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超深低温处理的异体肌腱移植高频超声观察

中国超声医学杂志 2004年第6期20卷 72-73页

作者：张新唐林俊孔军苏骅解放军第401医院特检科全军手外科中心 266071山东省青岛市全军手外科中心

用超深低温(-196 ℃)处理活体异体肌腱移植的动物实验获得成功的基础上,对11例因外伤导致肌腱缺损患者,采用经超深低温处理的异体肌腱进行移植,于术后2～40 d超声观察修复术后肌腱愈合过程.

关键词：超深低温吻合口移植术超声观察异体肌腱回声反射声肌腱缺损声像图

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超深低温和复苏对犬脑的影响

第二军医大学学报 1999年第8期20卷 525-527页

作者：杨朋范江基尧刘刚石学银金焰林兆奋卢洪流蔡如珏袁国梁朱诚第二军医大学长征医院神经外科上海200433 第二军医大学长征医院麻醉科第二军医大学长征医院急救科

目的：研究超深低温对犬脑组织缺血的保护作用。方法：建立实验犬闭胸式体外循环，体内体外结合降温，并以海脉素置换行控制性放血，至红细胞比容降至５％左右。中心体温７～１０℃维持低流量体外循环９０ｍｉｎ。复温过程中回输自... 详细信息

目的：研究超深低温对犬脑组织缺血的保护作用。方法：建立实验犬闭胸式体外循环，体内体外结合降温，并以海脉素置换行控制性放血，至红细胞比容降至５％左右。中心体温７～１０℃维持低流量体外循环９０ｍｉｎ。复温过程中回输自体血并予复苏。结果：７只犬中１只因技术因素死于术中，其余６只复苏后神经功能均恢复，但在２～４ｈ后均死于肺功能不全。病理检查示：脑、肝脏、肾脏正常；心脏轻度缺血性改变；肺水肿、肺泡出血明显。结论：超深低温下犬脑、肝、肾可耐受缺血９０ｍｉｎ而无明确异常，但在复苏后维持肺功能困难。

关键词：超深低温脑缺血复苏犬

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恒河猴脑选择性超深低温断血流复苏模型的建立

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中华外科杂志 2005年第13期43卷 889-891页

作者：周杰冯忠堂高永军方绍龙付登礼江基尧徐蔚昆明医学院第二附属医院神经外科 650101 中国中医研究院望京医院外科

目的探讨猴脑选择性超深低温断血流复苏的可行性。方法4至10岁健康恒河猴10只,动物随机分为3组:4血管(双侧颈总动脉及椎动脉)阻断冷灌注组4只,2血管(双侧颈总动脉)阻断冷灌注组4只,等温灌注组2只。手术前后行头颅MRI检查,手术中监测生... 详细信息

目的探讨猴脑选择性超深低温断血流复苏的可行性。方法4至10岁健康恒河猴10只,动物随机分为3组:4血管(双侧颈总动脉及椎动脉)阻断冷灌注组4只,2血管(双侧颈总动脉)阻断冷灌注组4只,等温灌注组2只。手术前后行头颅MRI检查,手术中监测生命体征及血流动力学指标变化,术后行神经功能缺失评分。结果在10只实验猴中,2血管阻断冷灌注组4只恒河猴术中、术后血流动力学稳定,灌注60min后安全复苏并长期存活,术后头颅MRI检查未见异常,术后神经功能评分无异常;等温灌注组2只恒河猴及4血管阻断冷灌注组4只恒河猴于灌注60min后均未能安全复苏,全部死亡。结论阻断双侧颈总动脉行猴脑选择性超深低温60min后可安全复苏。

关键词：超深低温断血流复苏模型猴脑头颅MRI检查神经功能缺失评分血流动力学颈总动脉神经功能评分血管阻断手术中监测恒河猴冷灌注手术前后指标变化生命体征长期存活温灌注术后椎动脉双侧安全异常

