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赛葵黄脉病毒:一种含有卫星DNA的双生病毒新种

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科学通报 2003年第16期48卷 1801-1805页

作者：周雪平彭燕谢艳张仲凯浙江大学生物技术研究所杭州310029 云南省农业生物技术重点实验室昆明650223

从云南红河地区表现黄脉症状的杂草——赛葵上分离到病毒分离物Y47.对Y47进行DNA-A的全序列测定,结果表明,Y47 DNA-A全长2731个核苷酸,基因组具有典型的双生病毒科病毒特征,即编码6个ORFs,其中病毒链编码AV1(CP)和AV2共2个ORFs,互补链编... 详细信息

从云南红河地区表现黄脉症状的杂草——赛葵上分离到病毒分离物Y47.对Y47进行DNA-A的全序列测定,结果表明,Y47 DNA-A全长2731个核苷酸,基因组具有典型的双生病毒科病毒特征,即编码6个ORFs,其中病毒链编码AV1(CP)和AV2共2个ORFs,互补链编码ACl～4共4个ORFs.对基因组进一步比较发现,Y47 DNA-A与秋葵黄脉花叶病毒分离物201(GenBank登录号:AJ002451)的同源性最高,达77％,而与其他双生病毒的同源性均在76％以下,表明Y47是双生病毒的一个新种,命名为赛葵黄脉病毒(MYVV).利用DNAβ的特异性引物beta01和beta02,从Y47中扩增到卫星DNA分子(Y47β).序列分析表明,Y47β全长1348个核苷酸,至少在其互补链上编码一个有功能的ORF(Cl).Y47β的全序列与Multan棉花曲叶病毒和Rajasthan棉花曲叶病毒的DNAβ的核苷酸同源性最高,为62％～67％,而与其他已报道的DNAβ的同源性均低于46％.系统关系树分析表明,卫星DNAβ分子与其辅助病毒是共同进化的.

