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猪流感病毒的基因组结构及跨种属传播

中国兽药杂志 2009年第7期43卷 26-29页

作者：刘业兵张磊张志刚中国兽医药品监察所北京100081

猪是禽和哺乳动物流感病毒的中间宿主和产生重组病毒的混合器,猪流感病毒基因重排现象非常普遍。从猪流感病毒的形态结构、抗原性、基因组与主要编码蛋白、基因重排与跨种属传播等方面,对其研究情况进行了综述,以期为进一步了解猪流感... 详细信息

猪是禽和哺乳动物流感病毒的中间宿主和产生重组病毒的混合器,猪流感病毒基因重排现象非常普遍。从猪流感病毒的形态结构、抗原性、基因组与主要编码蛋白、基因重排与跨种属传播等方面,对其研究情况进行了综述,以期为进一步了解猪流感病毒基因重排及种间传播机制,更好的防控流感疫情提供参考。

关键词：猪流感病毒基因重排跨种属传播

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新近发现的冠状病毒研究进展

病毒学报 2013年第1期29卷 65-70页

作者：耿合员谭文杰中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒病应急技术中心北京102206

冠状病毒是自然界中广泛存在的一大类家族,人和多种动物易感。人冠状病毒感染后,通常引起普通感冒症状,严重者能造成死亡。冠状病毒广泛的宿主性以及自身基因组的结构特征使其在进化过程中极易发生基因重组,呈现遗传多样性;新亚型及新... 详细信息

冠状病毒是自然界中广泛存在的一大类家族,人和多种动物易感。人冠状病毒感染后,通常引起普通感冒症状,严重者能造成死亡。冠状病毒广泛的宿主性以及自身基因组的结构特征使其在进化过程中极易发生基因重组,呈现遗传多样性;新亚型及新的冠状病毒在此过程中不断出现。本文针对新近出现的冠状病毒,尤其是SARS样冠状病毒(SARS-like-CoVs)以及2012年发现的新型人冠状病毒EMC(HCoV-EMC)的基因组结构特征及冠状病毒跨种属传播机制的最新研究进展作简要论述。

关键词： SARS样冠状病毒人冠状病毒EMC 基因组结构跨种属传播

鸭源性H6N6亚型禽流感病毒感染小鼠及在人肺组织复制的研究

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鸭源性H6N6亚型禽流感病毒感染小鼠及在人肺组织复制的研究

作者：李程颐广西医科大学

学位级别：硕士

目的:H6N6亚型禽流感病毒在野生鸟类和禽类动物中广泛流行,病毒持续进化演变,其宿主范围逐渐由禽类动物扩大至哺乳动物,部分病毒甚至具有识别和结合人型SAα-2,6Gal受体的能力。令人担忧的是,一些暴露人群的血清中H6亚型禽流感病毒特异... 详细信息