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超深低温条件下较长冷冻时间对异体神经移植免疫排斥的影响

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超深低温条件下较长冷冻时间对异体神经移植免疫排斥的影响

作者：张勇泸州医学院

学位级别：硕士

目的：观察超深低温（一196℃）条件下较长冷冻时间对异体神经移植再生的影响，寻找较长且相对有效的保存时限，使异体神经移植免疫排斥反应最小，再生效果最好，并逐步建立神经组织库模型，使之更好的服务于基础研究和临床治疗。方法... 详细信息

目的：观察超深低温（一196℃）条件下较长冷冻时间对异体神经移植再生的影响，寻找较长且相对有效的保存时限，使异体神经移植免疫排斥反应最小，再生效果最好，并逐步建立神经组织库模型，使之更好的服务于基础研究和临床治疗。方法：分组，将120只雌性Wistar大鼠(体重280±30g)，按随机原则分为取材组30只，其余90只每组15只分为对照组A组（新鲜自体神经移植组）、B组（新鲜异体神经移植组）和实验组：C组（取材组神经超深低温冷冻保存3周后移植组）、D组（取材组神经超深低温冷冻保存6周后移植组）、E组（取材组神经超深低温冷冻保存9周后移植组）、F组（取材组神经超深低温冷冻保存12周后移植组）。取材，将水合氯醛和蒸馏水按质量分数5:95配置为95%水合氯醛，甘油和蒸馏水按体积分数1:1配置为50%甘油。用95%水合氯醛按0.7ml／100g腹腔注射将取材组Wistar大鼠麻醉，固定于动物实验台上并备皮，于股后外侧行长约1.5cm的横行切口暴露双侧坐骨神经切取坐骨神经干长约1.0cm，总计60根。将取下的坐骨神经干分4组每组15根放于50%甘油的EP管中，而后置于超深低温（-l96℃）的液氮瓶中，根据不同冷冻时间要求进行保存。神经移植，A组:将坐骨神经取下后立即原位移植于自体;B组:将坐骨神经取下后立即两两交叉移植;C组：取材组神经在超深低温条件下冷冻3周后在常温下用生理盐水复温后进行异体移植;D组：取材组神经在超深低温条件下冷冻6周后在常温下用生理盐水复温后进行异体移植;E组:取材组神经在超深低温条件下冷冻9周后在常温下用生理盐水复温后进行异体移植;F组：取材组神经在超深低温条件下冷冻12周后在常温下用生理盐水复温后进行异体移植。C、D、E、F组的异体神经移植组按随机原则进行操作，神经断端按束膜缝合法用11-0尼龙线端端缝合4-6针，所有组别术后均不用药物处理。指标观察，术后间隔一定时间观察各组别大鼠术侧部肢体的肿胀、运动、足部糜烂、移植段神经颜色、血循及周围组织和它黏连情况;于术后3、6、9周分别从各组取5只大鼠做神经电生理检测，同时于术后第9周做光镜、电镜观察。结果：从大体观察上看，A、C、D组术后肿胀糜烂较轻，神经修复速度快，功能恢复好，其中A组效果最优，C、D组间差别不大且和A组逼近，E、F组稍次， B组最差。移植9周后，电生理结果显示：A、C、D组动作电位峰值、神经传导速度两指标非常接近，A与C、A与D、C与D之间P值均大于0.05，无显著差异;光镜、电镜结果显示C、D组神经已完成基本修复且情况近似，整体效果趋于A组，B组最次。结论：异体神经超深低温冷冻保存3周、6周后的移植再生效果近似，且逼近于新鲜自体神经修复效果。

关键词：超深低温较长保存时间异体神经移植影响

猴脑选择性超深低温断血流复苏对bFGF、VEGF表达水平影响的实验研究

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猴脑选择性超深低温断血流复苏对bFGF、VEGF表达水平影响的实验研...

