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辣椒炭疽病菌生物学特性的研究

微生物学通报 1992年第6期19卷 321-324页

作者：谢丙炎欧阳本友欧阳丰湖南省衡阳市蔬菜研究所衡阳421005

辣椒炭疽病菌在不同培养基中培养,以PDA、PCA、CFA、CLA菌丝生长最佳,在CMA、PDA、CFA中产孢量最多。病原菌生长和产孢的最适温度和pH值分别为26—28℃和pH4.5—6.5,自然散光和完全黑暗有利于菌丝生长,12小时黑光灯与12小时黑暗交替处... 详细信息

辣椒炭疽病菌在不同培养基中培养,以PDA、PCA、CFA、CLA菌丝生长最佳,在CMA、PDA、CFA中产孢量最多。病原菌生长和产孢的最适温度和pH值分别为26—28℃和pH4.5—6.5,自然散光和完全黑暗有利于菌丝生长,12小时黑光灯与12小时黑暗交替处理有利于产孢。该菌对多种碳源和氮源均可利用,其中木糖、葡萄糖和蔗糖作碳源,天冬酰胺作氮源,菌生长和产孢最佳。分生孢子在25℃,pH6.0—8.0,相对湿度100%,黑光灯照射,以及20%辣椒叶煎汁或1%蛋白胨液中,萌发率最高,其致死温度为50℃处理10分钟。

关键词：辣椒辣椒炭疽病菌真菌

辣椒炭疽病菌Colletotrichum gloeosporioides对啶氧菌酯的敏感基线及抗性突变体生物学性状

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植物保护 2017年第6期43卷 29-37页

作者：任璐周建波刘慧平曹俊宇殷辉赵晓军农业有害生物综合治理山西省重点实验室太原030031 山西农业大学农学院太谷030801 山西省农业科学院植物保护研究所太原030006

为评估辣椒炭疽病菌Colletotrichum gloeosporioides对啶氧菌酯的抗性风险,建立了辣椒炭疽病菌对啶氧菌酯的敏感基线,室内筛选获得了辣椒炭疽病菌抗啶氧菌酯突变体,并对突变体生物学性状进行了研究。在山西省3个未使用过啶氧菌酯及QoI... 详细信息

为评估辣椒炭疽病菌Colletotrichum gloeosporioides对啶氧菌酯的抗性风险,建立了辣椒炭疽病菌对啶氧菌酯的敏感基线,室内筛选获得了辣椒炭疽病菌抗啶氧菌酯突变体,并对突变体生物学性状进行了研究。在山西省3个未使用过啶氧菌酯及QoI类药剂的地区采集并分离到45株辣椒炭疽病菌。采用菌丝生长速率法测定其对啶氧菌酯的敏感性,结果显示,EC_(50)值介于1.404~16.650μg/mL,平均EC_(50)值为(6.783±3.499)μg/mL。啶氧菌酯与水杨肟酸(SHAM)共同处理时(SHAM的处理浓度为100μg/mL),EC_(50+S)为0.022~0.275μg/mL,平均(0.109±0.058)μg/mL,EC_(50+S)呈连续性单峰曲线,且敏感性频率分布呈近似正态分布,EC_(50+S)平均值可作为辣椒炭疽病菌对啶氧菌酯的敏感基线。且水杨羟肟酸旁路氧化贡献值F(F=EC_(50)/EC_(50+S))最低为6.039,最高为301.441,平均78.026。室内诱导获得8株抗性突变体,其中低抗突变体6株,中抗突变体2株。中抗突变体无性繁殖10代,其抗性可稳定遗传。突变体产孢量和菌丝生长速率与敏感菌株相比均无显著差异,但无药条件下,突变体致病力较敏感菌株有所降低。抗感菌株均以淀粉作为碳源、硝酸钾作为氮源时利用率最高;最适pH均为5和6;菌丝的最适生长温度均为25℃。表明辣椒炭疽病菌抗啶氧菌酯突变体具有较高的适合度,对啶氧菌酯具有较高抗性风险,这一研究结论为指导生产用药,延缓抗药性发展提供理论依据。

