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以转录因子ap1为靶的decoy核酸体内外抗肿瘤研究

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生物化学与生物物理进展 2004年第1期31卷 27-31页

作者：王雪根叶青陈武领冯莹韦策刘晖欧阳平凯南京凯基生物科技发展有限公司南京210009 南京工业大学制药与生命科学学院南京210009

合成了双链寡聚核苷酸———decoy核酸 ,其与靶转录因子ap 1有高亲和性 ,可进入细胞作为decoy顺式元件 ,通过抑制特异的转录因子和调控区域的结合 ,调控基因转录而改变基因的表达 .在体内外抗肿瘤试验中 ,decoy核酸有显著抑制肿瘤细胞... 详细信息

合成了双链寡聚核苷酸———decoy核酸 ,其与靶转录因子ap 1有高亲和性 ,可进入细胞作为decoy顺式元件 ,通过抑制特异的转录因子和调控区域的结合 ,调控基因转录而改变基因的表达 .在体内外抗肿瘤试验中 ,decoy核酸有显著抑制肿瘤细胞增殖的作用。

关键词：转录因子ap-1 decoy核酸肿瘤转录调控

中华蜜蜂转录因子ap-1基因的克隆及特性分析

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昆虫学报 2018年第4期61卷 423-431页

作者：郗学鹏魏伟张卫星王红芳胥保华山东农业大学动物科技学院山东泰安271000

【目的】克隆获得中华蜜蜂apis cerana cerana转录因子ap-1(transcription factor ap-1)基因Acc ap-1序列,分析其在中华蜜蜂不同发育时期和组织中以及不同非生物应激条件下的表达差异,为该基因的功能研究提供参考。【方法】以中华蜜蜂... 详细信息

【目的】克隆获得中华蜜蜂apis cerana cerana转录因子ap-1(transcription factor ap-1)基因Acc ap-1序列,分析其在中华蜜蜂不同发育时期和组织中以及不同非生物应激条件下的表达差异,为该基因的功能研究提供参考。【方法】以中华蜜蜂全组织cDNA为模板,利用RT-PCR技术扩增克隆获得中华蜜蜂转录因子ap-1基因cDNA序列;利用生物信息学软件预测分析其编码蛋白的理化特性和结构特征;采用MEGA 5.2软件中的邻接法(neighbor-joining,NJ)构建中华蜜蜂转录因子ap-1与其他膜翅目昆虫同源ap-1蛋白系统发育树;通过实时定量PCR分析中华蜜蜂转录因子ap-1基因在不同发育时期(1-6日龄幼虫、预蛹、白眼蛹、红眼蛹、褐眼蛹、1日龄成年工蜂和15日龄成年工蜂)以及15日龄成年工蜂不同组织(头、肌肉、表皮、中肠、直肠和毒腺)中的mRNA表达情况;将15日龄成年工蜂分别置于极端温度(4℃,16℃和44℃)下,以及饲喂含有农药(0.01 mL/L百草枯)和重金属(1 mg/mL Cd Cl2)的蔗糖溶液条件下,分析目的基因mRNA的表达情况。【结果】克隆获得了中华蜜蜂转录因子ap-1基因Acc ap-1(GenBank登录号:MF994311)开放阅读框(ORF)的序列,其长度为813 bp,编码270个氨基酸,预测蛋白分子量为30.24 kD,理论等电点为8.31。保守结构域分析表明,在第7-137位氨基酸之间存在一个Jun超家族的保守结构域,在第195-255位氨基酸之间存在一个b ZIP_Jun超家族的保守结构域。氨基酸序列比对以及进化树结果显示,中华蜜蜂与西方蜜蜂apis mellifera的亲缘关系最近。荧光定量PCR结果显示,Acc ap-1在各发育时期表达量差异显著(Pap-1在测试的各组织中均有表达,在肌肉中的表达量最高(Pap-1表达量显著升高(P0.05);在饲喂含有百草枯的蔗糖溶液后,其表达量显著降低(Pap-1基因可能参与中华蜜蜂机体抵抗外界环境压力的过程。

关键词：中华蜜蜂转录因子ap-1 基因克隆基因功能胁迫反应

p53在二乙基亚硝胺诱导肝细胞转录因子ap-1活化中的作用

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解放军医学杂志 2010年第4期35卷 398-401,406页