作者：卫昕伟昆明医学院

学位级别：硕士

【目的】观察猴脑常温缺血10分钟后选择性超深低温断血流复苏后bFGF、VEGF表达变化，探索超深低温脑保护的可能机制。【方法】健康恒河猴9只，随机分为常温组(2只)和低温组(7只)。分离双侧颈内、外动静脉，右侧颈内静脉近心端插管监测... 详细信息

【目的】观察猴脑常温缺血10分钟后选择性超深低温断血流复苏后bFGF、VEGF表达变化，探索超深低温脑保护的可能机制。【方法】健康恒河猴9只，随机分为常温组(2只)和低温组(7只)。分离双侧颈内、外动静脉，右侧颈内静脉近心端插管监测中心静脉压。右侧颈内动脉远心端插管连接冷灌注系统，右侧颈内静脉远心端及双侧股静脉近心端插管连接超滤复温装置，建立脑局部体外循环。全身肝素化，夹闭双侧颈外动静脉、左侧颈内动静脉10分钟，再向右侧颈内动脉内注入4℃林格氏液，维持脑温≤16℃约60分钟。停止灌注，恢复上述血管血流，使脑自然复温。手术前后行头颅MRI检查，术后做神经功能缺失评分。等温组实验猴灌注或复苏死亡后立即开颅取脑，低温组实验猴饲养到术后12周处死开颅取脑，4％多聚甲醛固定、脱水、石蜡包埋、切片，用bFGF、VEGF抗体进行免疫组织化学染色。图像分析系统对切片进行分析得出每张切片的平均灰度值，用SPSS11.5软件进行统计学分析。【结果】成功建立恒河猴脑选择性超深低温断血流复苏实验模型，术中、术后血流动力学稳定，术后安全复苏并长期存活，术后头颅MRI检查及神经功能评分未见异常。常温灌注组于灌注后未能安全复苏，全部死亡。免疫组化结果表明，常温灌注组与低温灌注组相比较，深低温能使神经元和胶质细胞碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达增高，抑制血管内皮细胞生长因子(VEGF)在神经元和胶质细胞中的表达。【结论】阻断猴双侧颈内动脉血流10分钟后脑选择性超深低温灌注60min后可安全复苏，对血流动力学、脑组织及神经功能无明显影响。超深低温能够抑制脑缺血后神经细胞的增生及肥大，增加bFGF的表达，减少VEGF的表达从而减少脑缺血对神经细胞的破坏作用。

关键词： bFGF VEGF 超深低温猴脑断血流复苏

猴脑常温不同缺血时限下选择性超深低温对Caspase-3、bc1-2和Bax影响的实验研究

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猴脑常温不同缺血时限下选择性超深低温对Caspase-3、bc1-2和Bax...

作者：王韬昆明医学院

学位级别：硕士

【目的】观察猴脑常温缺血0分钟、10分钟、15分钟、20分钟后进行选择性脑超深低温断血流复苏对Caspase-3、bcl-2和Bax蛋白表达的影响,以了解脑缺血后选择性超深低温复苏对猴神经细胞的影响,探讨猴脑常温缺血复苏的极限时间。【方法】... 详细信息

