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产单核细胞李氏杆菌Lm4b_02325/26双基因缺失株构建及部分生物学特性试验

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畜牧兽医学报 2024年第6期55卷 2578-2587页

作者：任慧杰马勋王静刘彩霞曾东东寇丽君史唯地吕双飞钱瑞宣高盛杰石河子大学动物科技学院新疆石河子832003

旨在构建食源性产单核细胞李氏杆菌毒力岛4(LIPI-4)中的抗转录终止子(Lm4b_02325)和未知蛋白(Lm4b_02326)基因的双缺失株,研究Lm4b_02325/26基因对产单核细胞李氏杆菌(Listeria monocytogenes,LM)的部分生物学特性的影响。利用同源重组... 详细信息

旨在构建食源性产单核细胞李氏杆菌毒力岛4(LIPI-4)中的抗转录终止子(Lm4b_02325)和未知蛋白(Lm4b_02326)基因的双缺失株,研究Lm4b_02325/26基因对产单核细胞李氏杆菌(Listeria monocytogenes,LM)的部分生物学特性的影响。利用同源重组技术构建LM928ΔLm4b_02325/26双缺失株,测定LM928和LM928ΔLm4b_02325/26双缺失株在脑心浸出液肉汤(brain heart infusion broth, BHI)、不同EtOH浓度、不同NaCl浓度、不同pH、不同温度下的D_(600 nm),绘制生长曲线;RT-qPCR检测双基因缺失前后体外BHI培养环境下部分毒力因子转录水平;平板计数测定其对鼠巨噬细胞RAW264.7的黏附、侵袭与胞内增殖情况;感染C57BL/6小鼠后检测肝、脾、脑组织中的细菌数量。结果表明,成功构建具有遗传稳定性的双缺失株LM928ΔLm4b_02325/26。在含0.5%~10%NaCl或3%~4.5%EtOH的培养基中,双缺失株与野毒株生长没有明显差异,在pH=5条件下,双缺失株的生长率显著高于野毒株,pH=9条件下双缺失株的生长率显著低于野毒株。在不同温度(4℃、37℃、42℃)BHI培养基中,双缺失株与野毒株生长没有明显差异。Lm4b_02325/26基因双缺失株在BHI培养基中毒力因子hly、inlC和PlcA极显著上调(P量极显著低于野毒株(P载菌量在肝、脾中没有显著差异,在脑组织中双缺失株载菌量为10~4,高于野毒株的10~(3.07),差异极显著(P<0.01)。综上认为,LIPI-4的Lm4b_02325和Lm4b_02326基因参与LM毒力因子的表达和脑组织的定植能力,与弱酸强碱条件下适应力及对RAW264.7细胞的黏附、侵袭和胞内增殖有关。本研究为LIPI-4的功能研究奠定了基础。

关键词：产单核细胞李氏杆菌双缺失株黏附侵袭胞内增殖载菌量生长曲线

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鳗鲡爱德华氏菌对美洲鳗鲡的致病性与宿主抗感染相关基因的表达

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集美大学学报（自然科学版） 2024年第2期29卷 97-108页

作者：王岳翟少伟万绮娟许明陈敏霞郭松林集美大学水产学院福建厦门361021 鳗鲡现代产业技术教育部工程研究中心福建厦门361021

采用1.0×10^(7)~2.0×10^(8)cfu/mL的鳗鲡爱德华氏菌感染美洲鳗鲡以确定其半数致死量(LD_(50)),然后采用略低于LD_(50)的菌浓度(3.3×10^(6)cfu/尾)感染鳗鲡,并于感染后12、24、36、48、60、72 h等6个时间点检测鳗鲡肝脏、肾脏和血液... 详细信息