关键词：辣椒炭疽病菌啶氧菌酯敏感基线抗性风险生物学性状

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辣椒炭疽病菌对嘧菌酯的敏感性测定

植物病理学报 2005年第1期35卷 73-77页

作者：李红霞刘照云王建新周明国南京农业大学植物保护学院南京210095

从江苏和海南省随机采集分离获得45个辣椒炭疽病菌单孢菌株,根据孢子形态鉴定其病原菌为Colletotrichum gloeosporioides和***,其中C. gloeosporioides占总菌株数的64.4%.筛选出甘油琼脂(AEA)培养基和水琼脂(WA)培养基,分别作为产孢法... 详细信息

从江苏和海南省随机采集分离获得45个辣椒炭疽病菌单孢菌株,根据孢子形态鉴定其病原菌为Colletotrichum gloeosporioides和***,其中C. gloeosporioides占总菌株数的64.4%.筛选出甘油琼脂(AEA)培养基和水琼脂(WA)培养基,分别作为产孢法和孢子萌发法测定辣椒炭疽病菌对嘧菌酯敏感性的适宜培养基.通过孢子萌发法测定2种病原菌45个菌株对嘧菌酯的敏感性范围在0.009～0.091μg/mL之间,平均EC50为(0.047±0.040)μg/mL.其中29个***菌株和16个C. capsici菌株的平均EC50值分别为(0.051±0.047)μg/mL和(0.041±0.024)μg/mL.研究发现旁路氧化酶抑制剂水杨肟酸(SHAM)对嘧菌酯抑制分生孢子萌发有协同增效作用,且嘧菌酯抑制辣椒炭疽病菌菌丝生长的能力较弱.

关键词：辣椒炭疽病菌嘧菌酯生测方法敏感性基线

辣椒炭疽病菌效应因子NIS1-PCR-RFLP标记系统的建立

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南方农业学报 2021年第9期52卷 2473-2481页

作者：欧阳超刘思珍满益龙盛家伟陈岳张鑫刘勇张德咏谭新球湖南大学研究生院隆平分院长沙410125 湖南省农业科学院植物保护研究所长沙410125 湖南省农业科学院生物技术研究所长沙410125 湖南农业大学长沙410000

【目的】基于辣椒炭疽病菌种群复杂、田间复合侵染种群组成不清,导致防控相对困难的问题,建立一种快速直观的辣椒炭疽病菌区分标记系统,为其病害田间防控提供科学依据。【方法】利用r DNA-ITS通用引物克隆田间分离的22株辣椒炭疽病菌rDN... 详细信息

【目的】基于辣椒炭疽病菌种群复杂、田间复合侵染种群组成不清,导致防控相对困难的问题,建立一种快速直观的辣椒炭疽病菌区分标记系统,为其病害田间防控提供科学依据。【方法】利用r DNA-ITS通用引物克隆田间分离的22株辣椒炭疽病菌rDNA-ITS,通过其序列比对分析构建系统发育进化树,初步确定22株供试菌株的种类和分类地位;选用效应因子NIS1基因为靶标,根据辣椒胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)和黄瓜炭疽菌(***)NIS1基因比对分析,设计NIS1基因简并引物,克隆22株辣椒炭疽病菌的NIS1基因,利用其序列比对分析构建系统发育进化树,分析比较rDNA-ITS和NIS1基因区分供试菌株的差异,进而对22株不同辣椒炭疽病菌NIS1基因进行分析,选择限制性内切酶,分析NIS1基因的PCR产物限制性片段多态性(RFLP)差异,建立NIS1-PCR-RFLP标记系统。【结果】rDNA-ITS序列系统进化分析表明22株辣椒炭疽病菌属于5种炭疽病菌,即胶孢炭疽菌(***)、短孢炭疽菌(***)、尖孢炭疽菌(***)、平头炭疽菌(***)和黑点炭疽菌(***),其序列同源性为85.6%~99.8%,但***和***处于同一混合组群;22株辣椒炭疽病菌的NIS1基因两端序列较保守,中间存在可变区,与已报道的***的NIS1基因同源性在34.6%~78.9%;NIS1基因系统发育进化树能将22株辣椒炭疽病菌分成5个组群,***和***处于不同组群,表明其区分度优于rDNA-ITS;NIS1-PCRRFLP主要差异片段显示***和***的最大片段均为210 bp,但片段数目不同,而***为292 bp,***为685 bp,***为345 bp,参照菌株***为497 bp,能够直观观察区分。【结论】研究建立的NIS1-PCR-RFLP标记系统可简便、直观地区分不同辣椒炭疽病菌的差异,有望发展成为真菌新的分子标记应用于田间辣椒炭疽病菌种群的快速鉴定。

