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中医杂志 2024年第10期65卷 1046-1055页

作者：李兰心曾宁溪张天鸽严灿吴丽丽广州中医药大学中西医结合基础研究中心广东广州510006 深圳市龙华区人民医院

目的探讨二仙汤治疗迟发性抑郁症(LOD)的效果及可能作用机制。方法40只雄性7~8周龄Wistar大鼠分为正常组和青年抑郁组各20只。60只20月龄雄性Wistar大鼠分为衰老组、迟发抑郁组、二仙汤组各20只。青年抑郁组大鼠采用慢性不可预计应激刺... 详细信息

目的探讨二仙汤治疗迟发性抑郁症(LOD)的效果及可能作用机制。方法40只雄性7~8周龄Wistar大鼠分为正常组和青年抑郁组各20只。60只20月龄雄性Wistar大鼠分为衰老组、迟发抑郁组、二仙汤组各20只。青年抑郁组大鼠采用慢性不可预计应激刺激(CUMS)6周建立抑郁模型,迟发抑郁组、二仙汤组衰老大鼠采用CUMS 6周建立LOD模型,正常组和衰老组不进行任何干预。造模的同时进行灌胃给药,二仙汤组大鼠给予二仙汤8 g/(kg·d)灌胃,正常组、青年抑郁组、衰老组、迟发抑郁组给予4 ml/(kg·d)纯净水灌胃,各组均给药6周。采用糖水偏爱实验、强迫游泳实验评估大鼠抑郁样行为,旷场实验评价大鼠自发活动能力,T迷宫实验评估大鼠认知功能;Western Blot法检测海马组织神经元核心抗原(NeuN)、巢蛋白、双皮质素(DCX)及脉络丛组织中闭锁小带蛋白1(ZO-1)、叶酸α受体(FRα)、还原型叶酸转运体(RFC)、质子耦合叶酸转运体(PCFT)蛋白表达;采用免疫荧光法检测海马齿状回Ki-67/巢蛋白双阳性细胞数、5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)/DCX双阳性细胞数及脉络丛组织中ZO-1、FRα、RFC、PCFT蛋白表达;ELISA法检测血浆、脑脊液、海马组织中5-甲基四氢叶酸(5-MTHF)含量;采用Pearson相关分析对各组大鼠脑脊液、海马组织中5-MTHF含量与海马组织中巢蛋白、DCX、NeuN蛋白表达进行相关性分析。结果与正常组比较,青年抑郁组及迟发抑郁组大鼠糖水偏爱度降低,旷场总路程、穿格次数减少,强迫游泳不动时间延长,海马组织NeuN、巢蛋白、DCX蛋白表达均降低,海马齿状回Ki-67/巢蛋白双阳性细胞数、BrdU/DCX双阳性细胞数减少,ZO-1、FRα蛋白表达及荧光强度减少(P抑郁组大鼠第3、4天及迟发抑郁组大鼠第2~4天T迷宫正确率均明显降低,迟发抑郁组大鼠脑脊液、海马组织中5-MTHF含量明显降低(P抑郁组相比,迟发抑郁组大鼠旷场总路程、穿格次数减少,第1~4天T迷宫正确率均显著降低,海马组织NeuN、巢蛋白、DCX蛋白表达及海马齿状回Ki-67/巢蛋白双阳性细胞数、BrdU/DCX双阳性细胞数减少(P抑郁组比较,二仙汤组大鼠糖水偏爱度及旷场总路程、穿格次数均升高,强迫游泳不动时间缩短,第3~4天T迷宫正确率明显升高,海马组织NeuN、巢蛋白、DCX蛋白表达升高,海马齿状回Ki-67/巢蛋白双阳性细胞数、BrdU/DCX双阳性细胞数增加,脑脊液、海马组织中5-MTHF含量明显升高,脉络丛中ZO-1、FRα、RFC、PCFT蛋白表达及荧光强度升高(P抑郁样行为及认知障碍,其机制可能通过减轻脑组织脉络丛结构损伤,改善脉络丛叶酸转运障碍,从而促进海马神经发生。

