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氨基酸对猪手工克隆重构胚胎发育效果的影响

湖北农业科学 2018年第6期57卷 108-110页

作者：吕玲燕陈宝剑吴永绍孙如玉汪燕玲马青艳潘天彪广西壮族自治区畜牧研究所/广西家畜遗传改良重点实验室南宁530001

为了探讨氨基酸对猪手工克隆(HMC)重构胚发育效果的影响,比较了必需氨基酸(EAA)和非必需氨基酸(NEAA)对卵母细胞的成熟状况以及对猪HMC重构胚胎发育潜能的影响。结果表明,成熟培养液中添加EAA、NEAA及EAA+NEAA之间的成熟率差异不显著,... 详细信息

为了探讨氨基酸对猪手工克隆(HMC)重构胚发育效果的影响,比较了必需氨基酸(EAA)和非必需氨基酸(NEAA)对卵母细胞的成熟状况以及对猪HMC重构胚胎发育潜能的影响。结果表明,成熟培养液中添加EAA、NEAA及EAA+NEAA之间的成熟率差异不显著,但均显著高于空白对照组(P胚胎培养液中添加EAA、NEAA及空白对照组的卵裂率都显著高于EAA+NEAA(P<0.05);囊胚率及细胞总数,NEAA组显著高于空白对照组及EAA+NEAA组、EAA组(P<0.05)。

关键词：氨基酸猪重构胚胎发育效果

不同电融合参数对猪手工克隆重构胚胎发育效果的影响

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湖北农业科学 2016年第21期55卷 5577-5580页

作者：吕玲燕陆杏蓉吴永绍汪燕玲陈宝剑蓝晞潘天彪广西壮族自治区畜牧研究所/广西家畜遗传改良重点实验室南宁530001 广西壮族自治区水牛研究所南宁530001

为探讨不同融合参数对猪手工克隆(HMC)重构胚发育效果的影响。本试验比较了胞质与胞质之间不同黏合方式以及不同的电融合参数对融合效率的影响,以及融合参数对HMC重构胚胎发育的影响。结果表明,卵-供体-卵的黏合方式有利于提高胞质的融... 详细信息

为探讨不同融合参数对猪手工克隆(HMC)重构胚发育效果的影响。本试验比较了胞质与胞质之间不同黏合方式以及不同的电融合参数对融合效率的影响,以及融合参数对HMC重构胚胎发育的影响。结果表明,卵-供体-卵的黏合方式有利于提高胞质的融合率;融合参数3(2 k V/cm,80μs,1次)和参数4(2.2 k V/cm,80μs,1次)的对胞质的融合率显著高于其他参数,两个参数对HMC重构胚卵裂率的影响差异不显著,而参数3的囊胚率以及囊胚细胞总数显著高于参数4。参数3更适合用于HMC重构胚的融合,并能提高重构胚的囊胚发育率以及囊胚的细胞个数。

关键词：猪电融合参数重构胚胎发育效果

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奶牛体细胞核移植胚胎产业化生产条件优化

生物技术通报 2013年第2期29卷 86-92页

作者：孙伟巴特尔郭继彤李荣凤王建国李明胡树香王春生李喜和内蒙古赛科星繁育生物技术股份有限公司呼和浩特011517 内蒙古大学哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室呼和浩特010021 内蒙古大学蒙古高原动物遗传资源研究中心呼和浩特010021

通过优化高产奶牛体细胞克隆胚胎体外生产技术条件,制备高质量的奶牛克隆胚胎,旨在提高奶牛体细胞核移植产业化应用效率。就受体卵母细胞去核方法、不同年龄供体牛细胞来源、血清饥饿与否以及不同气相组成培养等条件对奶牛体细胞克隆胚... 详细信息