【目的】观察猴脑常温缺血0分钟、10分钟、15分钟、20分钟后进行选择性脑超深低温断血流复苏对Caspase-3、bcl-2和Bax蛋白表达的影响,以了解脑缺血后选择性超深低温复苏对猴神经细胞的影响,探讨猴脑常温缺血复苏的极限时间。【方法】健康成年恒河猴15只,雄性,随机分为四组,0分钟组(双侧颈动脉阻断立即超深低温灌注组,简称0分钟组,n＝4),10分钟组(双侧颈动脉常温阻断10分钟超深低温灌注组,简称10分钟组,n=4),15分钟组(双侧颈动脉常温阻断15分钟超深低温灌注组,简称15分钟组,n=4),20分钟组(双侧颈动脉常温阻断20分钟超深低温灌注组,简称20分钟组,n=3)。右侧颈内动脉远心端插管连接冷灌注系统,右侧颈内静脉远心端及双侧股静脉近心端插管连接超滤复温装置,建立脑局部体外循环。夹闭双侧颈外动静脉、左侧颈内动静脉常温缺血后向右侧颈内动脉注入4℃林格氏液,维持脑温≤16℃约60分钟。手术前后行头颅MRI检查,术后行神经功能缺失评分。实验猴灌注或复苏死亡后立即开颅取脑,长期存活猴饲养到术后4周处死开颅取脑。免疫组织化学法检测猴额叶神经细胞Caspase-3、bcl-2和Bax蛋白的表达水平。【结果】0分钟组(n=4)、10分钟组(n=4)安全复苏并长期存活,术中、术后血流动力学稳定,术后头颅MRI检查未见异常,术后神经功能评分无异常。15分钟组(n=4)长期存活2只,重残1只,死亡1只。20分钟组(n=3)于灌注后未能安全复苏,全部死亡。免疫组化结果表明:20分钟组及15分钟组与0分钟组比较Caspase-3的表达增高(P＜0.05),0分钟组、10分钟组、15分钟组、20分钟组4组间相互比较,Bax的表达逐渐增高(P＜0.05),0分钟组、10分钟组、15分钟组三组间猴额叶Bcl-2表达无明显差异,各组间差异均无统计学意义(P＞0.05)。20分钟组较其余三组猴额叶Bcl-2的表达明显降低,有统计学意义(P＜0.05)。【结论】(1)灵长类动物恒河猴可以在单侧颈内动脉冷灌注的条件下迅速达到脑选择性超深低温(14.3-16℃)。(2)常温下阻断猴双侧颈内动脉血流0分钟、10分钟行脑选择性超深低温灌注60分钟后可安全复苏并长期存活,对血流动力学、脑组织及神经功能无明显影响,超深低温具有明显脑保护作用。(3)常温下缺血15分钟行选择性超深低温复苏是可能的,但实验猴死残率高。20分钟常温脑缺血后低温灌注,脑缺血对神经元破坏,出现不可逆性脑损伤,导致复苏无效。(4)脑常温缺血后低温复苏的黄金时间可能就为10分钟。15分钟缺血后低温复苏虽有可能挽救生命,但神经功能缺失及死残率均较高,存在较大复苏风险。

关键词：超深低温猴脑断血流 Caspase-3 bcl-2 Bax

猴脑常温不同缺血时限下选择性超深低温对脑干及海马影响的研究

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猴脑常温不同缺血时限下选择性超深低温对脑干及海马影响的研究

作者：王向阳昆明医学院

学位级别：硕士

【目的】观察猴脑常温缺血0分钟、10分钟、15分钟、20分钟后进行选择性脑超深低温灌注60分钟实验动物复苏的可能性,以及脑干功能、脑干和海马形态学的变化,探讨猴脑常温缺血复苏的极限时间。【方法】健康成年恒河猴15只,雄性,随机分为... 详细信息

【目的】观察猴脑常温缺血0分钟、10分钟、15分钟、20分钟后进行选择性脑超深低温灌注60分钟实验动物复苏的可能性,以及脑干功能、脑干和海马形态学的变化,探讨猴脑常温缺血复苏的极限时间。【方法】健康成年恒河猴15只,雄性,随机分为四组,双侧颈动脉阻断立即超深低温灌注组(n=4),双侧颈动脉常温阻断10分钟超深低温灌注组(n=4),双侧颈动脉常温阻断15分钟超深低温灌注组(n=4),双侧颈动脉常温阻断20分钟超深低温灌注组(n=3)。右侧颈内动脉远心端插管连接冷灌注系统,右侧颈内静脉远心端及双侧股静脉近心端插管连接超滤复温装置,建立脑局部体外循环。夹闭双侧颈外动静脉、左侧颈内动静脉常温缺血后向右侧颈内动脉内注入4℃林格氏液,维持脑温≤16℃约60分钟。手术前后行头颅MRI检查,术中、术后观察心率、平均动脉压、瞳孔、神经反射、意识等脑干功能的改变,实验猴灌注或复苏死亡后立即开颅取脑,长期存活猴饲养到术后4周处死开颅取脑行HE染色病理学观察【结果】双侧颈动脉阻断立即超深低温灌注组(n=4)、双侧颈动脉常温阻断10分钟超深低温灌注组(n=4)安全复苏并长期存活,术中、术后脑干功能稳定,术后行头颅MRI未见明显异常,脑干和海马HE染色病理形态未见明显异常。双侧颈动脉阻断15分钟超深低温灌注组(n=4)长期存活2只,重残1只,死亡1只,术中、术后脑干功能受到一定程度影响,存活3只猴术后行头颅MRI脑干未见缺血改变,脑干和海马HE染色病理检查散在神经细胞坏死。20分钟低温组于灌注后未能安全复苏,全部死亡,脑干功能受到显著影响,20分钟低温组及15分钟阻断复苏组死亡1只猴脑干和海马HE染色见较多神经细胞死亡。【结论】(1)灵长类动物恒河猴可以在单侧颈内动脉冷灌注的条件下迅速达到脑选择性超深低温(14.3-16℃)。(2)常温下阻断猴双侧颈内动脉血流0分钟、10分钟行脑选择性超深低温灌注60分钟后可安全复苏并长期存活,对脑干功能无影响,脑干和海马组织结构正常,超深低温具有明显脑保护作用。(3)常温下缺血15分钟行选择性超深低温复苏是可能的,但实验猴死残率高,脑干功能有一定的影响,脑干和海马组织结构出现散在神经细胞坏死。(4)20分钟常温脑缺血后低温灌注,脑干功能受到显著影响,由于出现不可逆性脑损伤,导致复苏无效。(5)脑常温缺血后低温复苏的黄金时间可能就为10分钟。15分钟缺血后低温复苏虽有可能挽救生命,但神经功能缺失及死残率均较高,存在较大复苏风险。