采用1.0×10^(7)~2.0×10^(8)cfu/mL的鳗鲡爱德华氏菌感染美洲鳗鲡以确定其半数致死量(LD_(50)),然后采用略低于LD_(50)的菌浓度(3.3×10^(6)cfu/尾)感染鳗鲡,并于感染后12、24、36、48、60、72 h等6个时间点检测鳗鲡肝脏、肾脏和血液的载菌量,同时观察感染后36、60 h鳗鲡肝脏、肾脏和脾脏的病理变化。此外,采用qRT-PCR方法探究感染前和感染后12、36、60 h等4个时间点细菌外膜蛋白A(OmpA)和宿主抗鳗鲡爱德华氏菌感染的16个免疫相关基因表达。结果表明:感染鳗鲡爱德华氏菌后,美洲鳗鲡的LD_(50)为2.5×10^(5)cfu/g(5.0×10^(6)cfu/尾);美洲鳗鲡肾脏的载菌量于感染后36、48、60 h均显著高于在肝脏和血液中的载菌量,且感染后36 h菌浓度在肾脏和血液中均达到峰值,而在肝脏中的峰值则为感染后72 h。感染后36 h鳗鲡肝脏血管充血,肾小球萎缩且肾小管上皮细胞脱落,脾脏血管内形成血栓;感染后60 h肝血管出现血栓且部分肝细胞坏死,肾小管上皮细胞空泡变性并脱落入肾小管管腔,脾脏出现大量因细菌感染而导致的坏死性结节。与感染前相比,感染后12 h细菌OmpA基因在肝脏的表达量显著(P量先下降后急剧上升,在肾脏的表达量则先上升后下降再上升。鳗鲡抗爱德华氏菌感染的5个免疫球蛋白相关的基因,在肝脏和肾脏不同时间点的表达量均无明显差异,而感染后早期在脾脏的表达量显著高于晚期;感染后3个肿瘤坏死因子相关基因在早期的表达量相对较高;此外,感染后12 h多个免疫相关基因表达量显著上升。

关键词：美洲鳗鲡鳗鲡爱德华氏菌半数致死量(LD_(50)) 载菌量病理变化

泥蚶在哈维氏弧菌感染下载菌量变化及抗性相关指标筛选

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泥蚶在哈维氏弧菌感染下载菌量变化及抗性相关指标筛选

作者：杨千元上海海洋大学

学位级别：硕士

泥蚶(Tegillarca granosa)隶属于软体动物门(Mollusca)、瓣鳃纲(Lamellibranchia)、列齿目(Taxodonta)、蚶科(Arcidae)、泥蚶属(Tegillarca),是我国主要滩涂养殖贝类之一,长期以来深受沿海地区居民青睐。然而近年来,养殖过程中时常出现... 详细信息