关键词：辣椒炭疽病菌效应因子NIS1 PCR-RFLP 标记系统核糖体DNA转录间隔区(rDNA-ITS)

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辣椒炭疽病菌拮抗内生菌培养条件优化

食品科技 2017年第10期42卷 21-26页

作者：肖靓田建易有金夏菠曹熙湖南农业大学食品科技学院食品科学与生物技术湖南省重点实验室长沙410128 湖南省农业科学院植物保护研究所长沙410128

以辣椒炭疽病菌为指示菌,通过单因素试验优化内生枯草芽孢杆菌P5的发酵条件,并应用响应面法的Box-Behnken试验优化其发酵培养基组成成分。优化试验结果:拮抗内生菌P5的最佳生长代谢条件为初始p H7.0、温度28℃、装液量110 m L/250 m L... 详细信息

以辣椒炭疽病菌为指示菌,通过单因素试验优化内生枯草芽孢杆菌P5的发酵条件,并应用响应面法的Box-Behnken试验优化其发酵培养基组成成分。优化试验结果:拮抗内生菌P5的最佳生长代谢条件为初始p H7.0、温度28℃、装液量110 m L/250 m L、接种量3%、培养时间48 h、转速180 r/min;最适发酵培养基组分为葡萄糖20 g/L、酵母膏9 g/L、CaCl_2 4 g/L。优化后拮抗菌株P5发酵滤液对辣椒炭疽病菌抑制率由22.65%提高至38.55%。

关键词：内生菌发酵抑菌活性辣椒炭疽病菌

辣椒炭疽病菌快速检测技术研发及其协同增效药剂筛选

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辣椒炭疽病菌快速检测技术研发及其协同增效药剂筛选

作者：刘阿丽贵州大学

学位级别：硕士

辣椒炭疽病是辣椒生产中主要的真菌性病害之一,严重影响辣椒的产量和质量。本研究鉴定了贵州省辣椒炭疽病菌的种类,建立了基于LAMP技术快速检测方法,研制出基于显色反应的快速选药试剂盒,筛选出高效新型的协同增效组合,旨在为防治辣椒... 详细信息