目的:H6N6亚型禽流感病毒在野生鸟类和禽类动物中广泛流行,病毒持续进化演变,其宿主范围逐渐由禽类动物扩大至哺乳动物,部分病毒甚至具有识别和结合人型SAα-2,6Gal受体的能力。令人担忧的是,一些暴露人群的血清中H6亚型禽流感病毒特异性抗体检测呈阳性。因此,H6N6亚型禽流感病毒具有跨种属屏障感染哺乳动物甚至感染人的潜能。研究证实,陆禽动物鹌鹑、鸡等是禽流感病毒跨种属传播至人的中间宿主,水禽家鸭有助于禽流感病毒传播至陆禽动物,但鸭源性的H6N6亚型禽流感病毒是否能跨种属屏障直接传播至哺乳动物和人还尚未清楚。本研究应用分离自水禽鸭源性的H6N6亚型禽流感病毒,应用基因测序和进化分析,明确H6N6亚型禽流感病毒起源和各基因片段主要关键氨基酸位点的变化;然后应用病毒接种小鼠、人呼吸道组织,观察病毒对小鼠的致病性及在人呼吸道组织的复制能力,初步探索来自水禽鸭源性的H6N6亚型禽流感病毒是否具有感染哺乳动物小鼠及人的潜能,为进一步探究H6N6亚型禽流感病毒的跨种属传播奠定基础。方法:1.禽流感病毒的扩增及HA效价、EID、TCID测定:将3株水禽鸭源性H6N6亚型禽流感病毒A/DK/KM/1135/2019(简称KM1135)、A/DK/GY/1774/2019(简称GY1774)、A/DK/GY/6952/2019(简称GY6952)在鸡胚中进行扩增,收获鸡胚尿囊液,对尿囊液进行HA效价、EID、TCID测定,以扩增本研究所需要的病毒量、明确接种小鼠和人呼吸道组织所使用的病毒浓度。2.基因测序和进化分析:提取病毒的RNA进行逆转录,PCR扩增c DNA后纯化扩增产物,采用Illumina公司的Solexa系统上机检测病毒全基因序列,Mega 7.0和Bioedit 7.0.9进行序列比较,分析H6N6亚型禽流感病毒各基因片段的变化。3.禽流感病毒体内感染BALB/c小鼠:通过滴鼻、滴眼的方式对小鼠进行病毒接种感染,感染后每天记录小鼠体重、体温、精神状态等。感染后3 d、5 d、7 d、14 d分别采集各组小鼠的咽拭子和血液。感染后3 d、5 d、7 d分别麻醉处死3只小鼠,处死后采集鼻甲、气管、肺组织,一半研磨匀浆后进行病毒的分离培养;另一半放入10%福尔马林中固定,用于HE染色及免疫组化染色。4.禽流感病毒在人肺组织的复制:收集病人的呼吸道手术切除标本,将标本切成小组织块后体外接种病毒。接种后12 h、24 h、36 h、48 h、72h分别收集组织培养液和2块组织块,一块组织块磨匀浆后进行病毒的分离培养;另一块放入10%福尔马林中固定,用于HE染色及免疫组化染色。结果:1.禽流感病毒扩增后的HA效价及EID、TCID检测结果:3株病毒扩增后,KM1135病毒株的HA效价、EID值、TCID值最高,病毒的感染能力和致病性最强;GY6952病毒株的HA效价、EID值、TCID值最低,病毒的感染能力和致病性最弱。2.基因测序和进化分析结果:3株病毒HA裂解位点序列均为PQIETR/GL,为单个碱性氨基酸裂解位点,符合低致病性禽流感病毒特征。3株病毒的HA除发生H156K突变以外,其余224、226、228、190、137等关键氨基酸位点均未发生突变,仍具有与禽型SAα-2,3Gal受体结合的特性。病毒NA、PB1、PB2、PA的多个关键氨基酸位点也未发生突变,病毒仍属于禽流感病毒的基因特点。3.禽流感病毒感染BALB/c小鼠实验结果:在小鼠体内感染实验中,3株病毒感染后小鼠未出现明显的症状,感染过程未出现小鼠死亡情况。KM1135和GY1774病毒株接种小鼠后,小鼠咽拭子标本、鼻甲、气管、肺组织研磨液标本病毒分离培养阳性,组织病理学检查显示小鼠鼻甲、气管、肺组织出现炎症反应,组织内流感病毒NP抗原检测阳性,以KM1135最为典型。GY6952病毒株接种小鼠后,肺组织研磨液病毒分离培养阳性,而咽拭子标本、鼻甲、气管组织研磨液标本病毒分离培养为阴性,组织病理学检查显示小鼠肺组织出现炎症反应而鼻甲、气管组织未见明显病理改变,在鼻甲、气管、肺组织内均未检测出流感病毒NP抗原。3株病毒感染后,小鼠血清标本中流感病毒特异性抗体为阳性,且抗体HI滴度随着感染后天数而增高。4.禽流感病毒在人肺组织的复制实验结果:在人呼吸道组织体外感染实验中,KM1135病毒株感染后的人支气管、肺组织培养液、研磨液标本病毒分离培养阳性,组织病理学检查显示人支气管、肺组织均出现炎症反应,肺泡组织内流感病毒NP抗原检测阳性,而支气管组织内流感病毒NP抗原检测阴性。GY1774病毒株感染后的人支气管、肺组织培养液、研磨液标本病毒分离培养阳性,组织病理学检查显示人支气管、肺组织出现炎症反应,支气管和肺泡组织内流感病毒NP抗原检测阳性。GY6952病毒株感染后的人支气管、肺组织培养液、研磨液标本病毒分离培养阳性;组织病理学检查显示人支气管、肺组织出现炎症反应,肺泡组织内流

