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四君子汤提取物对人三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞生长的抑制作用

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四君子汤提取物对人三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞生长的抑制作用

作者：张待娣郑州大学

学位级别：硕士

研究背景及目的现今,乳腺癌是女性患者中最常见的癌症,是女性死于肿瘤的第二大主要的原因。乳腺癌是一种影响全世界许多妇女的疾病,在亚洲国家,在过去的几十年中乳腺癌的发病率一直在增加。在中国的大部分城市调查显示乳腺癌的发病率和... 详细信息

研究背景及目的现今,乳腺癌是女性患者中最常见的癌症,是女性死于肿瘤的第二大主要的原因。乳腺癌是一种影响全世界许多妇女的疾病,在亚洲国家,在过去的几十年中乳腺癌的发病率一直在增加。在中国的大部分城市调查显示乳腺癌的发病率和死亡率居第一位。三阴性乳腺癌(Triple-negative breast cancer,TNBC)是指雌激素受体(Estrogen receptor,ER)、孕激素受体(Progesterone receptor,PR)和人表皮生长因子受体 2(human epidermal growth factor receptor-2,HER-2)免疫组化标记均为阴性的乳腺癌,是乳腺癌中较为难治的特殊类型。与其他分型乳腺癌相比,TNBC恶性程度更高、侵袭性更强,治疗手段单一和缺乏特异性靶向药物是目前该病临床治疗的最大障碍。中医辅助治疗TNBC的重点在于益气健脾,而且,四君子汤是益气健脾的经典方剂,组成成分有人参、白术、茯苓和甘草。相关实验初步证明,四君子汤能显着改善乳腺癌的化疗和术后并发症,能显着改善乳腺癌患者的生活质量。然而,四君子汤对于肿瘤的作用机制尚不明确。因此,本研究通过提取四君子汤浓缩干粉,以乳腺癌细胞为模型,通过CCK-8检测细胞增殖实验、克隆形成实验、细胞划痕实验、Hoechst33342凋亡染色、流式细胞术和Western Blot技术。,来探究四君子汤提取物对于三阴性乳腺癌细胞生长作用的影响。方法1.提取四君子汤干粉,并通过检测甘草酸的含量进行质控。使用前过滤除菌。2.采用CCK-8实验检测不同浓度的四君子汤提取物对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-468的抑制率和增殖活力的影响。3.通过克隆形成实验检测不同浓度的四君子汤提取物对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-468细胞的集落形成能力的影响。4.应用细胞划痕实验检测不同浓度的四君子汤提取物对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-468迁移的影响。5.用Hoechst33342染色技术通过荧光显微镜观察四君子汤提取物对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-468凋亡的影响。6.应用流式细胞术检测四君子汤提取物对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-468凋亡和周期的影响。7.采用Western Blot技术检测三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞中STAT3蛋白表达水平。8.用SPSS 25.0软件中单因素方差分析各组数据的差异,实验数据采用(?)来表示,P子汤提取物能够抑制MDA-MB-468细胞的增殖,IC50为9.745 mg/mL。根据IC50选取后续实验中四君子汤提取物低、中、高浓度分别为2.5、5.0、10.0 mg/mL。采用CCK-8法检测不同时间各浓度四君子汤提取物对MDA-MB-468细胞增殖的影响。结果发现,四君子汤提取物对MDA-MB-468细胞增殖抑制作用具有时间和浓度依赖性。2.与对照组比较,四君子汤提取物作用于MDA-MB-468细胞后,细胞克隆大小和数量明显降低,四君子汤提取物高剂量组细胞几乎不能形成肉眼可见的克隆。3.与对照组比较,在划痕后48 h,四君子汤提取物5、10 mg/mL组细胞划痕愈合能力明显减弱(P子汤提取物有抑制MDA-MB-468细胞迁移的作用,且呈浓度依赖性。4.Hoechst 33342染色结果显示四君子汤提取物各浓度组细胞凋亡形态比较明显。5.流式细胞仪凋亡检测结果表明,四君子汤提取物作用后,MDA-MB-468细胞早期凋亡率逐渐增加,与对照组比较差异显著。并且细胞总凋亡率逐渐上升,呈浓度依赖性。6.流式细胞仪周期检测发现,四君子汤提取物5、10 mg/mL组G2期细胞比对照组明显减少,且具有浓度依赖性(P子汤提取物5、10 mg/mL组蛋白表达明显降低。结论1.四君子汤提取物能够抑制三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-468的增殖。2.四君子汤提取物能够促进三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-468凋亡,使G2期细胞减少。3.四君子汤提取物对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-468的生长抑制作用可能与STAT3有关。