辣椒炭疽病是辣椒生产中主要的真菌性病害之一,严重影响辣椒的产量和质量。本研究鉴定了贵州省辣椒炭疽病菌的种类,建立了基于LAMP技术快速检测方法,研制出基于显色反应的快速选药试剂盒,筛选出高效新型的协同增效组合,旨在为防治辣椒炭疽病的科学用药提供参考。主要研究结果如下:1.分离鉴定了贵州省辣椒炭疽病菌的种类,并建立了基于LAMP快速检测试剂盒。采用组织分离法分离鉴定了从贵阳和遵义采集的病样,并通过柯赫氏法则、菌落形态及r DNA-ITS序列分析确定其为辣椒炭疽病菌,分别为尖孢炭疽菌(Colletotrichum acutatum)、鸡冠花炭疽菌(Colletotrichum scovillei)和疑似新种的(Colletotrichum sp.)。基于LAMP技术,以辣椒炭疽病菌内转录间隔区ITS序列为靶基因,设计4条LAMP引物,通过对引物比例,反应时间,反应体系等条件的优化。辣椒炭疽病菌检测试剂盒特异性试验结果显示,LAMP体系在最佳反应温度65℃条件下扩增60 min,辣椒炭疽病菌在指示剂钙黄绿素和羟基萘酚蓝的作用下,分别呈现绿色和蓝色,反应结果为阳性;而其它8株供试菌株和空白对照分别呈现橙黄色和紫色,均为阴性反应,无扩增条带出现,表明该LAMP检测引物特异性强,为辣椒炭疽病菌的检测提供一种高效便捷、特异性好、可视化的检测方法。2.研制出辣椒炭疽病菌的快速选药试剂盒。根据辣椒病原菌对药剂敏感性呈正态分布的原理,建立贵州省辣椒炭疽病菌对咪鲜胺和甲基硫菌灵的敏感基线,分别为(0.0710±0.0133)mg/L和(0.7641±0.1508)mg/L。以敏感基线为基准,应用溴甲酚紫作为指示剂,研制出辣椒炭疽病菌的快速选药试剂盒,分别由2%的溴甲酚紫溶液0.088 mg/L或0.175 mg/L或0.35 mg/L咪鲜胺及PDA培养基组成的试剂盒和由2%的溴甲酚紫溶液0.45 mg/L或0.9 mg/L或1.8 mg/L甲基硫菌灵及PDA培养基组成的试剂盒。结果显示:田间病原菌在0.35 mg/L咪鲜胺的试剂盒上显示黄色表明已经产生抗性,在0.088 mg/L咪鲜胺的试剂盒上显示橙红色则表明比较敏感;在1.8 mg/L甲基硫菌灵的试剂盒上显示黄色表明已经产生抗性,在0.45 mg/L甲基硫菌灵的试剂盒上显示橙红色则表明比较敏感。3.筛选出防控辣椒炭疽病菌的协同增效组合。采用菌丝生长速率法研究了17种常用杀菌剂对辣椒炭疽病菌的敏感性及其协同作用。结果表明:17种杀菌剂对辣椒炭疽病菌均有一定的抑制作用,其中咪鲜胺、双苯菌胺、唑胺菌酯和戊唑醇的敏感性相对较高,其EC值分别为0.06 mg/L、0.49 mg/L、0.51 mg/L和0.68 mg/L;其次为丁香菌酯与吡唑醚菌酯,其EC值分别为1.34 mg/L与1.38mg/L;而肟菌酯、唑菌酯、啶氧菌酯的敏感性相对较低,其EC值分别12.01mg/L、13.42 mg/L和14.24 mg/L。协同作用显示:戊唑醇与吡唑醚菌酯以有效成分比1:1时,增效作用明显,其SR值为2.0611,EC值为0.37 mg/L;而啶氧菌酯与咪鲜胺以有效成分比1:3时协同增效显著,其SR值为1.7234,EC值为0.05mg/L。

关键词：辣椒炭疽病菌快速检测快速选药协同增效

辣椒炭疽病菌（Colletotrichum scovillei）次生代谢产物及其抑菌活性

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辣椒炭疽病菌（Colletotrichum scovillei）次生代谢产物及其抑菌...

作者：陈明卿沈阳农业大学

学位级别：硕士

随着微生物次生代谢产物的深入发掘,现今从普通微生物资源中发掘新型的代谢产物难度剧增,为了更高效的获取活性良好的新结构代谢产物,需要采用更加有效的新策略。植物病原真菌因其特殊的生存方式及代谢途径,产生特殊且具有潜力的代谢产... 详细信息

