Hint1基因抑制HepG2细胞AP-1转录因子活性的实验研究

作     者：戈佳云 王琳 陆晓青 李晓 吴涛 GE Jia-yun;WANG Lin;LU Xiao-qing;LI Xiao;WU Tao

作者机构：昆明医学院第二附属医院肝胆外科650101 

出 版 物：《中华普通外科杂志》 (Chinese Journal of General Surgery)

年 卷 期：2009年第24卷第8期

页      面：663-666页

学科分类：1002[医学-临床医学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目（30660184） 云南省自然科学基金资助项目（2006C0057Q） 云南省中青年学术技术带头人后备人才基金资助项目（2008PYD18） 

主　　题：肝肿瘤 转录因子AP-1 三组氨酸核苷结合蛋白1 

摘      要：目的探索体外过表达Hint1基因对人肝肿瘤HepG2细胞AP-1转录因子活性的影响。方法分子克隆获得Hint1基因序列，构建pHA—Hint1重组融合基因表达载体。阳离子脂质体介导，pHA—Hint1转导人肝母细胞瘤HepG2细胞，RT—PCR和Western blot检测HepG2细胞中外源HA—Hintl表达。pHA—Hint1质粒、启动子荧光素酶报告质粒AP-1／Luc及巨细胞病毒-β-半乳糖酶报告质粒（β—gel）共转导HepG2细胞。36h后测定荧光素酶活性及β—gel活性。结果重组质粒经EcoR I和BamH I双酶切，获约100bp特异条带，测序证实成功构建pHA—Hint1表达载体。pHA—Hint1及空载体pcDNA3／HA转导HepG2细胞，半定量RT-PCR结果显示pHA—Hint1组Hint1 mRNA表达高于空载体组（t=3．89，P〈0．05）；Western blot结果显示pHA-Hint1组HA标签蛋白表达高于空载体组（t=3．12，P〈0．05）。AP-1转录因子活性检测结果：pHA—Hint1终浓度为0μg/ml，0．5μg/ml，1．0μg/ml，1．5μg/ml，2．0μg/ml时，AP-1转录因子相对活性（10^6）为：5．12±0．25、4．24±0．74、3．43±0．31、2．62±0．48、2．09±0．21。随着pHA—Hint1浓度增加，荧光素酶活性呈明显下降，当pHA—Hint1浓度达到1．5μg及2．0μg时，差异有统计学意义（F=72．009，P〈0．05）。结论过表达Hint1基因可抑制HepG2细胞AP-1转录因子活性。