具有致仔猪严重急性水样腹泻、高发病率和高死亡率等特点,给全球猪肉行业造成巨大经济损失。PEDV属于RNA病毒,具有高突变性,所以现有疫苗对于变异毒株的保护能力有限,并且肌注主要刺激机体产生Ig G,产生s Ig A的水平较低,所以研究一款能够刺激机体产生黏膜反应,提高s Ig A水平的疫苗是非常必要的。因此本试验根据毒力蛋白(S)的中和抗体区域(COE)和S1亚基与S2亚基的N端结合区域设计抗原蛋白片段(aa301-644)与载体p NZ8148连接,构建表达PEDV S蛋白的乳酸乳球菌亚单位疫苗,通过添加粘膜免疫佐剂CPG-ODN,研究对小鼠免疫原性和肠道菌群的影响。根据NCBI登录(***1102)的PEDV基因序列,通过蛋白二级结构预测,选取基因片段(301aa-644aa)进行密码子优化,添加酶切位点和保护碱基后,让生工生物公司进行连接转化。将合成的S基因片段和表达载体p NZ8148相连接并电转进入NZ9000乳酸乳球菌中。重组乳酸乳球菌经乳酸链球菌素(nisin)诱导表达后,采用SDS-PAGE和Western blot和细菌间接免疫荧光鉴定诱导表达产物。因口服重组乳酸乳球菌需要经过胃酸的消化到达小肠定植,所以对重组乳酸乳球菌生长曲线进行测定,并置于模拟胃液和肠液中,于不同时间抽取菌液测定其OD值,检测重组菌对胃液和肠液的耐受性。将试验组分为口服组(包括PBS组空白对照组、佐剂CPG-ODN组、重组菌组、重组菌+CPG-ODN组)和滴鼻组(包括重组菌和重组菌+CPG-ODN组)接种小鼠,连续接种3次,每次免疫间隔14d,每次连续接种3 d;ELISA检测血清中INF-γ水平、IL-4水平和抗PEDV S蛋白特异性Ig G水平,肠道中抗PEDV S蛋白特异性s Ig A水平。然后分别取口服组小鼠的盲肠内容物液氮速冻后存放于-80℃冰箱中备用,干冰保存送于公司进行16S r RNA测序,鉴定重组乳酸乳球菌载体疫苗对于小鼠肠道菌群的影响。SDS-PAGE和Western blot结果显示,PEDV S蛋白在重组乳酸乳球菌中表达,并且经条件优化后,得到最佳诱导条件为5 ng/m L浓度nisin诱导2 h的蛋白表达量最高。测定乳酸乳球菌NZ9000和重组乳酸乳球菌p NZ8148-S/NZ9000的生长曲线,耐胃液和耐肠液的特性,发现转化PEDV S蛋白后不会影响乳酸乳球菌NZ9000的生长,在胃液和肠液可以存活约2-3 h。与PBS空白组和单独佐剂CPG-OND佐剂相比,接种重组乳酸乳球菌和重组乳酸乳球菌+CPG-ODN组小鼠的抗PEDV S蛋白特异性Ig G和s Ig A水平有明显升高(p重组乳酸乳球菌经口服和滴鼻接种后能够诱导机体产生黏膜和体液免疫反应。肠道菌群结果说明免疫后重组乳酸球菌疫苗、单独CPG佐剂和重组疫苗与佐剂联合免疫都可以增加小鼠肠道菌群的丰度。chao指数和Simpon指数说明口服重组乳酸乳球菌疫苗可以增加肠道菌落的多样性。免疫后对照PBS组,免疫组小鼠的肠道菌群物种发生了改变,免疫组从主要的乳杆菌属变成毛螺菌属,其中佐剂CPG主要还影响Desulfovibrio属和norank＿f＿f 082属的丰度,但是REB和CPG ODN联合使用能够降低CPG对于Desulfovibrio属丰度的影响。

关键词：重组乳酸乳球菌 PEDV S蛋白免疫原性肠道菌群

重组乳酸乳球菌X-脯氨酰二-肽酰基-氨基肽酶的纯化及动力学特性(英文)

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中国生物化学与分子生物学报 2003年第2期19卷 144-150页