关键词：迟发性抑郁症二仙汤脉络丛叶酸神经发生认知功能

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基于UPLC-MS代谢组学探讨补肾治法抗LOD作用机制

基于UPLC-MS代谢组学探讨补肾治法抗LOD作用机制

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作者：许汉芳广州中医药大学

学位级别：硕士

目的:本研究旨在通过建立迟发性抑郁症(late-onset depression,LOD)大鼠模型,通过整体动物行为学实验观察大鼠抑郁样行为,运用UPLC-MS代谢组学技术检测大鼠体内的差异代谢物并富集重要代谢通路,采用生物分子学技术验证关键靶点,探讨补... 详细信息

目的:本研究旨在通过建立迟发性抑郁症(late-onset depression,LOD)大鼠模型,通过整体动物行为学实验观察大鼠抑郁样行为,运用UPLC-MS代谢组学技术检测大鼠体内的差异代谢物并富集重要代谢通路,采用生物分子学技术验证关键靶点,探讨补肾治法代表复方二仙汤(Erxian Decoction,EXD)抗LOD的作用机制。方法:1.动物模型的建立本研究中抑郁症模型采用慢性不可预计轻度应激(chronic unpredictable mild sress,CUMS)模型;LOD模型采用自然衰老合并CUMS建立。CUMS应激源包括:频闪(300次/min,5 h)、白噪音(85 db,5 h)、足底电击(1 mA,2 s/次,每次间隔30s,共电击10次)、湿笼(10 h)、并笼(4只接受应激的大鼠放入同一鼠笼,10 h)、夜晚持续光照(20:00-次日8:00,12 h)、禁食(12 h)、禁水(12 h)、束缚(12 h)、禁食禁水(24 h)等。每日随机施加1-2种应激源并结合孤养,3天内避免出现相同的应激源。2.观察LOD大鼠抑郁症状及认知障碍及二仙汤的干预作用本实验中共有7-8周龄青年正常雄性Wistar大鼠40只,20月龄自然衰老雄性Wistar大鼠60只。根据造模前的糖水偏爱度来进行分组:青年大鼠分为青年正常对照组(CON)和青年抑郁症组(CUMS),每组20只大鼠;自然衰老大鼠共分为3个组,分别为自然衰老对照组(AGED)、迟发性抑郁症组(LOD)和二仙汤治疗对照组(EXD),每组20只大鼠。所有大鼠共计分为5组。除CON组和AGED组,其余组别均接受6周的CUMS应激。造模期间EXD组给予二仙汤(8 g/kg/d)灌胃治疗,其余组别给予等量纯净水灌胃。6周CUMS应激造模结束后,通过一系列动物行为学测试观察各组大鼠的抑郁样行为和认知功能。其中糖水偏爱实验检测快感缺失、旷场实验检测自主活动、强迫游泳实验评估绝望情绪、Morris水迷宫和T迷宫检测空间和方位的学习记忆能力。3.基于大鼠海马、前额叶皮质、血清的UPLC-MS代谢组学探讨二仙汤抗LOD的作用机制采用UPLC-MS代谢组学技术,对大鼠海马、前额叶皮质及血清中的代谢物质进行检测,并筛选出各组间的差异代谢物(VIP>1,P0.1,P抑郁样行为,具体表现为:快感缺失、自发活动减少、绝望和焦虑情绪增加。同时还伴随空间和方位学习记忆障碍,且LOD大鼠更为明显。***-MS代谢组学结果显示:(1)在海马中,LOD组和CON组两组间共鉴定出165种差异代谢物,其中76种上调和89种下调;EXD组和LOD组两组间共鉴定出70种差异代谢物,其中40种上调和30种下调;LOD组和CON组以及EXD组和LOD组之间有31种交叉代谢物,主要涉及到2个潜在生物学通路:鞘脂代谢和甘油磷脂代谢这2个通路,其中包括潜在生物标志物:硬脂酰鞘氨醇(C18神经酰胺)、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、以及磷脂酰胆碱。(2)在前额叶皮质中,LOD组和CON组两组间共鉴定出189种差异代谢物,其中95种上调和94种下调;EXD组和LOD组两组间共鉴定出71种差异代谢物,其中17种上

关键词：迟发性抑郁症代谢组学鞘脂代谢神经酰胺补肾治法

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