关键词：四君子汤三阴性乳腺癌增殖凋亡迁移细胞周期转录信号转导子与激活子3

高脂血清对人主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响及其机制

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山东医药 2016年第47期56卷 61-63页

作者：刘晴汤潜王莎莎韩彦弢王春波青岛大学医学部药学院药理学系山东青岛266000 青岛大学附属医院中心实验室青岛大学药学院

目的观察高脂血清对人主动脉血管平滑肌细胞(HASMC)增殖的影响,并探讨其机制。方法取对数生长期HASMC细胞分为实验组和和对照组,实验组包括实验1、2、3组,另设空白对照组。对照组常规培养;实验1、2、3组分别加入10%、15%、20%浓度的高... 详细信息

目的观察高脂血清对人主动脉血管平滑肌细胞(HASMC)增殖的影响,并探讨其机制。方法取对数生长期HASMC细胞分为实验组和和对照组,实验组包括实验1、2、3组,另设空白对照组。对照组常规培养;实验1、2、3组分别加入10%、15%、20%浓度的高脂血清培养;空白对照组仅加培养基无细胞。继续培养6、12、24、48 h,用CCK-8法测算实验组HASMC细胞增殖率;培养24 h时采用实时荧光定量PCR法检测各组HASMC中GRIM-19和p-STAT3 mRNA,采用Western blotting法检测GRIM-19和p-STAT3蛋白。结果相同时间点细胞增殖率实验3组高于实验2组,实验2组高于实验1组,P均3组低于实验2组,实验2组低于实验1组,P均3 mRNA和蛋白实验3组高于实验2组,实验2组高于实验1组,P均3表达有关。

关键词：人主动脉血管平滑肌细胞细胞增殖维甲酸干扰素诱导凋亡相关基因转录信号转导子与激活子3

Stat3及其靶基因产物与结直肠癌恶性程度关系的研究

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癌症 2003年第11期22卷 1135-1139页

作者：马向涛王杉叶颖江社如昱崔志荣北京大学人民医院外科外科肿瘤研究室北京100044

背景与目的:转录信号转导子与激活子3(signal transducers and activatorsof transcription 3,Stat3)通路受细胞因子与生长因子的刺激而活化,参与调节细胞的增殖、分化与凋亡。Stat3因可以介导细胞的恶性转化而被确认为是癌基因。本研... 详细信息

背景与目的:转录信号转导子与激活子3(signal transducers and activatorsof transcription 3,Stat3)通路受细胞因子与生长因子的刺激而活化,参与调节细胞的增殖、分化与凋亡。Stat3因可以介导细胞的恶性转化而被确认为是癌基因。本研究分析Stat3及其靶基因产物cyclin D1与Bcl-x_L在结直肠癌组织与细胞中的表达情况,探讨Stat3及其靶基因产物在结直肠癌发病机制中的作用。方法:用Western blot检测45例结直肠癌组织、癌旁肠粘膜以及结肠癌细胞系SW480和HCT116中Stat3(p-stat3)及其靶基因产物cyclin D1和Bcl一x_L蛋白表达,用免疫组织化学染色进行细胞内定位,同时对结直肠癌组织中p-Stat3、cyclin D1及Bcl-x_L表达情况与不同临床病理特征进行统计学分析。结果:结直肠癌组织中p-Stat3、cyclin D1及Bcl-x_L蛋白表达率分别为57.8％、64.4％及68.9％,癌旁肠粘膜表达率分别为42.2％、35.6％及31.1％;其蛋白表达水平(A值)分别为114263±53 598、58 321±24 872、71 032±43 425;癌旁肠粘膜分别为55 971±28 762、22 563±11 160、37 281±14 622(P3表达水平与结直肠癌临床分期及淋巴结转移有关(P=0.026,0.018),cyclin D1与淋巴结转移有关(P=0.041)。p-Stat3与cyclin D1在结直肠癌组织中表达情况呈?

关键词： Stat3 靶基因产物结肠癌直肠癌恶性程度转录信号转导子与激活子3

β-catenin及STAT3基因在消化系统肿瘤中的作用及意义

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胃肠病学和肝病学杂志 2011年第10期20卷 951-954页

作者：黄平许军哈尔滨医科大学附属第二医院消化内科黑龙江哈尔滨150086

消化系统肿瘤的发生、发展是一个多因素、多突变积累的过程,其发病机制尚不十分清楚,研究与之相关蛋白质的过度表达或异常激活是目前研究的热点。以β-catenin为中心的Wnt信号通路和STAT3信号通路均与消化系统肿瘤密切相关,并且在许多... 详细信息

消化系统肿瘤的发生、发展是一个多因素、多突变积累的过程,其发病机制尚不十分清楚,研究与之相关蛋白质的过度表达或异常激活是目前研究的热点。以β-catenin为中心的Wnt信号通路和STAT3信号通路均与消化系统肿瘤密切相关,并且在许多肿瘤的致癌过程中表现出相关性,是目前肿瘤信号传导通路研究的热点。随着对肿瘤发病机制研究的不断深入,人们已逐渐认识到信号传导通路中某些关键基因相互作用的重要性。鉴于此,本文论述了β-catenin和STAT3基因在消化系统肿瘤中的作用及二者在致癌过程中的相互作用。