作者：唐松山吴洁谢燕飞明欣胡卓逸刘景晶中国药科大学生物制药学院南京210009

重组的乳酸乳球菌X 脯氨酰二肽酰基氨基肽酶是一个工具酶 ,它对基因构建的神经肽或活性多肽的转活具有重要意义 .通过细菌细胞的破碎 ,洗涤 ,冷冻离心 ,透析 ,DEAE 纤维素 5 2柱层析等工艺过程达到电泳纯 .该酶比活为 11.92 6U mg ... 详细信息

重组的乳酸乳球菌X 脯氨酰二肽酰基氨基肽酶是一个工具酶 ,它对基因构建的神经肽或活性多肽的转活具有重要意义 .通过细菌细胞的破碎 ,洗涤 ,冷冻离心 ,透析 ,DEAE 纤维素 5 2柱层析等工艺过程达到电泳纯 .该酶比活为 11.92 6U mg ,纯化倍数为 14.37倍和总活性收率为5 5 .5 6% .通过SDS PAGE和凝胶柱层析法 ,测得该二肽酶有单肽链组成 ,分子量 89KD .在该酶的动力学研究中 ,针对特异性底物L 甘氨酰 L 脯氨酰对硝基苯胺 ,求得该酶的米氏方程式 1 V =0 0 4 8 [S]+ 0 2 5 66(r =0 994 ) .它的Km 值为 0 1871mmol L ,最大反应速度Vmax为 3 897μmol·L-1·min-1.该酶可被苯甲酰基磺酰氟 ,胰蛋白酶抑制剂和Mn2 +,Ba2 +,Cu2 +andZn2 +等金属离子抑制 ,但可被Mg2 +激活 .进一步试验显示 ,当Cu2 +和Zn2 +浓度增加到 3 72 6mmol L ,抑制作用明显增强 .低浓度的EDTA Na2 (≤ 0 62 12mmol L)不影响酶的活性 .因此 ,该X 脯氨酰二肽酰基

关键词： X-脯氨酰-二肽酰基-氨基肽酶金属离子非依赖性丝氨酸蛋白酶动力学特性纯化重组乳酸乳球菌

表达牛乳铁蛋白肽的重组乳酸乳球菌对雏鸡抗鸡白痢沙门氏菌感染的效果研究

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中国预防兽医学报 2017年第3期39卷 206-209页

作者：宋丽影邵怡岚李雪纯姜艳平崔文李一经尹杰超唐丽杰东北农业大学黑龙江哈尔滨150030

为探索表达牛乳铁蛋白肽的重组乳酸乳球菌pAMJ399-LFBA/MG1363对雏鸡抗鸡白痢沙门氏菌感染效果的影响,本实验将该重组乳酸乳球菌饲喂1日龄雏鸡,连续饲喂14 d,并设立空白对照组,第7 d时经灌服鸡白痢沙门氏菌同时感染实验组和对照组,连续... 详细信息

为探索表达牛乳铁蛋白肽的重组乳酸乳球菌pAMJ399-LFBA/MG1363对雏鸡抗鸡白痢沙门氏菌感染效果的影响,本实验将该重组乳酸乳球菌饲喂1日龄雏鸡,连续饲喂14 d,并设立空白对照组,第7 d时经灌服鸡白痢沙门氏菌同时感染实验组和对照组,连续观察7 d;分别于攻菌前以及攻菌后的不同天数采集血清及盲肠黏液,检测结果显示攻菌后饲喂重组乳酸乳球菌组雏鸡血清中IgG以及黏液中SIgA的含量极显著高于空白对照组。对各组雏鸡的心脏、肝脏、脾脏及十二指肠进行病理组织学检查,结果显示饲喂重组乳酸乳球菌组各器官的病变情况相对较轻,而且雏鸡盲肠扁桃体中非特异免疫信号通路中相关分子TLR4、My D88、NF-κB、TNF-α、IL-8、IL-6等的m RNA表达相对较高。以上结果表明,表达牛乳铁蛋白肽的重组乳酸乳球菌在抗鸡白痢沙门氏菌感染的过程中可以起到保护雏鸡免受感染的作用。