关键词：超深低温猴脑断血流复苏

不同缺血时限下猴脑选择性超深低温断血流复苏质子波谱的实验研究

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不同缺血时限下猴脑选择性超深低温断血流复苏质子波谱的实验研究

作者：包正夫昆明医学院

学位级别：硕士

【目的】:在2004年实验的基础上,继续探讨常温下不同缺血时间窗猴脑选择性超深低温断血流复苏的变化。研究脑选择性超深低温断血流对猴脑组织及细胞生化代谢的影响,以进一步探明脑选择性超深低温技术的有效性和安全性。【方法】健康恒... 详细信息

【目的】:在2004年实验的基础上,继续探讨常温下不同缺血时间窗猴脑选择性超深低温断血流复苏的变化。研究脑选择性超深低温断血流对猴脑组织及细胞生化代谢的影响,以进一步探明脑选择性超深低温技术的有效性和安全性。【方法】健康恒河猴15只,随机分为四组:0分钟深低温灌注组(n=4),10分钟深低温灌注组(n=4),15分钟深低温灌注组(n=4),20分钟深低温灌注组(n=3)。常温下临时阻断双侧颈部血管后,通过一侧颈内动脉冷(或常温)灌注,同侧颈内静脉回流,阻断其它颈部血管,建立选择性脑局部体外循环通路,降低脑温至(146)℃,60分钟后恢复脑血流,实验动物自然复苏,手术中持续监测生命体征及血流动力学指标变化,术后每周行神经功能缺失评分。于手术前,恢复脑血流后24h、72h、7d分别行常规MRI检查(扫描序列包括T1WI、T2WI),及脑双侧额顶叶近皮质区、双侧基底节区的1H-MRS检查。1H-MRS采集感兴趣区N-乙酰天门冬氨酸(N-acetyi-aspartate,NAA)、含胆碱复合物(choline,CHO)、肌酸/磷酸肌酸(creatine/***/Cr2)四种微量代谢物的共振峰及曲线下面积,并对术前及术后不同时点的NAA/(Cr+Cr2)、Cho/(Cr+Cr2)的曲线下面积进行NAA,Cho的相对浓度分析。【结果】:0、10分钟低温灌注组8只均长期成活(2004年实验结果);20分钟低温灌注组3只猴分别于术后3、7、20小时死亡,故未行1H-MRS检测。15分钟低温灌注组(死亡一只除外)常规MRI扫描(T1WI、T2WI)提示脑实质内无异常信号;各部位手术前后不同时点NAA/(C r+PC r)比值比较,双侧基底节区及双侧额顶叶近皮质区NAA/(Cr+Cr2),Cho/(Cr+Cr2)在术前及术后不同时点均有显著性差异(P＜0.05)。10分钟低温灌注组在术前及术后不同时点均无显著性差异【结论】:1H-MRS的定量研究从脑组织生化代谢角度提示脑选择性超深低温可明显提高脑对缺血缺氧的耐受性;10分钟低温灌注组是复苏的黄金时间。15分钟低温灌注组致残率较高,20分钟低温灌注无复苏的可能。

关键词：猴属低氧缺血磁共振质子波谱超深低温

猴脑常温不同缺血时限下选择性超深低温对脑细胞骨架蛋白影响的研究

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猴脑常温不同缺血时限下选择性超深低温对脑细胞骨架蛋白影响的研...