泥蚶(Tegillarca granosa)隶属于软体动物门(Mollusca)、瓣鳃纲(Lamellibranchia)、列齿目(Taxodonta)、蚶科(Arcidae)、泥蚶属(Tegillarca),是我国主要滩涂养殖贝类之一,长期以来深受沿海地区居民青睐。然而近年来,养殖过程中时常出现弧菌病爆发和规模性死亡现象,阻碍了泥蚶养殖产业的可持续发展。这固然与环境恶化、密度增加和管理不善等诸多因素有关,但抗性优良品种的缺乏是造成上述现象的重要原因。因此,通过遗传选育的方式培育抗性泥蚶新品系具有重要的经济价值。然而,目前在水产动物中,以提高抗病力为目的的育种与其他如针对生长(体长、体重)性状的选育相比,进展相对缓慢,造成这种状况的重要原因是抗病性状的界定不够清晰以及测定评价较为困难。因此,对表型、遗传信息进行多层次数据化挖掘,构建整合种质表型、基因型和功能标记等信息的数据库显得尤为迫切。本研究首先通过浸泡感染和注射胁迫两种攻毒方式分析哈维氏弧菌对泥蚶的毒性效应;其次分析了弧菌感染下泥蚶各组织中弧菌载量的变化规律;最后基于不同抗性表型差异的泥蚶家系和泥蚶群体,确定了泥蚶抗性相关指标。研究结果可为泥蚶抗病机制解析及抗病育种开展提供理论依据和数据支撑。本研究的主要结果如下:1、本研究建立了弧菌浓度计数标准曲线,采用哈维氏弧菌浸泡感染和注射胁迫两种攻毒方式对泥蚶进行了急性毒性实验,观察泥蚶在菌液胁迫下的存活情况,分析哈维氏弧菌对泥蚶的半致死浓度。浸泡感染实验结果表明,随着感染水体弧菌升高,泥蚶死亡起始时间和最大日死亡率时间均有所提前,泥蚶死亡情况呈现上升趋势,当浸泡浓度超过2×10CFU/m L,泥蚶15 d累计死亡率接近100%。注射胁迫实验结果表明,泥蚶死亡率与弧菌注射浓度呈显著正相关(r=0.964,P菌浸泡感染泥蚶7 d后停止实验,15 d的半致死浓度(LC)为1.35×10CFU/m L;注射胁迫下的96 h半致死剂量(96h LD)为2.12×10CFU/g,说明哈维氏弧菌对泥蚶有明显的毒害作用。研究结果为泥蚶对哈维氏弧菌耐受性、养殖环境条件要求等提供数据参考,并且为泥蚶弧菌病防治提供了理论基础。2、本研究采用哈维氏弧菌浸泡感染泥蚶的方法,记录攻毒水体和泥蚶组织中的哈维氏弧菌含量的动态变化及相关关系。结果显示,弧菌感染浓度为1×10CFU/m L,泥蚶血液中弧菌载量显著高于鳃、闭壳肌、外套膜和肝胰腺,各组织中的弧菌载量呈现先上升,后下降,最后维持较低水平的变化规律。持续感染6 d,泥蚶血液中弧菌载量降至10-10 CFU/m L,其他组织中弧菌载量降至10-10CFU/mg。检测不同浓度弧菌(1×10,1×10,1×10,5×10 CFU/m L)浸泡感染后泥蚶肝胰腺的弧菌载量变化,结果显示,1 d时各感染组肝胰腺弧菌载量均较对照组显著增加(81.0-667.8倍),且与浸泡水体中弧菌浓度呈显著正相关(Spearman’sρ=0.762,P菌载量均较1 d明显降低,但仍然高于对照组。研究结果为泥蚶感染弧菌发病过程中,免疫识别及免疫响应机制的研究提供了参考。3、采用哈维氏弧菌浸泡感染泥蚶的方式,通过比较4个抗性家系和4个易感家系免疫相关指标差异,筛选与抗性表型性状显著相关的指标;再利用抗性群体和对照群体来检验所筛选的抗性指标的有效性。通过对不同抗性表型泥蚶在哈维氏弧菌感染下弧菌载量、生理代谢、血细胞功能、生理生化指标和基因表达数据进行测定。独立样本T检验分析结果表明,从家系中筛选出了31个生理生化指标、肝胰腺中34个以及鳃组织中33个基因表达数据在不同抗性表型泥蚶家系间存在差异(P量、Glu含量和肝胰腺中MT、RIG-I、TLR6、DRD3基因表达数据,共计8个指标,可以作为泥蚶应对哈维氏弧菌感染的抗性候选指标。研究结果为泥蚶弧菌高抗的间接选育提供参考。

关键词：泥蚶哈维氏弧菌半致死浓度(剂量) 载菌量免疫应答抗性指标

不同精油与酸化剂组合对肉仔鸡肠炎沙门氏菌感染的控制效果研究

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动物营养学报 2018年第7期30卷 2672-2682页

作者：赵景鹏李培勇王红玉宋益贞孙淑红林海山东农业大学动物科技学院山东省动物生物工程与疾病防治重点实验室泰安271018 上海美农生物科技股份有限公司上海201807