通过优化高产奶牛体细胞克隆胚胎体外生产技术条件,制备高质量的奶牛克隆胚胎,旨在提高奶牛体细胞核移植产业化应用效率。就受体卵母细胞去核方法、不同年龄供体牛细胞来源、血清饥饿与否以及不同气相组成培养等条件对奶牛体细胞克隆胚胎生产效率的影响进行了研究和探讨。结果表明,虽然荧光染色辅助去核和盲吸法的去核率、囊胚发育率分别为100%、24.83%和92.44%、28.26%,两者之间无显著差异(P>0.05),但盲吸法操作简单、效率高;不同年龄来源供体牛的细胞系构建的克隆胚胎的囊胚发育率分别为31.43%、25.68%,两者之间没有显著差异(P>0.05);经血清饥饿和未饥饿供体细胞重构的克隆胚胎囊胚发育率分别为24%、29.9%,两者之间没有显著差(P>0.05);富氧和低氧气相培养的克隆胚胎的囊胚发育率分别为28.26%、31.55%,两者之间差异不显著(P>0.05),低氧气相组成更有利于囊胚的发育。根据上述结果,奶牛体细胞核移植胚胎(克隆胚胎)的产业化生产条件为:供体细胞无需进行同期饥饿处理,直接注入到盲吸去核后的受体卵子透明带下构建克隆胚胎,融合后的克隆胚胎在密封的混合三气(5%CO2-5%O2-90%N2)的气相组成下进行体外培养,能保持稳定的囊胚发育率。

关键词：奶牛体细胞去核核移植重构胚胎

小鼠卵丘细胞核移植到体内成熟卵浆构成的重构卵的发育

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中山大学学报（医学科学版） 2005年第1期26卷 51-55页

作者：詹前胜庄广伦中山大学附属第一医院生殖中心广东广州510080

【目的】观察小鼠卵丘细胞核移植到体内成熟卵浆构成的重构卵的发育。【方法】昆明小鼠超排后获取体内成熟卵母细胞及卵丘细胞。成熟卵子去核后用将卵丘细胞核与精子直接注入,观察其受精和胚胎发育情况。【结果】卵子去核存活率为75.9%(... 详细信息

【目的】观察小鼠卵丘细胞核移植到体内成熟卵浆构成的重构卵的发育。【方法】昆明小鼠超排后获取体内成熟卵母细胞及卵丘细胞。成熟卵子去核后用将卵丘细胞核与精子直接注入,观察其受精和胚胎发育情况。【结果】卵子去核存活率为75.9%(362/477),注核存活率为39.8%(143/359),D1存活率为38.4%(138/359)。39.9%(57/143)重构卵子成功排出一个极体并形成两原核,其卵裂率为80.7%(46/57)。大部分重构胚发育到2～3细胞停滞,其中2个分裂至4细胞,无囊胚形成。【结论】将小鼠卵丘细胞核、精子同时移植到小鼠的体内成熟卵浆中,可以诱导极体排出,形成2原核+1极体的重构胚胎。重构胚胎大部分发育到2～3细胞即发生停滞,最多到达4细胞期,发育潜能差。

关键词：体内小鼠卵丘细胞胚发育存活率原核观察核移植重构胚胎细胞期

不同化学激活剂对牛卵丘细胞重构胚发育的影响

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中国畜牧兽医 2009年第1期36卷 73-76页

作者：王滇张春燕刘松柏杨利国华中农业大学动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室武汉430070

本研究主要研究了Ⅰ:Ionomycin+6-甲氨基嘌呤(6-DMAP)、Ⅱ:Ionomycin+放线菌酮(CHX)、Ⅲ:体积分数7%乙醇+6-DMAP、Ⅳ:体积分数7%乙醇+CHX 4种不同化学激活方法对牛胞质内卵丘细胞全细胞注射法所获得重构胚的激活及前期发育的影响。Ionom... 详细信息

本研究主要研究了Ⅰ:Ionomycin+6-甲氨基嘌呤(6-DMAP)、Ⅱ:Ionomycin+放线菌酮(CHX)、Ⅲ:体积分数7%乙醇+6-DMAP、Ⅳ:体积分数7%乙醇+CHX 4种不同化学激活方法对牛胞质内卵丘细胞全细胞注射法所获得重构胚的激活及前期发育的影响。Ionomycin和7%乙醇的处理时间为5 min,6-DMAP的处理时间为4 h,CHX的处理时间为5 h。结果表明,重构胚与颗粒细胞单层细胞共培养2 d后,各组卵裂率分别为52.6%、52.8%、53.8%和54.2%,差异不显著(P>0.05);培养8 d后,Ⅰ组激活的囊胚发育率(20.0%)极显著高于其他组(P重构胚,但Ionomycin+6-DMAP法激活重构胚的囊胚率和囊胚孵化率均极显著高于其它3组,说明Ionomycin+6-DMAP激活法有利于牛重构胚的发育,可以获得较理想的囊胚率,是胞质内全细胞注射法克隆的理想激活方法。