关键词：牛乳铁蛋白肽重组乳酸乳球菌抗鸡白痢沙门氏菌感染

表达副鸡禽杆菌外膜蛋白的重组乳酸乳球菌的构建及其免疫原性研究

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中国兽医科学 2018年第11期48卷 1388-1393页

作者：梅晨李淑芳孙爱华龚玉梅王宏俊北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室

为构建表达副鸡禽杆菌外膜蛋白的重组乳酸乳球菌,本试验按照乳酸乳球菌表达的偏好性,优化合成副鸡禽杆菌外膜蛋白p9的编码碱基序列,将其接入表达载体pNZ8149的多克隆位点并导入食品级乳酸乳球菌NZ3900。将重组乳酸乳球菌灭活后经肌肉注... 详细信息

为构建表达副鸡禽杆菌外膜蛋白的重组乳酸乳球菌,本试验按照乳酸乳球菌表达的偏好性,优化合成副鸡禽杆菌外膜蛋白p9的编码碱基序列,将其接入表达载体pNZ8149的多克隆位点并导入食品级乳酸乳球菌NZ3900。将重组乳酸乳球菌灭活后经肌肉注射免疫SPF鸡,免疫后攻毒测定乳酸乳球菌的保护效果,检测血清中IgG抗体和鼻黏膜sIgA抗体水平并检验免疫效果。PCR结果显示,成功构建了含p9片段的重组乳酸乳球菌,Western-blot检测显示,p9片段可在重组乳酸乳球菌内表达。重组菌最佳诱导表达条件：Nisin浓度为20 ng/mL、诱导时间为4 h。鸡肌肉注射免疫后可产生p9蛋白特异性的血清Ig G和鼻黏膜sIgA抗体。乳酸乳球菌重组疫苗免疫鸡对副鸡禽杆菌攻毒的保护率为60%-80%。结果表明,本研究成功构建了重组乳酸乳球菌pNZ8149-p9/NZ3900,该重组菌作为免疫原免疫鸡,对副鸡禽杆菌攻毒具有较好的免疫保护作用。

关键词：副鸡禽杆菌重组乳酸乳球菌 IgG sIgA

表达牛乳铁蛋白肽的重组乳酸乳球菌微胶囊制备工艺的优化

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中国畜牧兽医 2021年第12期48卷 4607-4617页

作者：张珺妍谭宏超陈佩佩王晓娜姜艳平崔文乔薪瑗王丽周晗徐义刚李一经唐丽杰东北农业大学动物医学学院哈尔滨150030 江苏省宿迁市宿城区畜牧兽医站宿迁223800 农业农村部动物疫病病原生物学东北科学观测实验站重点实验室哈尔滨150030

为使重组乳酸乳球菌在发酵生产后便于存储、运输,本试验利用可表达牛乳铁蛋白肽的重组乳酸乳球菌pAMJ399-LFBA/MG1363制备微胶囊,优化微胶囊的制备工艺条件,并对胶囊化后重组菌的相关生物学特性进行检测。通过对不同壁材及壁材浓度进行... 详细信息

为使重组乳酸乳球菌在发酵生产后便于存储、运输,本试验利用可表达牛乳铁蛋白肽的重组乳酸乳球菌pAMJ399-LFBA/MG1363制备微胶囊,优化微胶囊的制备工艺条件,并对胶囊化后重组菌的相关生物学特性进行检测。通过对不同壁材及壁材浓度进行控制单一变量试验,测定其包埋量,以筛选出最佳壁材及浓度。通过模拟胃肠液环境试验,比较微胶囊释放率,并对不同壁材进行保存期试验,比较最低活菌数,利用响应面试验确定最佳工艺条件,使用最佳工艺条件制备微胶囊后进行验证。优化后的结果为:选取海藻酸钠和壳聚糖作为壁材,在海藻酸钠浓度为2.49%,壳聚糖浓度为0.96%,CaCl_(2)浓度为6.67%,凝固时间为57 min的条件下微胶囊效果最佳,预测包埋量为7.85×10^(8) CFU/g。微胶囊在模拟胃液中稳定存在,在模拟肠液中可完全破裂,能释放出微胶囊内95%以上的乳酸乳球菌。海藻酸钠-壳聚糖微胶囊在4℃保存3周后,微胶囊中活菌数为1.41×10^(7) CFU/g。对微胶囊的最佳工艺条件验证结果为微胶囊的包埋量为8.08×10^(8) CFU/g;常温保存2周后,活菌数仍可达到3.89×10^(6) CFU/g;ELISA方法检测微胶囊内重组乳酸乳球菌可见表达的牛乳铁蛋白肽,抑菌试验可见微胶囊内重组乳酸乳球菌表达的牛乳铁蛋白肽对沙门氏菌和金黄色葡萄球菌仍具有明显的抑制作用。以上结果表明,表达牛乳铁蛋白肽的重组乳酸乳球菌可制备成为低成本、保存期长、耐胃液的微胶囊,为重组乳酸菌在生产中的进一步应用奠定基础。