本试验旨在研究不同精油与酸化剂组合对肉仔鸡肠炎沙门氏菌感染的控制效果。选择840只无肠炎沙门氏菌感染的1日龄爱拔益加肉仔鸡,随机分为7组,分别饲养在7个构造相同但互不相通的房间内,每组6个重复,每个重复20只鸡,公母各占1/2。1组(... 详细信息

本试验旨在研究不同精油与酸化剂组合对肉仔鸡肠炎沙门氏菌感染的控制效果。选择840只无肠炎沙门氏菌感染的1日龄爱拔益加肉仔鸡,随机分为7组,分别饲养在7个构造相同但互不相通的房间内,每组6个重复,每个重复20只鸡,公母各占1/2。1组(对照组)饲喂基础饲粮,2组(抗生素组)饲喂在基础饲粮中添加40 g/t盐酸恩诺沙星的试验饲粮,3~7组(精油与酸化剂组)饲喂在基础饲粮中分别添加800 g/t不同有机酸与精油组合(组合A、B、C、D、E)的试验饲粮。14日龄时,每只鸡灌服200μL SDBL-1肠炎沙门氏菌菌液(5×107CFU/mL)。攻毒后2、7和14 d,即16、21和28日龄时,每个重复随机选2只鸡,采血、屠宰、取样。试验期28 d,分1~21日龄和22~28日龄2个饲养阶段。结果发现:1)在攻毒前、后,与对照组相比,组合A显著降低肉仔鸡的料重比(P载菌量,组合A和D对肉仔鸡肠炎沙门氏菌感染表现出良好的控制效果。3)感染肠炎沙门氏菌后,与对照组相比,组合A显著降低28日龄肉仔鸡的血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量(P量(P菌,其中组合A适合长期饲喂,而组合D仅推荐在感染状态下使用。

关键词：精油有机酸肠炎沙门氏菌载菌量肉仔鸡

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植物乳杆菌防治鸡白痢沙门菌感染的效果评价

中国饲料 2022年第11期 75-80页

作者：吕文亮张甜甜林显华鹿瑶徐海燕谷巍山东宝来利来生物工程股份有限公司/山东省动物微生态制剂重点实验室山东泰安271000

为评价植物乳杆菌BLCC2-0410添加对鸡白痢沙门菌感染的防治效果,试验选用120只1日龄海兰褐雏鸡随机分成3组,每组4个重复,每个重复10只鸡。1~10日龄,给予益生菌组饮用益生菌水溶液,3日龄时,感染组、益生菌组每只鸡灌服0.5 mL鸡白痢沙门... 详细信息

为评价植物乳杆菌BLCC2-0410添加对鸡白痢沙门菌感染的防治效果,试验选用120只1日龄海兰褐雏鸡随机分成3组,每组4个重复,每个重复10只鸡。1~10日龄,给予益生菌组饮用益生菌水溶液,3日龄时,感染组、益生菌组每只鸡灌服0.5 mL鸡白痢沙门菌菌液,对照组灌服等量的生理盐水。全程试验期14 d,统计雏鸡死亡率,测定脏器沙门菌载菌量、肠道乳酸菌数量、血液生化指标、免疫球蛋白和炎症因子。结果表明:(1)饲喂植物乳杆菌BLCC2-0410可降低雏鸡相对死亡率,较感染组降低60.6%;(2)益生菌组肠道乳酸菌数量较空白对照组和感染组分别提高3.32倍和11.12倍;(3)益生菌组血清中IgG含量分别较感染组提高6.69%,IgM和IgA降低14.63%和4.42%;(4)益生菌组雏鸡血清中IFN-γ和TNF-α较感染组提高3.94%和3.77%,IL-1β降低11.29%;(5)生化检验结果显示饲喂植物乳杆菌BLCC2-0410可降低沙门菌对雏鸡肝脏的损伤。综上,植物乳杆菌BLCC2-0410对鸡白痢沙门氏菌感染有较好的防治作用。