关键词：牛卵母细胞胞质内直接注射重构胚胎化学激活

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动物种间核移植技术研究的历史、现状与展望

中国畜禽种业 2007年第5期3卷 38-40页

作者：王艳多李钟淑张柏维方南洙延边大学农学院 133400

种间核移植技术在动物遗传学和动物胚胎学上是一项重大突破,自20世纪60年代两栖类和鱼类获得成功,种间核移植技术不断发展先后在小鼠、牛、山羊、猪、猴、大鼠、大熊猫、兔等物种间进行了种间核移植,并在近几年产生了种间核移植出生个体... 详细信息

种间核移植技术在动物遗传学和动物胚胎学上是一项重大突破,自20世纪60年代两栖类和鱼类获得成功,种间核移植技术不断发展先后在小鼠、牛、山羊、猪、猴、大鼠、大熊猫、兔等物种间进行了种间核移植,并在近几年产生了种间核移植出生个体,如印度野牛,欧洲盘羊,我国新疆北山羊、盘羊等。而且在近两年种间核移植技术应用于医学治疗性克隆,分别进行了人-兔种间核移植、人-山羊种间核移植等的初步研究。种间核移植技术研究不仅为核质关系、细胞核的分化和重新编程等基础问题奠定了理论基础,而且也是野生、濒危动物保护的有力工具,在农业和医学领域更是优良家畜品种选育繁殖的手段和为组织器官移植医疗保健提供帮助,从而造福全人类。

关键词：种间核移植克隆重构胚胎

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动物克隆技术应用及新发展

重庆三峡学院学报 2004年第2期20卷 116-119页

作者：范守城张云茹祁俊生重庆大学生物工程学院国家教育部生物力学与组织工程重点实验室重庆400044 重庆市养猪科学研究院重庆市重点实验室402460 重庆三峡学院重庆万州404000

本文综述了国内外动物克隆技术的进展,并结合猪克隆对动物克隆技术的要点、路线以及当前存在的问题等方面作了较详细的论述。另外,根据现有动物克隆技术理论和实践,着重对该技术的应用和新的发展趋势进行了综述和讨论。

关键词：动物克隆核移植重构胚胎

哺乳动物的克隆技术——哺乳动物克隆的原理、方法、影响因素及存在的问题

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中国畜牧兽医 2006年第10期33卷 55-58页

作者：张荣昌岳福杰李森远张廷龙山东省即墨市畜牧兽医局即墨266200 山东省莱阳农学院动物科技学院青岛266109

哺乳动物细胞克隆是20世纪末生命科学领域最引人注目的高新技术,该技术对于优良种畜的复制、减少试验用动物数目、动物遗传多样性保存及濒危动物挽救、转基因动物培育等方面具有重要意义。近年来克隆技术发展迅速,多种哺乳动物相继克隆... 详细信息

哺乳动物细胞克隆是20世纪末生命科学领域最引人注目的高新技术,该技术对于优良种畜的复制、减少试验用动物数目、动物遗传多样性保存及濒危动物挽救、转基因动物培育等方面具有重要意义。近年来克隆技术发展迅速,多种哺乳动物相继克隆成功,但也存在克隆效率太低、克隆动物表型正常而实质异常的问题。作者阐述了动物克隆的基本原理、操作方法及其相关影响因素,提出了解决相关问题的关键。

关键词：哺乳动物克隆核移植重构胚胎

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异种动物核移植研究进展

动物医学进展 2003年第3期24卷 48-50页

作者：金仁桃章孝荣安徽农业大学畜牧水产学院安徽合肥230036

异种核移植作为新型发展起来的动物繁殖技术 ,在畜牧生产、医学、生物学领域愈来愈表现出其巨大的价值。人们以前已经进行了一系列的探索 ,如在供体细胞方面 ,人们尝试使用了包括肝脏细胞、乳腺细胞在内的各种类型的细胞 ,并采取各种措... 详细信息

异种核移植作为新型发展起来的动物繁殖技术 ,在畜牧生产、医学、生物学领域愈来愈表现出其巨大的价值。人们以前已经进行了一系列的探索 ,如在供体细胞方面 ,人们尝试使用了包括肝脏细胞、乳腺细胞在内的各种类型的细胞 ,并采取各种措施处理供体细胞 ;而对于受体细胞多采用卵泡 -卵丘复合体进行体外培养或通过超排获得 ;比较各种融合方法 ,目前多采用电融合方法 ,也较化学融合、病毒介导融合等方法简单 ;至于重构胚的培养则多采用培养液体外培养的方法 ,此方法操作简单 ,也比较容易观察记录实验过程。

关键词：异种动物核移植激活细胞融合重构胚胎