关键词：赛葵黄脉病毒卫星DNA 双生病毒 DNA-A DNAβ 菜豆金色花叶病毒

赛葵黄脉病毒和云南赛葵黄脉病毒的群体遗传变异研究

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赛葵黄脉病毒和云南赛葵黄脉病毒的群体遗传变异研究

作者：任江平西南大学

学位级别：硕士

赛葵黄脉病毒(Malvastrum yellow vein virus,MaYVV)和云南赛葵黄脉病毒(Malvastrum yellow vein Yunnan virus,MaYVYV)是双生病毒科(Geminiviridae)菜豆金色花叶病毒属(Begomovirus)的单组份病毒,并伴随β卫星分子(MaYVB和MaYVYB),属不同致病类型。这两种病毒主要侵染锦葵科和菊科中的杂草,且常常与其它双生病毒发生复合侵染,但鲜有在作物上引起危害的报道。本实验室前期对危害作物的双生病毒的遗传变异机制进行了系统的研究,为了进一步了解双生病毒在作物和杂草上的遗传变异机制及进化轨迹,本研究以主要侵染杂草的MaYVV和MaYVYV为研究对象,对两种病毒的寄主范围、发生分布以及遗传变异规律进行了研究。从四川、福建、广西、广东和云南等地区采集了赛葵、胜红蓟、番茄、辣椒和甘薯等杂草和作物共计181份田间样品,利用检测双生病毒及其伴随β卫星的通用引物分别对样品进行PCR检测。结果表明,在赛葵和胜红蓟等杂草上检测到双生病毒及其伴随β卫星,检出率分别为69.06%和40.33%,在作物上没有检测到双生病毒。进一步利用检测MaYVV/MaYVB和MaYVYV/MaYVYB的特异性引物对样品进行特异性检测,结果表明,在双生病毒及β卫星检测呈阳性的样品中,MaYVV和MaYVB的检出率分别为31.20%和53.42%;MaYVYV和MaYVYB的检出率分别为41.60%和61.64%;这两种病毒复合侵染的检出率为32.26%。MaYVV和MaYVYV在赛葵和胜红蓟等杂草上发生普遍,且在赛葵上这两种病毒的复合侵染检出率高达31.18%,但在作物上未检测到。相比MaYVV,MaYVYV的地理分布更广泛。选取采自不同地区不同寄主的代表性样品,通过PCR扩增、克隆和测序获得四川赛葵SC933、广西赛葵GX125和GX175共3条MaYVV分离物全序列,以及四川赛葵SC933和SC939、广西赛葵GX125和GX199共4条MaYVYV分离物全序列。从GenBank数据库下载已登录的MaYVV和MaYVYV不同分离物的全基因组序列,对其群体遗传变异进行分析。结果表明,采自不同地区、不同寄主及不同年份的MaYVV遗传变异水平之间具有明显的遗传差异,这说明MaYVV群体的遗传变异受到地理因素、寄主因素及时间变迁的强烈影响,而MaYVYV群体的遗传变异则主要受到地理因素影响。对病毒群体进行中性分析,发现MaYVV群体的中性检测参数D值为0.87616.13887,均为正值,而MaYVYV群体的中性检测参数D值为-2.480952.05184,均为负值且差异显著,表明,MaYVV群体呈现出平衡或稳定的态势,而MaYVYV群体则呈现正在扩张的明显趋势。这两种病毒在种内均未检测到重组现象。遗传多样性分析发现,MaYVV群体的单倍型多样性(Hd)和核苷酸多样性(Pi)分别为0.944±0.070和0.02433±0.00315,相应的MaYVYV群体的Hd和Pi值分别为0.971±0.033和0.00414±0.00046,表明MaYVV和MaYVYV群体均具有丰富的遗传多样性。其IR区的Pi值分别为0.06467±0.00912和0.00567±0.00177,大于编码区AC1、AC4及AV1的Pi值。说明,MaYVV和MaYVYV群体的IR区的遗传变异最大,受到选择压力较弱;编码区AC1、AC4及AV1区较为保守,所受到的选择压力较强。以接种MaYVV Y47A分离物(Y47A)及其伴随β卫星(Y47β)的本氏烟为材料分别构建MaYVV的实验种群B60(60dpi)和B120(120dpi),同时以四川赛葵样品为材料构建MaYVV的自然种群SC906和SC915,以四川赛葵、广西赛葵及广西胜红蓟为材料构建MaYVYV的自然种群SC933、GX149和GX161,对MaYVV和MaYVYV实验种群及自然种群的遗传结构及变异进行分析。结果表明,两种病毒的种群遗传结构均符合病毒“准种”特征。MaYVV实验种群B60的突变克隆百分率和突变频率分别为22.72%和2.03×10,种群B120的突变克隆百分率和突变频率分别为51.52%和5.18×10,表明MaYVV的实验种群遗传变异水平随着时间的推移呈升高趋势。MaYVV自然种群SC906和SC915的突变频率分别为2.54×10和8.55×10,略高于实验种群,而MaYVYV的自然种群SC933、GX149和GX199的突变频率分别为9.26×10、1.52×10和9.59×10,均高于MaYVV自然种群的突变频率。进一步分析发现,各种群在IR区的突变较集中,该区域变异最强,突变频率在10数量级水平。在MaYVV实验种群中,IR区

关键词：赛葵黄脉病毒云南赛葵黄脉病毒群体遗传变异准种杂草

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赛葵黄脉病毒致病机制研究

赛葵黄脉病毒致病机制研究

作者：张弦浙江大学

学位级别：硕士

双生病毒是植物病毒中唯一的一类具有孪生颗粒形态的单链环状DNA病毒(single-stranded DNA，ssDNA)，双生病毒科病毒可侵染双子叶和单子叶植物，并在多种重要经济作物上造成严重的减产，在我国云南、广西、海南省的番茄、烟草、南瓜、... 详细信息