作者：吕刚高璐郭献灵浦浩吕志强蒲永东吴孟超卫立辛解放军309医院(总参谋部总医院)普通外科北京100091 东方肝胆外科医院肿瘤免疫治疗中心上海200438

目的研究p53对二乙基亚硝胺(DEN)诱导肝细胞恶变过程的影响,探讨p53功能缺失与细胞恶变的关系。方法使用p53特异性抑制剂pifithrin-α(PFT-α)和(或)人p53小RNA干扰质粒sip53抑制L02细胞p53的转录活性。采用荧光素酶报告基因法检测不同... 详细信息

目的研究p53对二乙基亚硝胺(DEN)诱导肝细胞恶变过程的影响,探讨p53功能缺失与细胞恶变的关系。方法使用p53特异性抑制剂pifithrin-α(PFT-α)和(或)人p53小RNA干扰质粒sip53抑制L02细胞p53的转录活性。采用荧光素酶报告基因法检测不同时间点、不同浓度DEN对p53功能正常和缺失的L02细胞ap-1转录激活活性的影响,检测不同DEN处理时间对p53转录激活活性的影响及PFT-α对ap-1转录激活活性的影响。转录激活活性用相对荧光强度表示。结果应用PFT-α或转染sip53质粒24h后,p53的转录活性明显下降。单纯DEN处理后ap-1的相对荧光强度轻度上调,而DEN+PFT-α和DEN+sip53处理的细胞内ap-1相对荧光强度与单纯DEN处理组比较均有上调,呈现时间和浓度双重依赖性;在作用24h时点或DEN浓度为100ng/L时作用达高峰,随后回落。DEN处理后p53相对荧光强度明显上调,且存在时间依赖性,在24h达高峰,随后回落。DEN+PFT-α处理的细胞p53相对荧光强度在各时间点的变化不明显,始终保持在较低水平。以PFT-α抑制p53功能后,L02细胞内ap-1的相对荧光强度上调,且此上调作用与PFT-α的作用时间相关。结论DEN刺激可上调L02细胞内p53的表达,后者可抑制细胞的恶性增殖。p53功能缺失可明显促进DEN诱导的L02细胞ap-1转录激活活性上调,提示p53是正常肝细胞抗恶变的重要保护机制。

关键词：癌,肝细胞二乙基亚硝胺基因,p53 转录因子ap-1

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转录因子ap-1在肝病中的作用

肝脏 2007年第5期12卷 418-419页

作者：冯洁臧国庆余永胜上海交通大学附属第六人民医院感染科 200233

激活蛋白ap-1(activator protein-1)是一种核转录因子,它与人巯金属蛋白基因的顺式调控元件结合.转录因子ap-1复合物由c-jun,c-fos两个亚单位组成,通过亮氨酸拉链与DNA结合,其结合位点称为TRE即TPA(12-o-tetradecanoyl-phrbol-13-aceta... 详细信息

关键词：转录因子ap-1 ap-1复合物肝病顺式调控元件核转录因子 DNA结合亮氨酸拉链激活蛋白

F10基因对转录因子NF-κB、ap1活性的影响

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中国病理生理杂志 2008年第5期24卷 901-904页

作者：曹晓敏庞战军全松邢福祺南方医科大学南方医院妇产科广东广州510515

目的:研究F10基因对转录因子NF-κB、ap1活性的影响。方法:质脂体共转染F10基因和报道质粒NF-κB-Luc、ap1-Luc,通过测定荧光素酶的活性以确定F10基因对NF-κB和ap1转录活性的影响;提取各实验组不同时点细胞核蛋白,用电泳迁移率改变实验... 详细信息

目的:研究F10基因对转录因子NF-κB、ap1活性的影响。方法:质脂体共转染F10基因和报道质粒NF-κB-Luc、ap1-Luc,通过测定荧光素酶的活性以确定F10基因对NF-κB和ap1转录活性的影响;提取各实验组不同时点细胞核蛋白,用电泳迁移率改变实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测ap1、NF-κB和DNA的结合活性。结果:F10基因瞬间转染A549细胞48h NF-κB-Luc和ap1-Luc荧光素酶的活性较其对照组分别下降0.3和上升2倍、ap1和NF-κB与DNA的结合活性分别上升23%和下降49%。结论:F10基因上调ap1活性、下调NF-κB的活性。

