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通关藤化学成分及其细胞毒活性

中成药 2023年第9期45卷 2910-2916页

作者：贾祎萍吴子薇李晓波王嘉祺时晓颖王梦月韩永龙上海交通大学药学院上海200240 上海交通大学医学院附属第六人民医院药剂科上海200233

目的研究通关藤Marsdenia tenacissima(Roxb.)Wight et Arn.的化学成分及其细胞毒活性。方法通关藤水提取物采用大孔树脂、硅胶、ODS、制备HPLC进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。采用MTT法评价其对肿瘤细胞A54... 详细信息

目的研究通关藤Marsdenia tenacissima(Roxb.)Wight et Arn.的化学成分及其细胞毒活性。方法通关藤水提取物采用大孔树脂、硅胶、ODS、制备HPLC进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。采用MTT法评价其对肿瘤细胞A549、Bel-7402的细胞毒活性。结果从中分离得到12个化合物,分别鉴定为通关藤醇A(1)、12-O-惕各酰基-通关藤苷元A(2)、isoshonanin(3)、caruilignan D(4)、香草酸(5)、丁香酸(6)、通关藤苷元A(7)、白桦脂酸(8)、11-O-异丁酰基-12-O-乙酰基通关藤苷元B-3-O-茯苓二糖苷(9)、通关藤苷H(10)、通关藤苷G(11)、通关藤苷I(12)。化合物1~2、7、10、12能抑制A549、Bel-7402细胞的生长。结论化合物1为新化合物,化合物2为新天然产物,化合物3~6为首次从该植物中分离得到。化合物1~2、7、10、12具有细胞毒活性。

关键词：通关藤化学成分分离鉴定细胞毒活性

通关藤中4种C_(21)甾体化合物逆转卵巢癌细胞紫杉醇耐药的作用评价

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中国药学杂志 2022年第9期57卷 706-717页

作者：孔欠文胡玉洁薛晓川石美智徐玲艳周阳云张敏胡九东杨姣韩永龙陈君君上海交通大学附属第六人民医院药剂科上海200030 上海海洋大学食品学院上海200135

目的评价通关藤中4种C_(21)甾体化合物(通关藤苷I、通关藤苷G、通关藤苷H和17β-通关藤苷元B)对人卵巢癌紫杉醇耐药细胞A2780/Taxol(A2780/T)耐药的逆转作用及相关机制。方法将人卵巢癌A2780/T细胞分为对照组、C_(21)甾体单用组、紫杉... 详细信息

目的评价通关藤中4种C_(21)甾体化合物(通关藤苷I、通关藤苷G、通关藤苷H和17β-通关藤苷元B)对人卵巢癌紫杉醇耐药细胞A2780/Taxol(A2780/T)耐药的逆转作用及相关机制。方法将人卵巢癌A2780/T细胞分为对照组、C_(21)甾体单用组、紫杉醇单用组、C_(21)甾体联合紫杉醇组(1:1),MTT法检测细胞增殖能力,中效原理分析两药联用效应(Fa)与合用指数(CI)的关系;划痕实验观察细胞迁移能力;流式细胞术及Hoechst 33258染色检测细胞周期和凋亡情况;RT-PCR、Western blot法分别检测ABCB1、SLC4A2、SLCO1A2 mRNA及P-gp表达水平;药物外排实验检测A2780/T细胞内紫杉醇及罗丹明123的蓄积量。结果4种C_(21)甾体单用或与紫杉醇联用均能抑制A2780/T细胞增殖,且呈剂量依赖效应。通关藤苷G、通关藤苷H与紫杉醇联用48 h具有协同效应,能够显著抑制A2780/T细胞迁移、阻滞细胞于G2/M期、促进细胞凋亡,显著抑制ABCB1、SLC4A2、SLCO1A2 mRNA水平,下调P-gp表达,显著促进了紫杉醇及罗丹明123在A2780/T细胞内的蓄积。结论通关藤苷G、通关藤苷H与紫杉醇联用均产生协同效应,可逆转人卵巢癌A2780/T细胞对紫杉醇的耐药性,其机制可能与降低基因ABCB1、SLC4A2、SLCO1A2及P-gp的表达水平,促进紫杉醇在A2780/T细胞内蓄积有关。

关键词：通关藤 C_(21)甾体化合物紫杉醇卵巢癌中效原理逆转耐药

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通关藤苷G在不同条件下的降解动力学研究

中国医院药学杂志 2023年第8期43卷 882-886页

作者：孟礼王莉莉郭明南京中医药大学药学院江苏南京210023

目的:研究通关藤苷G在不同pH、温度、光源、金属离子和氧化条件下的降解动力学特征。方法:采用HPLC法测定不同条件下通关藤苷G的含量。根据不超过250 h研究窗口内所得数据,将其含量随时间的变化分别与零级、一级和二级化学反应公式进行... 详细信息