关键词：重组乳酸乳球菌乳铁蛋白肽微胶囊工艺优化

重组乳酸乳球菌表达禽流感病毒HA1基因载体的构建及在禽流感病毒防治领域的应用

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中国微生态学杂志 2011年第2期23卷 122-126,130页

作者：雷涵盛芝娜陈剑魏晓慧徐宇虹上海交通大学生命科学技术学院上海200240 南昌大学生命科学与食品工程学院江西南昌330013 上海交通大学药学院上海200240

目的构建以重组乳酸乳球菌为基础的黏膜输送载体。方法以高致病性禽流感病毒H5N1的HA1基因作为研究对象,利用nisin诱导表达控制系统,构建分泌型与非分泌型重组乳酸乳球菌表达载体,经口服灌胃途径免疫BALB/c小鼠,通过ELISA检测小鼠血清Ig... 详细信息

目的构建以重组乳酸乳球菌为基础的黏膜输送载体。方法以高致病性禽流感病毒H5N1的HA1基因作为研究对象,利用nisin诱导表达控制系统,构建分泌型与非分泌型重组乳酸乳球菌表达载体,经口服灌胃途径免疫BALB/c小鼠,通过ELISA检测小鼠血清IgG和粪便IgA,最后,对免疫后的小鼠进行H5N1病毒攻击实验,进而比较分泌型与非分泌型重组乳酸乳球菌表达载体的免疫效率。结果分泌型重组乳酸乳球菌免疫小鼠后产生的抗体水平(IgG和IgA)高于非分泌型重组乳酸乳球菌,经过同型H5N1病毒攻击后,分泌型重组乳酸乳球菌免疫的小鼠的存活率为80%,而非分泌型重组乳酸乳球菌免疫的小鼠的存活率为60%。结论本研究为防治高致病性禽流感病毒提供可行的思路与方法。

关键词：重组乳酸乳球菌 HA1基因免疫效率

CpG ODN联合重组乳酸乳球菌鼻内免疫BALB/c小鼠的佐剂效应

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中国兽医杂志 2017年第1期53卷 34-36页

作者：王振华曾宪垠成都农业科技职业学院四川温江611130 四川农业大学生命理学院原子能应用实验室四川雅安625014

本试验初次建立了CpG ODN联合重组乳酸乳球菌滴鼻免疫BALB/c小鼠模型。结果得出CpG ODN佐剂协同重组菌抗原组血清中抗PRRSV特异性抗体IgG和呼吸道黏膜抗体s-Ig A均高于单独重组菌组(P>0.05)和单独佐剂组(P0.05)及单独佐剂组(P<0.01)。... 详细信息

本试验初次建立了CpG ODN联合重组乳酸乳球菌滴鼻免疫BALB/c小鼠模型。结果得出CpG ODN佐剂协同重组菌抗原组血清中抗PRRSV特异性抗体IgG和呼吸道黏膜抗体s-Ig A均高于单独重组菌组(P>0.05)和单独佐剂组(P重组菌抗原组的Th1型细胞因子IL-2、IFN-γ及黏膜淋巴因子IL-5的活性高于单独抗原组(P>0.05)及单独佐剂组(P重组菌鼻腔免疫小鼠后,可以提高重组菌诱导的黏膜免疫反应和Th1细胞参与的系统免疫反应,为研究安全有效的重组菌黏膜疫苗奠定了基础。

关键词： CpG ODN 重组乳酸乳球菌鼻腔免疫