随着微生物次生代谢产物的深入发掘,现今从普通微生物资源中发掘新型的代谢产物难度剧增,为了更高效的获取活性良好的新结构代谢产物,需要采用更加有效的新策略。植物病原真菌因其特殊的生存方式及代谢途径,产生特殊且具有潜力的代谢产物而受到广泛关注。本研究采用的菌株LJ17091309-02即分离自患有炭疽病的辣椒果实病样,菌株经鉴定为斯高威尔刺盘孢菌(Colletotrichum scovillei)。采用恒温震荡培养、大孔树脂(XAD-16)吸附和甲醇浸泡等方法,从菌株发酵液中分离提取到粗提物3.4 g。采用色谱分离法、波谱法等方法,分离到2个单体化合物并鉴定其结构。化合物1为新化合物,尚未被报道过,经鉴定为神经酰胺类化合物。化合物2为已知化合物Sambutoxin,是一种生物碱类化合物,化学名称为3-{5-methyl-6-[(E)-1,3,5-trimethylhept-1-enyl]tetraydropyranyl}-5-(p-hydroxyphenyl)-1-menthyl1-4-hydroxy-2(1H)-pyridone。利用96孔板微量液基稀释法、菌丝生长速率法及离体叶片法,测定2个单体化合物的抑菌活性。结果表明,96孔板微量液基稀释法初筛发现化合物1对稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)、花生纹枯病菌(Rhizoctonia solani)和玉米大斑病菌(Exserohilum turcicum)具有抑制作用,化合物2对小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum)、花生纹枯病菌(Rhizoctonia solani)、小麦根腐病菌(Bipolaris sorokkiniana)和玉米大斑病菌(Exserohilum turcicum)具有抑制作用,2个单体化合物均对玉米大斑病菌(Exserohilum turcicum)的抑菌活性最高。菌丝生长速率法测定结果表明化合物1对玉米大斑病菌(Exserohilum turcicum)的EC值为11.43μg/ml,化合物2对玉米大斑病菌(Exserohilum turcicum)的EC值为18.42μg/ml。离体叶片法测定结果表明,含药浓度为800μg/ml时,2个化合物和百菌清(阳性对照)对玉米大斑病菌(Exserohilum turcicum)的防治效果分别为84.8%、79.3%和88.9%,含药浓度为400μg/ml时,防治效果分别为76.3%、69.8%和82.7%,百菌清(阳性对照)防治效果更佳,2个化合物也表现出一定的抗菌活性,这表明2个化合物具备成为农药先导化合物的潜力。

关键词：辣椒炭疽病菌次生代谢产物神经酰胺玉米大斑病菌抑菌活性

辣椒炭疽病菌对啶氧菌酯敏感基线的建立及其抗性风险评估

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辣椒炭疽病菌对啶氧菌酯敏感基线的建立及其抗性风险评估

作者：曹俊宇山西农业大学

学位级别：硕士

辣椒炭疽病菌(Colletotrichum spp.)是辣椒种植中的严重病害,既可引起辣椒幼苗死亡也可危害果实,造成果腐,对辣椒的产量和品质影响很大。目前,化学防治仍然是控制辣椒炭疽病菌的重要手段。但杀菌剂的不合理使用,引起了辣椒炭疽病菌对多... 详细信息