目的:研究通关藤苷G在不同pH、温度、光源、金属离子和氧化条件下的降解动力学特征。方法:采用HPLC法测定不同条件下通关藤苷G的含量。根据不超过250 h研究窗口内所得数据,将其含量随时间的变化分别与零级、一级和二级化学反应公式进行拟合,尝试建立降解动力学模型。结果:在pH 2.5溶液中,通关藤苷G的降解最接近二级动力学方程,理论半衰期(t_(1/2))为188.09 h。在35℃、70℃、日光灯和紫外灯条件下,通关藤苷G的降解所得数据与3个动力学方程的区别不大,理论t_(1/2)均大于900 h。在Fe^(3+)溶液中,通关藤苷G的降解最接近一级动力学方程,理论t_(1/2)为38.09 h。在30%H_(2)O_(2)溶液中,通关藤苷G的降解最接近零级动力学方程,理论t_(1/2)为31.25 h。在考察的其他条件下,通关藤苷G较稳定。结论:强酸性溶液、高温环境、日光灯、紫外灯、Fe^(3+)和30%H_(2)O_(2)溶液均会加速通关藤苷G的降解,故其在生产、保存和运输过程中应尽量避免接触上述条件。

关键词：通关藤通关藤苷G 降解动力学稳定性 HPLC

基于网络药理学及实验验证探究通关藤治疗卵巢癌的作用机制

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中国中药杂志 2023年第8期48卷 2222-2232页

作者：胡玉洁魏兰懿赵娟朱琴芳孟昭阳孟晶晶陈君君徐玲艳周阳云韩永龙上海交通大学医学院附属第六人民医院上海200030 上海海洋大学上海201306 江西中医药大学江西南昌330004

通过网络药理学、分子对接技术和体外细胞实验,探究通关藤Marsdenia tenacissima治疗卵巢癌(ovarian cancer,OC)的主要活性成分和潜在作用机制。文献检索获取通关藤中活性成分,利用SwissTargetPrediction数据库获得药物的潜在靶点;借助T... 详细信息

通过网络药理学、分子对接技术和体外细胞实验,探究通关藤Marsdenia tenacissima治疗卵巢癌(ovarian cancer,OC)的主要活性成分和潜在作用机制。文献检索获取通关藤中活性成分,利用SwissTargetPrediction数据库获得药物的潜在靶点;借助Therapeutic Target Database(TTD)、Online Mendelian Inheritance in Man Database(OMIM)、GeneCards、PharmGKB等数据库检索OC相关靶点,并利用韦恩在线分析工具将药物靶点和疾病靶点取交集;运用Cytoscape软件构建“成分-靶点-疾病”网络,依据其节点度值筛选出核心成分;根据筛选出来的药物与疾病交集靶点,利用STRING平台和Cytoscape软件构建交集靶点的蛋白相互作用(PPI)网络,依据节点度值筛选出核心靶点;借助DAVID数据库对潜在治疗靶点进行GO功能富集和KEGG通路分析;并采用AutoDock等软件对部分活性成分与潜在靶点进行分子对接验证;最后选用SKOV3细胞在体外对通关藤提取物的抗卵巢癌活性进行验证,并依据GO功能和KEGG通路分析结果,选择PI3K/AKT信号通路进行体外实验验证。结果筛选出山柰酚(kaempferol)、11α-O-苯甲酰-12β-O-乙酰通关藤苷元(11α-O-benzoyl-12β-O-acetyltenacigenin B)、苦绳苷元Q(drevogenin Q)等39个有效活性成分,涉及AKT1、VEGFA、EGFR等25个核心靶点,靶点蛋白富集的通路主要为PI3K/AKT信号通路。分子对接结果显示前10位核心成分与前10位核心靶点均有较好的结合能力。体外实验结果表明,通关藤提取物对卵巢癌细胞增殖有显著的抑制作用,可通过线粒体途径诱导卵巢癌细胞凋亡,下调PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达。该研究表明通关藤治疗卵巢癌的多成分、多靶点、多途径协同作用的特点,为深入研究其药效物质基础、作用机制以及临床应用提供理论依据。