关键词：葡萄胎基因 F10 NF-κB 转录因子ap-1

Hint1基因抑制HepG2细胞ap-1转录因子活性的实验研究

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中华普通外科杂志 2009年第8期24卷 663-666页

作者：戈佳云王琳陆晓青李晓吴涛昆明医学院第二附属医院肝胆外科 650101

目的探索体外过表达Hint1基因对人肝肿瘤HepG2细胞ap-1转录因子活性的影响。方法分子克隆获得Hint1基因序列，构建pHA—Hint1重组融合基因表达载体。阳离子脂质体介导，pHA—Hint1转导人肝母细胞瘤HepG2细胞，RT—PCR和Western blot检测... 详细信息

目的探索体外过表达Hint1基因对人肝肿瘤HepG2细胞ap-1转录因子活性的影响。方法分子克隆获得Hint1基因序列，构建pHA—Hint1重组融合基因表达载体。阳离子脂质体介导，pHA—Hint1转导人肝母细胞瘤HepG2细胞，RT—PCR和Western blot检测HepG2细胞中外源HA—Hintl表达。pHA—Hint1质粒、启动子荧光素酶报告质粒ap-1／Luc及巨细胞病毒-β-半乳糖酶报告质粒（β—gel）共转导HepG2细胞。36h后测定荧光素酶活性及β—gel活性。结果重组质粒经EcoR I和BamH I双酶切，获约100bp特异条带，测序证实成功构建pHA—Hint1表达载体。pHA—Hint1及空载体pcDNA3／HA转导HepG2细胞，半定量RT-PCR结果显示pHA—Hint1组Hint1 mRNA表达高于空载体组（t=3．89，P〈0．05）；Western blot结果显示pHA-Hint1组HA标签蛋白表达高于空载体组（t=3．12，P〈0．05）。ap-1转录因子活性检测结果：pHA—Hint1终浓度为0μg/ml，0．5μg/ml，1．0μg/ml，1．5μg/ml，2．0μg/ml时，ap-1转录因子相对活性（10^6）为：5．12±0．25、4．24±0．74、3．43±0．31、2．62±0．48、2．09±0．21。随着pHA—Hint1浓度增加，荧光素酶活性呈明显下降，当pHA—Hint1浓度达到1．5μg及2．0μg时，差异有统计学意义（F=72．009，P〈0．05）。结论过表达Hint1基因可抑制HepG2细胞ap-1转录因子活性。

关键词：肝肿瘤转录因子ap-1 三组氨酸核苷结合蛋白1

骨桥蛋白和核转录因子在慢性环孢素A肾毒性中的作用

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第二军医大学学报 2014年第5期35卷 476-481页

作者：方梅荣金英顺金吉哲崔镇花金海峰郑海兰李锦姬姜玉姬金华李灿延边大学附属医院肾脏内科延吉133000

目的探讨炎性介质骨桥蛋白(OPN)的表达和核转录因子在慢性环孢素A(CsA)肾毒性中的作用。方法雄性Sprague-Dawley大鼠喂食低盐(0.05%钠盐)饲料下分为两组,正常对照组给予皮下注射橄榄油(1 mL·kg-1·d-1);毒性组给予皮下注射CsA(15 mg·k... 详细信息

目的探讨炎性介质骨桥蛋白(OPN)的表达和核转录因子在慢性环孢素A(CsA)肾毒性中的作用。方法雄性Sprague-Dawley大鼠喂食低盐(0.05%钠盐)饲料下分为两组,正常对照组给予皮下注射橄榄油(1 mL·kg-1·d-1);毒性组给予皮下注射CsA(15 mg·kg-1·d-1)4周。通过观察炎性细胞浸润(ED-1)和肾小管间质纤维化,比较两组大鼠的肾小管间质损伤程度;采用RNA印迹、免疫组织化学染色方法检测OPN在mRNA和蛋白水平的表达;用凝胶电泳迁移率实验(EMSA)分析法和免疫印迹法测定核转录因子(NF-κB和ap-1)的结合活性和IκB蛋白的表达。结果毒性组大鼠表现为肾小管间质带状纤维化[(38.9±3.3)%/5 mm2vs(0±0)%/5 mm2,P1]和大量ED-1阳性细胞浸润[(89±9)vs(7±2),P1]。与对照组相比,毒性组大鼠OPN mRNA和蛋白的表达增加[(729±37)%vs(103±4)%,P1],分布于肾小管上皮细胞,其主要位于肾小管间质损伤部位;毒性组核转录因子NF-κB[(218±19)%vs(116±15)%,P1]和ap-1[(735±225)%vs(101±4)%,P1]结合活性增加,而IκB蛋白的表达减少[(9±7)%vs(105±7)%,P1]。直线相关分析示OPN mRNA的表达与肾小管间质纤维化程度(r=0.959,P1)和核转录因子的结合活性呈正相相关(NF-κB:r=0.773,P1;ap-1:r=0.619,P=0.01)。结论炎性介质OPN和核转录因子参与了慢性CsA肾毒性肾小管间质的损伤。