关键词：植物乳杆菌鸡白痢沙门菌载菌量免疫球蛋白炎症因子血液指标

噬菌体制剂沙立宁对鹅源沙门菌感染的抑菌效果研究

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中国兽医科学 2020年第5期50卷 596-602页

作者：曹中赞韩小虎许建文盖叶丹于堃万明崔埕瑜栾新红沈阳农业大学畜牧兽医学院辽宁沈阳110161

为了探讨噬菌体制剂沙立宁对鹅源沙门菌的抑菌效果,本研究选取血清型分别是鼠伤寒沙门菌和乙型副伤寒沙门菌的2株鹅源沙门菌,首先利用改良寇氏法计算2株菌的半数致死量(LD50),然后利用2株菌人工感染3日龄SPF雏鸡,再用噬菌体制剂沙立宁... 详细信息

为了探讨噬菌体制剂沙立宁对鹅源沙门菌的抑菌效果,本研究选取血清型分别是鼠伤寒沙门菌和乙型副伤寒沙门菌的2株鹅源沙门菌,首先利用改良寇氏法计算2株菌的半数致死量(LD50),然后利用2株菌人工感染3日龄SPF雏鸡,再用噬菌体制剂沙立宁和头孢噻肟处理感染后的SPF雏鸡,观察雏鸡的临床症状及内脏解剖学变化,检测肝和盲肠的载菌量及两种组织的病理组织学变化。结果显示,鼠伤寒沙门菌和乙型副伤寒沙门菌的LD50分别为1.43×10^7 CFU/mL和4.40×10^6 CFU/mL;感染2株沙门菌后,雏鸡表现精神萎顿、垂头呆立、闭眼昏睡、绒毛松乱、食欲减退、排白色浆糊状稀便,严重者全身抽搐、呼吸困难,甚至死亡。雏鸡肝中的载菌量随着感染时间延长呈先增加后减少的现象,盲肠载菌量则表现为逐渐减少。组织学方面,肝细胞出现肿胀、胞质疏松、炎性细胞浸润现象,盲肠则表现出固有层炎性细胞浸润、绒毛断裂现象。利用噬菌体制剂沙立宁和头孢噻肟治疗后,雏鸡肝和盲肠载菌量明显减少,两种组织形态趋于恢复正常,炎症反应减轻或消失。结果表明,鹅源沙门菌可以感染雏鸡,噬菌体制剂沙立宁和头孢噻肟对2株鹅源沙门菌的感染均具有抑制效果。

关键词：鹅源沙门菌载菌量病理组织学变化噬菌体制剂头孢噻肟

四甲基吡嗪对獭兔单增李斯特菌感染和天然免疫的影响

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中国畜牧兽医 2020年第5期47卷 1531-1538页

作者：郑江平刘宁白雪瑞张飞可上海农林职业技术学院上海201600 河南科技大学动物科技学院洛阳471023 洛阳鑫泰农牧科技股份有限公司洛阳471400

本试验通过研究四甲基吡嗪(TMP)对单增李斯特菌感染獭兔载菌量、溶血素、促炎因子(TNF-α、IL-1β和IFN-γ)、免疫器官指数和天然抗体的影响,旨在探讨TMP对单增李斯特菌的抑菌作用。选择断奶獭兔180只随机分为5组,每组6个重复,每个重复... 详细信息

本试验通过研究四甲基吡嗪(TMP)对单增李斯特菌感染獭兔载菌量、溶血素、促炎因子(TNF-α、IL-1β和IFN-γ)、免疫器官指数和天然抗体的影响,旨在探讨TMP对单增李斯特菌的抑菌作用。选择断奶獭兔180只随机分为5组,每组6个重复,每个重复6只。对照组饲喂基础日粮,其他4组在基础日粮中分别添加0、50、100、150 mg/kg TMP。饲养试验第1天,4个试验组獭兔每只灌服1 mL(10^7 CFU)单增李斯特菌株,对照组灌服无菌株的培养液,饲养试验持续14 d。结果表明,TMP降低了獭兔肝脏、脾脏和淋巴结的单增李斯特菌载菌量(P载菌量均呈线性下降(P菌溶血素和促炎因子(TNF-α和IL-1β)显著降低(P菌溶血素呈线性下降(P菌感染后下降,随TMP添加量增加而增加,但只有饲喂至7 d时的脾脏指数呈线性上升(P菌感染獭兔组织载菌量,减少单增李斯特菌的毒力,对提升免疫器官指数和天然抗体有积极作用。