关键词：禽流感病毒 H6N6亚型跨种属传播哺乳动物基因特征

猪流感病毒基因池中的新成员:新甲型H1N1流感病毒基因片段的存在及潜在威胁

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中国人兽共患病学报 2016年第9期32卷 832-837页

作者：高灵茜崔梦一樊晓晖广西医科大学微生物学教研室南宁530021

新甲型H1N1流感病毒(2009pandemic H1N1virus,pdm/09)于2009年在人群中暴发以后,迅速在全球范围内传播,引起了21世纪的第一次流感大流行。pdm/09是由人的流感病毒、禽流感和猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)经过重配后形成的病毒... 详细信息

新甲型H1N1流感病毒(2009pandemic H1N1virus,pdm/09)于2009年在人群中暴发以后,迅速在全球范围内传播,引起了21世纪的第一次流感大流行。pdm/09是由人的流感病毒、禽流感和猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)经过重配后形成的病毒,它的基因片段已经进入了猪流感病毒当中并开始产生新的变异毒株,这些新的变异流感毒株在欧亚大陆、北美大陆及中国南部的各个地区被不断报道和发现,这表明猪源性pdm/09在人间流行后可返传给猪,成为猪流感病毒基因池中的固有组成,获得与SIV重组形成新的重配病毒的能力,并可能仍然具有感染人类的潜能。因此,必须关注新型重配病毒的进化:包括其在猪群中的生长适应、以及适应性感染人的进化过程。不仅如此,还必须加强对猪群及人群流感病毒的检测,了解重配病毒在人和猪两个种群中的进化过程。

关键词：新甲型H1N1流感病毒猪流感病毒基因池基因重配病毒跨种属传播

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美发现朊病毒可跨种属传播

传染病网络动态 2001年第5期 3-3页

火鸡的流感病毒唾液酸受体分布特点及其在流感病毒生态系统中的位置和作用

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火鸡的流感病毒唾液酸受体分布特点及其在流感病毒生态系统中的位...

作者：冯安林广西医科大学

学位级别：硕士

背景和目的：周期性的流感疫情是可以预测的,相比之下,如果大流行出现一种新型流感病毒亚型,则整个人群对其具有很少或缺乏免疫力,是不可预测的事件。大部分新出现的流感病毒亚型都是由禽流感病毒突变而来,目前研究的热点是,流感病毒是... 详细信息