关键词：慢性环孢素A肾毒性骨桥蛋白 NF—KB 转录因子ap-1

白藜芦醇对U937细胞基质金属蛋白酶-9转录的抑制作用(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2003年第11期24卷 105-109+114页

作者：李怡棠沈放刘柏合程桂芳中国医学科学院协和医科大学药物研究所药理室中国医学科学院协和医科大学药物研究所药理室北京 100050 中国

目的:观察白藜芦醇对佛波酯诱导的U937细胞中基质金属蛋白酶-9活性的影响,并从蛋白、mRNA及核转录因子激活蛋白-1(ap-1)水平对其影响进行分析。方法:酶谱法测定U937细胞培养上清中MMP-9的活性;Western blot法考察MMP-9蛋白的生成;RT-PC... 详细信息

目的:观察白藜芦醇对佛波酯诱导的U937细胞中基质金属蛋白酶-9活性的影响,并从蛋白、mRNA及核转录因子激活蛋白-1(ap-1)水平对其影响进行分析。方法:酶谱法测定U937细胞培养上清中MMP-9的活性;Western blot法考察MMP-9蛋白的生成;RT-PCR法检测MMP-9 mRNA的表达;电泳迁移率变动分析法(EMSA)研究核转录因子SP-1的活性。结果:PMA 10nmol/L 可显著诱导无血清培养的U937细胞中MMP-9活性(Pap-1的活化。结论:白藜芦醇可有效地抑制PMA诱导的U937细胞中MMP-9的活性,其作用可能是通过抑制PMA诱导的U937细胞核转录因子ap-1活化,进而降低MMP-9 mRNA表达,减少MMP-9蛋白生成而实现的。

关键词：白藜芦醇基质金属蛋白酶佛波醇酯类 U937细胞转录因子ap-1

雷公藤内酯醇抑制血管内皮细胞生长因子的表达与合成

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中华医学杂志 2001年第18期81卷 1106-1109页

作者：胡可斌刘志红刘栋黎磊石南京大学医学院临床学院南京军区南京总医院解放军肾脏病研究所 210002

目的　探讨雷公藤内酯醇对血管内皮细胞生长因子 (VEGF)mRNA表达及VEGF合成与分泌的影响 ,进一步探讨雷公藤内酯醇降低肾小球肾炎患者尿蛋白的作用机制。方法　以人内皮细胞系ECV 30 4为研究对象 ,利用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)、... 详细信息

目的　探讨雷公藤内酯醇对血管内皮细胞生长因子 (VEGF)mRNA表达及VEGF合成与分泌的影响 ,进一步探讨雷公藤内酯醇降低肾小球肾炎患者尿蛋白的作用机制。方法　以人内皮细胞系ECV 30 4为研究对象 ,利用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)、流式细胞仪、酶联免疫吸附法(ELISA)检测不同剂量雷公藤内酯醇对佛波脂 (PMA)诱导的内皮细胞VEGFmRNA表达及VEGF合成与分泌的影响 ,并采用RT PCR检测雷公藤内酯醇对内皮细胞c jun/c fosmRNA表达的影响。结果雷公藤内酯醇可以抑制PMA诱导的内皮细胞VEGFmRNA表达及VEGF合成与分泌 ,并呈剂量依赖性。同样 ,雷公藤内酯醇剂量依赖性抑制PMA诱导的内皮细胞c jun/c fosmRNA的表达。结论　雷公藤内酯醇抑制内皮细胞VEGFmRNA表达及VEGF合成与分泌可能是其雷公藤内酯醇降低肾小球肾炎患者尿蛋白的作用机制之一。雷公藤内酯醇可能通过影响转录因子ap

关键词：雷公藤内酯醇内皮生长因子转录因子ap-1 表达合成肾小球肾炎