关键词： β-连环素转录信号转导子与激活子3 消化系统肿瘤信号通路

Stat3及Bcl-2在口腔黏膜癌前病变癌变中表达的相关性

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口腔医学 2010年第11期30卷 667-669页

作者：杨静吴国英汤根兄陆乐南京医科大学口腔医学研究所南京医科大学附属口腔医院牙体牙髓黏膜科南京210029 南京市儿童医院口腔科南京210029

目的研究转录信号转导子与激活子3(Signal transducers and activators of transcription3,Stat3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2)在口腔黏膜癌前病变癌变过程中各阶段的表达及关系。方法用免疫组织化学SABC法检测9例口腔正常黏膜、8例上皮单纯增生、22例上皮异常增生和19例口腔黏膜鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)组织中Stat3和Bcl-2的表达,并用自动图像分析仪定量分析Stat3和Bcl-2蛋白的相对含量。结果随着口腔黏膜上皮从正常组织、单纯增生、异常增生发展到OSCC,Stat3和Bcl-2的阳性细胞面积指数值逐渐上升,OSCC时达到高峰,且Stat3和Bcl-2的表达呈线性正相关。结论 Stat3和Bcl-2均参与了口腔黏膜癌前病变癌变的发生发展过程。

关键词：癌前病变口腔鳞状细胞癌转录信号转导子与激活子3 B细胞淋巴瘤/白血病-2 免疫组织化学

针对STAT3的siRNA抑制HepG2细胞增殖和p44/42MAPK蛋白的表达

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实用肝脏病杂志 2010年第6期13卷 401-403页

作者：王新红邢慧陈晶范玉晶刘丹刘红霞吕志武哈尔滨医科大学附属第二医院消化内科哈尔滨市150086

目的研究STAT3信号传导通路对HepG2细胞p44/42MAPK蛋白表达和细胞生长的影响。方法将针对STAT3的siRNA转染入HepG2细胞以沉默STAT3基因的表达,采用MTT法检测细胞生长,采用Western blot法检测STAT3和p44/42MAPK蛋白的表达。结果对照组和l... 详细信息

目的研究STAT3信号传导通路对HepG2细胞p44/42MAPK蛋白表达和细胞生长的影响。方法将针对STAT3的siRNA转染入HepG2细胞以沉默STAT3基因的表达,采用MTT法检测细胞生长,采用Western blot法检测STAT3和p44/42MAPK蛋白的表达。结果对照组和lipofectamineTM2000处理组细胞生长无明显差异(q=0.97,P>0.05),而siRNA处理组细胞生长被明显抑制(q=9.36,P33.2%、39.6%4、3.1%和33.9%s,iRNA在96h后抑制作用减弱,细胞开始重新繁殖;转染细胞72h和96h后,可见STAT3蛋白表达均被抑制(t=14.12,P3.99,P>0.05),而p-p44/42MAPK蛋白表达增加(t=16.30,P3信号传导通路可以影响细胞生长及p44/42MAPK蛋白质的磷酸化,而p-p44/42MAPK的表达增加可能代偿了沉默STAT3引起的细胞生长抑制,使细胞重新繁殖。

关键词： HepG2细胞 RNA干扰转录信号转导子与激活子3 P44/42丝裂素活化蛋白激酶信号传导通路

构建重组质粒检测癌基因STAT3诱导表达活性

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中国公共卫生管理 2007年第1期23卷 65-66页

作者：孟令战刘永占河北省保定市卫生监督所 071000 河北省卫生监督局

目的建立基于报告基因的检测方法,检测环境因子饮用水水源有机提取物对癌基因Stat3的诱导表达活性,发现异常活化癌基因的环境致癌因子,为进一步揭示肿瘤发生发展与环境因素的相互作用关系奠定基础。方法将Stat3特异结合序列CRP-APRE克... 详细信息

目的建立基于报告基因的检测方法,检测环境因子饮用水水源有机提取物对癌基因Stat3的诱导表达活性,发现异常活化癌基因的环境致癌因子,为进一步揭示肿瘤发生发展与环境因素的相互作用关系奠定基础。方法将Stat3特异结合序列CRP-APRE克隆到诱导表达型载体pGL2转录启始位点上游,选择氯霉素乙酰转移酶基因(CAT)作为报告基因克隆在转录启始位点下游,构建重组质粒pTKS3-CAT。转染入表达IL-6受体的人肝癌细菌HepG2中,筛选报告基因CAT表达受IL-6诱导的阳性克隆,同时用无关药物检测模型的特异性。用建立的检测方法——ELISA法检测饮用水源有机提取物对CAT表达活性的影响,检测环境因子对Stat3的诱导表达活性。结果CAT的表达受IL-6诱导并呈现剂量依赖关系,EC50等于0.127nmol.L-1,而无关药物rhEPO不能诱导CAT表达。结论在96孔板上用ELISA法测定CAT基因的诱导表达水平,可在基因水平检测癌基因Stat3的诱导表达活性。

关键词：转录信号转导子与激活子3 癌基因白介素-6 报告基因环境因子