关键词：四甲基吡嗪单增李斯特菌载菌量天然抗体獭兔

副溶血弧菌攻毒过程中文蛤肝胰腺弧菌载量变化的分析

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海洋科学 2019年第4期43卷 29-35页

作者：王瑞于佳佳王鸿霞刘保忠中国科学院海洋研究所实验海洋生物学重点实验室山东青岛266071 青岛海洋科学与技术试点国家实验室海洋生物学与生物技术功能实验室山东青岛266237 中国科学院大学北京100049

文蛤(Meretrix petechialis)是我国一种重要的海水养殖贝类,其养殖过程中病害导致的规模性死亡时有发生,已有的工作证实致病性弧菌是导致文蛤大规模死亡最为常见的病原。在本研究中,我们通过浸泡感染实验模拟了文蛤在自然条件下的弧菌... 详细信息

文蛤(Meretrix petechialis)是我国一种重要的海水养殖贝类,其养殖过程中病害导致的规模性死亡时有发生,已有的工作证实致病性弧菌是导致文蛤大规模死亡最为常见的病原。在本研究中,我们通过浸泡感染实验模拟了文蛤在自然条件下的弧菌胁迫环境,明确了攻毒水体中弧菌生长变化规律;攻毒过程中宿主载菌量分析显示,文蛤肝胰腺组织弧菌载量在攻毒后呈第1天急剧上升,第3天迅速下降的变化趋势,而且不同个体间载菌量差异较大;通过不同弧菌含量攻毒实验,发现在攻毒早期文蛤体内弧菌载量与水体环境的弧菌含量之间呈显著的正相关(Spearman’sρ=0.899,P=0.000),而在感染中后期不同攻毒强度组之间无显著差异,且呈现较低水平,为0~205CFU/mg,预示着宿主免疫系统和肝胰腺微生物群落可将致病菌的数量控制在一定的范围。上述研究为开展文蛤感染发病过程中弧菌载量和免疫抗性评价相关研究提供了参考。

关键词：文蛤弧菌肝胰腺载菌量

不同鸡种对鸡白痢沙门菌定植与免疫反应差异分析

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中国家禽 2014年第11期36卷 46-47页

作者：王洪志王伟马腾徐璐丁仁义陈静翟飞常国斌陈国宏扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009 苏州九门农业有限公司江苏苏州215128

试验对鸡白痢沙门菌在鸡肠道内定植及其对鸡免疫性能的影响进行探讨。选取狼山鸡、罗斯鸡各40只,分为攻毒组、空白组,攻毒组口服灌注0.5mL鸡白痢沙门菌(107cfu/mL),观察攻毒鸡群的发病状况,并采集盲肠内容物和血液分别进行菌落数和免疫... 详细信息

试验对鸡白痢沙门菌在鸡肠道内定植及其对鸡免疫性能的影响进行探讨。选取狼山鸡、罗斯鸡各40只,分为攻毒组、空白组,攻毒组口服灌注0.5mL鸡白痢沙门菌(107cfu/mL),观察攻毒鸡群的发病状况,并采集盲肠内容物和血液分别进行菌落数和免疫指标的测定。结果发现,狼山鸡和罗斯鸡在肠道中的载菌量分别为4.94×107cfu/mL和5.18×107cfu/mL。免疫指标方面,狼山鸡中除IgM外,其余指标与空白组差异显著(P菌均易感,但狼山鸡免疫反应优于罗斯鸡。

关键词：鸡白痢沙门菌鸡种载菌量免疫性能