关键词：通关藤卵巢癌网络药理学作用机制分子对接

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通关藤对干旱胁迫的适应机制研究

通关藤对干旱胁迫的适应机制研究

作者：卫敏云南农业大学

学位级别：硕士

通关藤(Marsdenia tenacissima)为萝藦科牛奶菜属多年生藤本植物,以干燥藤茎入药,具有清热解毒、止咳平喘、抗肿瘤、降血压、保肝等功效。随着近年来其药材需求量的增加,通关藤野生资源快速减少,人工驯化栽培已成为必然。而在栽培之前,... 详细信息

通关藤(Marsdenia tenacissima)为萝藦科牛奶菜属多年生藤本植物,以干燥藤茎入药,具有清热解毒、止咳平喘、抗肿瘤、降血压、保肝等功效。随着近年来其药材需求量的增加,通关藤野生资源快速减少,人工驯化栽培已成为必然。而在栽培之前,需要研究其生活习性。通关藤主要生长在中国西南地区具有喀斯特地貌的环境中,由于溶岩形成很多空隙,环境保水性极差,说明通关藤对干旱的适应能力较强,但相关研究较少。本研究通过设置不同的浇水间隔(分别间隔4、8、12、16天),形成不同的水分干旱条件,然后观测栽培于其中的通关藤的农艺性状、叶片解剖结构、叶的生理指标以及茎中有效成分的变化,探讨通关藤对不同水分条件的适应策略,为人工栽培通关藤中的水分管理提供参考。结果表明:(1)从农艺性状来看,浇水间隔8天的通关藤株高、茎粗、叶片数、叶长和叶宽、茎的生物量都达到最大值,间隔16天的通关藤生长受到明显抑制;而根长、侧根数、根的生物量则在间隔12天时达到峰值。(2)从叶的解剖结构来看,随着干旱程度的加深,通关藤叶片厚度、栅栏组织厚度以及栅海比显著减小;海绵组织厚度、木质部厚度以及叶片上表皮厚度呈现先增后降的趋势;同时海绵组织细胞间隙变小,栅栏组织排列愈加紧密;不同处理下叶脉中的簇晶数在间隔8天时最多。(3)从生理指标来看,随着干旱程度的加深,可溶性糖含量以及丙二醛含量均呈现出先增加后下降的趋势,脯氨酸含量以及光合色素显著增加;净光合速率、胞间CO浓度、气孔导度以及蒸腾速率随干旱程度的加深显著下降。(4)从有效成分来看,随着干旱程度的加深,总皂苷含量呈现出先增后降的趋势,绿原酸含量则呈现出先降后增的趋势,与生长情况呈反比。综述所述,适度干旱(浇水间隔8天),土壤含水量16.16%左右,对通关藤生长具有较好促进作用,各项指标均表现较好。

关键词：通关藤干旱胁迫农艺性状解剖结构生理指标

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通关藤种子质量检验方法研究

中草药 2016年第23期47卷 4264-4270页

作者：肖雪峰郭巧生刘丽李超王平理杨生超杭悦宇南京农业大学中药材研究所江苏南京210095 铜仁职业技术学院贵州铜仁554300 云南信通植物药业有限公司云南蒙自661100 云南农业大学云南昆明605201 江苏省中国科学院植物研究所江苏南京210014

目的研究通关藤Marsdenia tenacissima种子检验方法，为制定通关藤种子检验规程及质量分级提供依据。方法以当年采收的不同产地通关藤种子为材料，参照国际植物种子检验规程和中国农作物种子检验规程，对其质量进行检验，探索通关藤... 详细信息

目的研究通关藤Marsdenia tenacissima种子检验方法，为制定通关藤种子检验规程及质量分级提供依据。方法以当年采收的不同产地通关藤种子为材料，参照国际植物种子检验规程和中国农作物种子检验规程，对其质量进行检验，探索通关藤种子质量检验的方法。结果通关藤种子净度分析送检样本至少900 g，实验样品至少90 g；种子千粒质量测定选用五百粒法；含水量测定选用高恒温（133±2）℃烘干法，烘干时间为6 h；发芽前自来水浸种24 h，于砂中在30℃光照条件下做发芽实验，发芽计数时间为1~8 d；生活力测定采用0.1% TTC溶液染色，于恒温35℃黑暗条件下染色3 h。结论初步建立了包括扦样、净度分析、真实性鉴定、千粒质量、发芽条件、含水量及生活力7项指标在内的通关藤种子质量检验方法。