背景和目的：周期性的流感疫情是可以预测的,相比之下,如果大流行出现一种新型流感病毒亚型,则整个人群对其具有很少或缺乏免疫力,是不可预测的事件。大部分新出现的流感病毒亚型都是由禽流感病毒突变而来,目前研究的热点是,流感病毒是如何从其“自然基因库”的水禽类动物进化为具备跨种属障碍感染人。流感病毒外表面有两种糖蛋白,其中一种叫血凝素(Hemagglutinin,HA),它们有助于流感病毒与宿主细胞外表面的糖链特异性接触吸附、结合并进入细胞内的作用。大部分的禽流感病毒与唾液酸(Sialic Acid, SA) a2-3Gal受体结合,人流感病毒与SAa2-6Gal受体结合,这种差异直接导致了禽流感病毒很难跨种属传播到人群。甲型流感病毒易发生变异,特别是膜表面的HA抗原,流感病毒发生抗原变异主要有两种方式,一种是主要引起点突变的抗原漂移,驱使病毒发生抗原漂移的主要原因,是宿主对病毒表面抗原的免疫压力所导致的适应性突变;另一种方式主要是病毒一个或多个病毒基因片段RNA被置换的抗原转换,导致新重配病毒株的产生。基因重配学说认为流感病毒变异亚型大流行,是通过人和禽流感病毒基因重配而来。由于猪呼吸道上皮细胞表面同时存在禽类受体(SAa2-3Gal)和人流感病毒受体(SAa2-6Gal),因此,猪对禽类流感病毒和人流感病毒都具有一定的易感性,如果发生两种病毒同时感染猪的事件,那么禽流感病毒与人流感病毒在猪体内感染、复制的同时可能发生了基因重配,使禽流感病毒获得与人呼吸道SAα2-6Gal受体结合的能力。但是最近几年来,香港、东南亚等地陆续发生了多例禽流感病毒(包括HSN1,H9N2等亚型流感病毒)直接由禽类动物传染给人的事件,随后发现陆地禽类动物也同时具有两种流感病毒受体。火鸡是一类在欧美国家常见的陆地禽类动物,1998年后在北美多次从火鸡体内分离到禽流感病毒和猪流感病毒重组的病毒,提示火鸡可能是一种重要的流感病毒中间宿主,但到目前为止,对火鸡体内的唾液酸受体分布,尚未清楚.。本研究利用凝集素特异性结合SA受体的方法来确定火鸡体内SA受体的分布情况,并用禽流感病毒和人流感病毒结合实验来验证此结果,探讨火鸡在流感病毒生态中的位置及在新型流感病毒大爆发中的作用。方法：(1)采用亲和组化染色法,火鸡组织切片分别滴加生物素标记凝集素MAA-Ⅱ(特异性标记SAa2-3Gal受体)和SNA(特异性标记SAa2-6Gal受体),检测火鸡气管、支气管、次级支气管、副支气管以及直肠组织的SAa2-3Gal和SAa2-6Gal受体的表达。(2)利用与SAa2-3Gal受体结合的鸭源性禽流感病毒株(H9N1)和与SAa2-6Gal受体结合的人流感病毒株(H1N1),分别在鸡胚和MDCK通过接种传代法扩增病毒,纯化后与荧光素Alexa488结合。然后滴加标记了荧光素Alexa488的H9N1禽流感病毒和H1N1人流感病毒于火鸡气管、支气管、次级支气管、副支气管以及直肠的组织切片上,荧光显微镜下观察拍照并分析结果。结果：(1)火鸡呼吸道和消化道SAa2-3Gal的受体分布特点：禽类SAa2-3Gal受体主要分布在火鸡的气管、支气管、次级支气管和副支气管四个呼吸道解剖部位中的大部分区域,亲和组化分析呈强阳性分布,而在直肠内表达较少并呈弱阳性分布,SAa2-3Gal受体在上述各部位的分布差异有统计学意义。(2)火鸡呼吸道和消化道SAa2-6Gal受体分布特点：火鸡体内的SAα2-6Gal受体分布在呼吸道的气管、支气管和次级支气管大部分区域,亲和组化分析呈弱阳性分布,而在呼吸道的的终末端副支气管分布极少,在直肠呈极少量分布,SAα2-6Gal受体在上述各部位的分布差异有统计学意义。(3)SAα2-3Gal受体和SAα2-6Gal受体各解剖部位分布比较：禽类SAα2-3Gal受体在火鸡呼吸道的气管、支气管、次级支气管以及副支气管四个解剖部位中的分布明显高于人SAα2-6Gal受体,而在消化道的直肠组织中火鸡SAα2-6Gal受体与SAα2-3Gal受体分布无明显差异。(4)利用荧光素Alexa488标记的H9N1禽流感病毒以及H1N1人流感病毒与火鸡呼吸道及消化道结合特点：H9N1禽流感病毒与火鸡呼吸道的气管、支气管和次级支气管及副支气管的上皮细胞的大部分区域结合,而H1N1人流感病毒仅少量的与火鸡呼吸道的气管、支气管和次级支气管的上皮细胞结合。H9N1与H1N1流感病毒与火鸡的直肠组织上皮细胞都未见荧光结合。荧光素标记病毒结合实验结果基本与凝集素亲和组化所做出的火鸡呼吸道和消化道的SAα2-3Gal受体和SAα2-6Gal受体的分布特点相一致。结论：(1)火鸡呼吸道上皮细胞均有流感病毒SAα2-3Gal受体和SAα2-6Gal受体,以SAα2-3Gal受体为主。在气管、支气管、次级支气管及副支气管四个解剖部位,SAα2-3Gal受体均呈高密度分布,火鸡SAα2-6