作者：李冉昆明医学院

学位级别：硕士

【目的】观察猴脑常温缺血0分钟、10分钟、15分钟、20分钟后进行选择性脑超深低温复苏对脑细胞骨架蛋白β-tubulin、MAP-2、Vimentin和GFAP表达的变化,以了解脑缺血后选择性超深低温复苏对猴神经元及神经胶质细胞的骨架的影响,探讨猴脑... 详细信息

【目的】观察猴脑常温缺血0分钟、10分钟、15分钟、20分钟后进行选择性脑超深低温复苏对脑细胞骨架蛋白β-tubulin、MAP-2、Vimentin和GFAP表达的变化,以了解脑缺血后选择性超深低温复苏对猴神经元及神经胶质细胞的骨架的影响,探讨猴脑常温缺血复苏的极限时间。【方法】健康成年恒河猴15只,雄性,随机分为四组,0分钟组(双侧颈动脉阻断立即超深低温灌注组,简称0分钟组,n=4),10分钟组(双侧颈动脉常温阻断10分钟超深低温灌注组,简称10分钟组,n=4),15分钟组(双侧颈动脉常温阻断15分钟超深低温灌注组,简称15分钟组,n=4),20分钟组(双侧颈动脉常温阻断20分钟超深低温灌注组,简称20分钟组,n=3)。右侧颈内动脉远心端插管连接冷灌注系统,右侧颈内静脉远心端及双侧股静脉近心端插管连接超滤复温装置,建立脑局部体外循环。夹闭双侧颈外动静脉、在侧颈内动静脉常温缺血后向右侧颈内动脉内注入4℃林格氏液,维持脑温≤16℃60分钟。手术前后行头颅MRI检查,术后行神经功能缺失评分。实验猴灌注或复苏死亡后立即开颅取脑,长期存活猴饲养到术后4周处死开颅取脑。免疫组纵化学法检测神经细胞β-tubulin、MAP-2及神经胶质细胞Vimentin和GFAP蛋白的表达水平。【结果】0分钟组(n=4)、10分钟组(n=4)安全复苏并长期存活,术中、术后血流动力学稳定,术后头颅MRI检查未见异常,术后神经功能评分无异常。15分钟组(n=4)长期存活2只,重残1只,死亡1只。20分钟组于灌注后未能安全复苏,全部死亡。免疫组化结果表明,20分钟组及15分钟组与0分钟组比较和20分钟组及15分钟组与10分钟组比较,神经元微管蛋白的β-tubulin、MAP-2表达下降P＜0.01,神经胶质细胞的Vimentin和GFAP表达明显升高P＜0.01。10分钟组与0分钟组比较和20分钟组与15分钟组比较则差异没有统计学意义。【结j沦】(1)灵长类动物恒河猴可以在单侧颈内动脉冷灌注的条件下迅速达到脑选择性超深低温(14.3-16℃)。(2)常温下阻断猴双侧颈内动脉血流0分钟、10分钟行脑选择性超深低温灌注60分钟后可安全复苏并长期存活,对血流动力学、脑组织及神经功能无明显影响,超深低温具有明显脑保护作用。(3)常温下缺血15分钟行选择性超深低温复苏是可能的,但实验猴死残率高。20分钟常温脑缺血后低温灌注,实验猴无法复苏。脑缺血对神经元破坏,出现不可逆性脑损伤,神经元微管蛋白β-tublin,Map-2崩解增加,神经胶质细胞增生及肥大,胶质细胞标记性蛋白GFAP及Vimentin表达明显增强。(4)脑常温缺血后低温复苏的黄金时间可能就为10分钟。15分钟缺血后低温复苏虽有可能挽救生命,但神经功能缺失及死残率均较高,存在较大复苏风险。

关键词：细胞骨架蛋白超深低温猴脑断血流