关键词：通关藤种子种子检验规程发芽质量检验方法

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通关藤注射液治疗胃癌的作用机制研究

通关藤注射液治疗胃癌的作用机制研究

作者：覃薇扬州大学

学位级别：硕士

胃癌（Gastric cancer,GC）是发病率高、死亡率高的疾病,多数患者早期无特殊不适,部分患者可有消化不良症状,早期诊断是根治胃癌的前提,但由于早期胃癌诊断率低,大部分胃癌患者确诊时已进展至晚期[1]。手术治疗和新辅助化疗是胃癌的主... 详细信息

胃癌（Gastric cancer,GC）是发病率高、死亡率高的疾病,多数患者早期无特殊不适,部分患者可有消化不良症状,早期诊断是根治胃癌的前提,但由于早期胃癌诊断率低,大部分胃癌患者确诊时已进展至晚期[1]。手术治疗和新辅助化疗是胃癌的主要治疗手段,化疗失败主要和肿瘤细胞的耐药以及化疗的毒副作用有关[2]。现代药理学表明,中药联合化疗药物,可提高治疗的有效性,减少副作用,增强机体免疫力,很大程度提高肿瘤患者的生存质量[3,4]。通关藤（Marsdenia tenacissima（Roxb.）Wightet Arn.,MT）,又称乌骨藤,主要产于我国云南。性微寒,味苦,归肺经,具有止咳平喘、祛痰、清热解毒的功效[5]。现代化中药研究证实,通关藤具有抗癌、平喘、抑菌、保肝、利尿及免疫调节的作用,其制剂通关藤注射液（Tongguanteng Injection,TGTI）已广泛应用于临床,并取得良好的治疗效果[6],但具体抗癌活性物质及分子作用机制还未完全明确。本研究首先观察通关藤注射液在临床治疗胃癌的效果。其次,利用网络药理学,分析通关藤与胃癌之间的网络互作关系,预测其可能的作用靶点。最后,研究通关藤注射液抑制人胃癌AGS细胞的分子机制。本研究内容分为三部分。第一部分通关藤注射液对晚期胃癌患者临床疗效观察目的:研究通关藤注射液治疗进展期胃癌患者的功效,从中医证候评估及临床疗效等方面进行总结。方法:收集2019年1月～2021年10月,在扬州市中医院进行治疗的进展期胃癌患者病历,筛选60例进行回顾性研究（本方案中患者均匿名,且经医院伦理委员会同意）。常规化疗组30例,其中男27例,女3例,平均年龄69.83岁,治疗方案为替吉奥联合奥沙利铂（S-1 plusoxaliplatin,SOX）。通关藤注射液联合常规化疗组30例,其中男21例,女9例,平均年龄65.43岁,在常规化疗基础上联合通关藤注射液治疗。分别从中医证候评估和临床疗效等方面对治疗效果进行统计分析。结果:两组患者的性别、年龄及初始评分均无差异（P＞0.05）。与常规化疗组相比,联合用药组中医证候评分的有效率较高（P＜0.05）,临床疗效较好（P＜0.05）。治疗过程中,两组不良反应发生情况无统计学差异（P＞0.05）。结论:通关藤注射液能有效增强化疗药物对进展期胃癌的治疗作用,并在一定程度上改善患者不适症状。第二部分基于网络药理学和分子对接探讨通关藤治疗胃癌的作用机制目的:基于网络药理学和分子对接技术,探讨通关藤治疗胃癌的作用机制。方法:PubMed数据库检索文献,同时利用化学成分数据库（PubChem等）及Swiss ADME筛选通关藤的主要活性成分,通过Swiss Target Prediction获取药物活性成分靶点。检索疾病数据库（Gene Cards等）得到胃癌相关靶点,与药物活性成分靶点取交集后,制作蛋白质-蛋白质相互作用（protein-protein interaction,PPI）网络图,筛选通关藤治疗胃癌的关键靶点。使用AutoDock及PyMOL对关键蛋白进行分子对接验证,DAVID数据库进行关键蛋白富集分析,综合二者结果,预测通关藤治疗胃癌的作用机制。结果:筛选后,共得到通关藤有效活性成分36个,作用于胃癌的靶点蛋白共有116个,预测作用机制与ErbB、VEGF、EGFR、PI3K/Akt等相关。结论:通关藤可能靶向SRC、PTK2、HSP90AA1等关键蛋白,通过调节PI3K/AKT、Ras/Raf/MEK/ERK、SRC/FAK等相关信号转导通路,进而抑制胃癌的侵袭与转移,达到治疗胃癌的作用。第三部分通关藤注射液对人胃癌AGS细胞增殖和迁移的影响及分子机制目的:研究通关藤注射液对人胃癌AGS细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,验证网络药理学分析结果。结果:通关藤注射液抑制AGS细胞的增殖,并具有时间及浓度依赖性。通关藤注射液能明显抑制人胃癌AGS细胞的侵袭及迁移,明显降低PI3k、Akt、mTOR等蛋白的表达水平。同时,降低Bcl2的表达量,增加BAX、caspase-3和caspase-1等凋亡通路相关蛋白的表达水平。结论:通关藤注射液明显抑制人胃癌AGS细胞的增殖和迁移能力,其分子机制可能与mTOR信号转导通路及细胞凋亡有关。