辣椒炭疽病菌(Colletotrichum spp.)是辣椒种植中的严重病害,既可引起辣椒幼苗死亡也可危害果实,造成果腐,对辣椒的产量和品质影响很大。目前,化学防治仍然是控制辣椒炭疽病菌的重要手段。但杀菌剂的不合理使用,引起了辣椒炭疽病菌对多种药剂敏感性降低,甚至产生了抗药性。啶氧菌酯(picoxystrobin)属呼吸抑制类杀菌剂,在美国已经获得登记用于辣椒炭疽病等病害的防治,但在我国尚未普遍应用。迄今为止,国内外尚未见该病害对啶氧菌酯抗药性的研究报道。为此,本研究测定了辣椒炭疽病菌对啶氧菌酯的敏感性,并建立了相对敏感基线;在此基础上诱导了辣椒炭疽病菌对啶氧菌酯的抗性突变体、并对其适合度及生物学特性进行了研究,以期为啶氧菌酯防治辣椒炭疽病菌的科学、合理使用提供参考。主要研究内容如下:1、建立辣椒炭疽病菌对啶氧菌酯的敏感基线。在山西省晋中市3个未使用过啶氧菌酯及同类药剂的地区采集并分离到45株辣椒炭疽病菌菌株,采用菌丝生长速率法对其进行敏感性测定,结果显示,其EC50值介于1.4041～16.6497 μg/mL,平均值为6.7831±3.4994μg/mL,其EC50呈连续性单峰曲线,且45株菌株对啶氧菌酯敏感性频率分布呈现近似正态分布,因此其EC50的平均值可作为辣椒炭疽病菌对啶氧菌酯的相对敏感基线。水杨肟酸(SHAM)作为旁路氧化途径中主要替代氧化酶的抑制剂,可增强啶氧菌酯对辣椒炭疽病菌菌丝的抑制作用。在SHAM的处理浓度为150 μg/mL时,EC50+S介于0.0221～0.2752 μg/mL之间,平均值为0.1090±0.058 μg/mL。旁路氧化所表现出的增效值F(F=EC50/EC50+S)最低为6.0391,最高为301.4412,平均为78.0262。2、室内诱导辣椒炭疽病菌对啶氧菌酯的抗性突变体。随机从3个采集地菌株中各选取敏感菌株1株,采用药剂诱导、药剂驯化和紫外+药剂联合诱导三种方法分别对这3株辣椒炭疽病菌敏感菌株进行抗药性诱导,共诱导获得8株抗性突变体,其中低抗菌株6株,中抗菌株2株,未获得高抗性水平突变体。3、测定抗性突变体的适合度及生物学特性。结果显示,辣椒炭疽病菌对抗啶氧菌突变体的抗性可稳定遗传,其产孢量、菌丝生长速率、致病力与亲本敏感菌株相比没有显著差异。在不同营养条件、pH值、温度以及渗透压条件下,辣椒炭疽病菌抗感菌株均以淀粉作为碳源、硝酸钾作为氮源时利用率最高;在中性偏酸条件下抗感菌株生长较旺盛,而在强酸或强碱条件下抗感菌株菌丝生长较差;抗感菌株菌丝最适生长温度均为25℃。此外,渗透压敏感性测定结果表明,抗感菌株在供试的几种葡萄糖浓度下均可生长,相比无糖培养基,在含有葡萄糖的培养基上菌落直径会明显增加,而对于NaCl浓度而言,抗感菌株随着NaCl浓度的提高菌丝生长受到抑制,且敏感菌株与不同抗性水平菌株对高浓度NaCl渗透压均很敏感,其渗透压敏感性没有显著差异。4、测定啶氧菌酯与嘧菌酯、醚菌酯、啶菌噁唑、多菌灵、咪鲜胺的交互抗性。结果显示,在防治辣椒炭疽病菌中,啶氧菌酯与同属甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂的嘧菌酯、醚菌酯之间存在交互抗药性,与啶菌噁唑、多菌灵、咪鲜胺之间均无交互性产生。综合分析表明辣椒炭疽病菌对啶氧菌酯具有较高的抗药性风险,建议生产上应将啶氧菌酯与其它无交互抗性的药剂交替或混合使用从而延缓啶氧菌酯抗药性的产生。

关键词：辣椒炭疽病菌啶氧菌酯敏感基线生物学特性交互抗性

农抗120和百菌清对辣椒炭疽病菌联合毒力的测定

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华中农业大学学报 2005年第2期24卷 157-160页

作者：韩新才张宁肖国蓉胡长富武汉工程大学湖北省新型反应器与绿色化学工艺重点实验室武汉430073 武汉科诺生物农药有限公司武汉430074

在室内用平皿菌落直径法测定了农抗120、百菌清及其4种不同配比的混剂对辣椒炭疽菌的菌丝抑制作用和毒力.结果表明,农抗120和百菌清对辣椒炭疽病菌EC50值是2 777.2 mg/L和1 090.7 mg/L,农抗120的毒力小于百菌清;农抗120与百菌清以4:1～... 详细信息

在室内用平皿菌落直径法测定了农抗120、百菌清及其4种不同配比的混剂对辣椒炭疽菌的菌丝抑制作用和毒力.结果表明,农抗120和百菌清对辣椒炭疽病菌EC50值是2 777.2 mg/L和1 090.7 mg/L,农抗120的毒力小于百菌清;农抗120与百菌清以4:1～8:1混配增效系数(SR)为2.04～3.93,具有显著的增效作用,其中农抗120与百菌清6:1增效系数最大,达3.93,为最佳配比;农抗120与百菌清6:1混配对9种植物病原真菌的平均抑菌率为84.4%,显著高于农抗120的75.5%和百菌清的66.0%.

关键词：农抗120 百菌清辣椒炭疽病菌混配联合毒力增效作用