关键词：甲型流感病毒跨种属传播唾液酸受体火鸡

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H7N9禽流感流行的潜在性

新乡医学院学报 2017年第9期34卷 790-793页

作者：徐鹏卫高丽云王寅彪吴卫东新乡医学院公共卫生学院河南新乡453003

自2016年10月以来,中国人感染H7N9禽流感病毒呈现出明显的上升趋势。人感染H7N9禽流感病毒后的临床表现主要为重度呼吸道疾病症状,并伴有较高的病死率。截至目前,病例监测及疫情分析发现,绝大多数患者曾接触过活禽或可能污染的环境,虽... 详细信息

自2016年10月以来,中国人感染H7N9禽流感病毒呈现出明显的上升趋势。人感染H7N9禽流感病毒后的临床表现主要为重度呼吸道疾病症状,并伴有较高的病死率。截至目前,病例监测及疫情分析发现,绝大多数患者曾接触过活禽或可能污染的环境,虽不排除有限的人传人可能性,但尚无证据表明H7N9出现了持续的人际间传播。H7N9能否引起下一轮的禽流感大流行,已然是国内外科研圈及民众舆论关注的热点之一。本文对影响H7N9禽流感病毒传播及流行的主要因素,如对人的致病性、人群对病毒的免疫状况以及病毒是否具备持续的人际间传播能力等方面的研究进展进行了综述。

关键词： H7N9 禽流感跨种属传播人际间传播流行的潜在性

华南地区新型H5N3流感病毒的起源和进化分析

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华南地区新型H5N3流感病毒的起源和进化分析

作者：段炼汕头大学

学位级别：硕士

背景与目的华南地区因为具备独特的气候、地理等生态环境而被称为“世界流感流行中心”。水禽类宿主因为含有所有流感病毒的亚型而被称为流感病毒的“自然基因储存库”。有研究表明,哺乳动物和人类中流行的流感病毒可能都来源于水禽... 详细信息

背景与目的华南地区因为具备独特的气候、地理等生态环境而被称为“世界流感流行中心”。水禽类宿主因为含有所有流感病毒的亚型而被称为流感病毒的“自然基因储存库”。有研究表明,哺乳动物和人类中流行的流感病毒可能都来源于水禽类。因此,对华南地区水禽类宿主开展流感病毒流行病学研究具有重要意义。70年代,shortridge对华南地区水禽类宿主开展的流感病毒流行病学研究表明,该地区水禽中流感病毒亚型以H3、H4、和H6为主,H5亚型则以H5N3为主。 96年至今,Goose/Guaragdong/1/96样(Gs/GD—like)病毒及其通过重配形成的多个基因型H5N1病毒在华南地区的水禽中流行,至2004年则逐渐演化为以Z基因型H5N1病毒占主导地位的局面。但是到目前,关于GS/GD/1/96病毒的起源问题仍未解决。地处欧洲的意大利流感病毒生态系统在某些方面与华南地区相类似。自97年以来, 意大利也多次爆发高致病性禽流感。流感病毒分子流行病学研究表明,引发这几次禽流感爆发的病毒可能由候鸟携带的病毒经跨种属传播演化而来或与其密切相关。 2002年以来,我们在华南地区的水禽中(主要为家鸭)陆续分离到H5N3病毒,其中香港的两株H5N3病毒直接从候鸟的粪便标本中分离到。目前在华南地区水禽中以H5N1亚型病毒占主导地位的大背景下,这些H5N3病毒的起源及进化是本课题研究的重点所在。我们希望从有关结果的分析中回答:①这些近期分离到的H5N3病毒与70年代病毒的关系,即目前的H5N3病毒是否是70年代病毒的直接延续?②近期分离的H5N3病毒与意大利病毒株在进化及起源上有何种相互联系,进而了解侯鸟对于流感病毒的跨种属传播及跨欧亚大陆的传播起了何种作用?③近期分离的H5N3病毒与华南地区水禽中的H5N1病毒或其它亚型的病毒之间是否存在基因间的相互交换?④近期分离的H5N3病毒今后进化趋势的预测,解释近期H5N3病毒的起源能否对解释GS/GD/1/96病毒的起源有所帮助?

关键词：甲型流感病毒 H5N3亚型侯鸟水禽跨种属传播