关键词：通关藤注射液胃癌疗效中医证候通关藤网络药理学分子对接分子机制增殖迁移 mTOR 凋亡

基于JAK1/STAT3信号通路的通关藤对人骨肉瘤细胞增殖的影响

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中国中医药信息杂志 2024年第6期31卷 108-116页

作者：薛晓川陈君君徐玲艳魏兰懿胡玉洁周阳云王梦月韩永龙上海海洋大学食品学院上海200135 上海交通大学医学院附属第六人民医院上海200030 上海交通大学药学院上海200240

目的探讨通关藤注射液和通关藤提取液对人骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及潜在机制。方法体外培养人骨肉瘤细胞MNNG/HOS、Saos-2和人骨髓间充质干细胞(BMSC),分别予通关藤注射液或通关藤提取液(40、60、80 mg/mL)处理,CCK-8... 详细信息

目的探讨通关藤注射液和通关藤提取液对人骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及潜在机制。方法体外培养人骨肉瘤细胞MNNG/HOS、Saos-2和人骨髓间充质干细胞(BMSC),分别予通关藤注射液或通关藤提取液(40、60、80 mg/mL)处理,CCK-8实验和平板克隆实验检测细胞增殖能力,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,Hoechst33342染色和Annexin-V/PI双染实验检测细胞凋亡情况,RT-qPCR检测细胞Bax、Bcl-2、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA表达,Western blot检测细胞Bax、Bcl-2、Caspase-3、Janus激酶1(JAK1)、p-JAK1、信号转导和转录激活因子3(STAT3)、p-STAT3、基质金属蛋白酶(MMP)9蛋白表达。结果与对照组比较,不同浓度通关藤注射液和提取液均能显著降低MNNG/HOS和Saos-2细胞存活率,抑制细胞克隆形成、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡(P通关藤注射液可显著下调Saos-2细胞p-JAK1、p-STAT3、MMP9蛋白表达(P通关藤注射液和提取液均可显著抑制人骨肉瘤细胞MNNG/HOS和Saos-2增殖、迁移和侵袭,诱导其凋亡,二者抗肿瘤作用无明显差异,其机制可能与抑制JAK1/STAT3信号通路激活有关。

关键词：通关藤人骨肉瘤细胞增殖凋亡迁移 Janus激酶1 信号转导和转录激活因子3

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通关藤访花昆虫种类及其行为研究

云南农业大学学报（自然科学版） 2021年第2期36卷 299-307页

作者：赵兴旺刘成琴任锡跃白从延王建军云南农业大学农学与生物技术学院云南昆明650201

【目的】探究通关藤"花多果少"的生殖特性。【方法】于2017和2018年的5—6月白天对云南省红河州通关藤[Marsdenia tenacissima (Roxb) Wight et Arn.]的访花昆虫种类、访花频率、停留时间、移动距离和携带的花粉块等进行观测。【结果】... 详细信息

【目的】探究通关藤"花多果少"的生殖特性。【方法】于2017和2018年的5—6月白天对云南省红河州通关藤[Marsdenia tenacissima (Roxb) Wight et Arn.]的访花昆虫种类、访花频率、停留时间、移动距离和携带的花粉块等进行观测。【结果】通关藤访花昆虫共11科20种,优势种类来自鳞翅目。主要访花昆虫为迁粉蝶和虎斑蝶,其访花次数所占比例分别为38.54%和15.69%,占通关藤访花昆虫访问总次数的54.23%;在9:00以前或17:00以后、温度低于23℃和湿度高于70%时昆虫活动减少;昆虫访花频率呈现出先升高后下降的趋势,绝大部分访花昆虫的访花频率均不足5次,停留时间超过50 s的访花昆虫仅为全部访花昆虫的40%;最大移动距离超过5 m的访花昆虫占总数的35%;口器上未发现花粉块的访花昆虫占全部访花昆虫的25%。【结论】通关藤访花昆虫种类很多,但传粉效率很低,这可能是致使通关藤"花多果少"的原因。

关键词：通关藤访花昆虫访花频率停留时间