双生病毒是植物病毒中唯一的一类具有孪生颗粒形态的单链环状DNA病毒(single-stranded DNA，ssDNA)，双生病毒科病毒可侵染双子叶和单子叶植物，并在多种重要经济作物上造成严重的减产，在我国云南、广西、海南省的番茄、烟草、南瓜、胜红蓟和赛葵等植物上也相继发现了多种双生病毒。对云南表现黄脉症状的赛葵杂草上的双生病毒分离物Y200进行了基因组结构研究。对其DNA-A基因组部分序列测定分析表明，该序列与赛葵黄脉病毒(MYVV)相应序列的同源性为96.1％。利用DNAβ的特异性引物，从Y200中扩增到卫星DNA分子。序列分析表明，该DNAβ全长1348个核苷酸，全序列与MYVV DNAβ的同源性最高，为96.1％。DNA-A部分序列和DNAβ全长序列分析表明，该病毒分离物为MYVV。为了研究MYVV DNA-A和DNAβ在致病中的作用，我们构建了MYVV分离物Y47 DNA-A和DNAβ的侵染性克隆，侵染性测定表明MYVV-Y47 DNA-A单独可以侵染本氏烟、心叶烟和矮牵牛，但不能产生任何症状，只有与MYVV-Y47 DNAβ共同侵染时才能诱导产生黄脉、叶片卷曲的典型的病害症状。MYVV-Y47 DNAβ单独接种不能侵染植株。Southern印迹检测表明，MYVV-Y47 DNAβ依赖于辅助病毒进行复制，反过来DNAβ可以增强DNA-A在植物中的积累水平。因此，DNA-A与DNAβ之间是一种互作关系。

关键词：双生病毒赛葵黄脉病毒 DNAβ 侵染性

赛葵黄脉病毒（MYVV）和烟草曲茎病毒（TbCSV）及伴随β卫星之间的互作研究

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赛葵黄脉病毒（MYVV）和烟草曲茎病毒（TbCSV）及伴随β卫星之间...

作者：胡燕西南大学

学位级别：硕士

已有研究发现,中国番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl China virus,TYLCCNV)和烟草曲茎病毒(Tobacco curly shoot virus,TbCSV)伴随的β卫星均可被异源辅助病毒复制。但是,两者伴随同源或异源β卫星时诱导的症状明显不同,且病... 详细信息

已有研究发现,中国番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl China virus,TYLCCNV)和烟草曲茎病毒(Tobacco curly shoot virus,TbCSV)伴随的β卫星均可被异源辅助病毒复制。但是,两者伴随同源或异源β卫星时诱导的症状明显不同,且病毒的积累量与症状严重程度不直接相关。用TYLCCNV和TbCSV伴随其β卫星同时侵染本氏烟及心叶烟,在整个侵染过程中两种病毒及卫星在本氏烟中始终存在,而TYLCCNV及其同源β卫星在心叶烟中仅侵染前期能检测到,后期均丢失。赛葵黄脉病毒(Malvastrum yellow vein virus,MYVV)与TYLCCNV属同一致病类型,其β卫星是引起典型症状所必需的;而TbCSV单独侵染即可引起典型症状,但伴随β卫星时症状加重。为了弄清不同致病类型的双生病毒/β卫星病害复合体之间的互作关系,本研究以MYVV的Y47分离物(Y47A)和TbCSV的Y35分离物(Y35A)及其伴随β卫星MYVB(Y47β)和TbCSB(Y35β)为研究对象,以本氏烟为寄主材料,开展了这两类双生病毒/β卫星病害复合体各组分之间的互作研究。根据MYVV和TbCSV及其伴随β卫星全基因组的保守序列,设计病毒及β卫星的特异性引物,以发病叶片DNA为模板,优化反应条件,建立了扩增病毒及β卫星的实时荧光定量PCR(qPCR)检测体系,并对其进行了灵敏性和重复性检验。以102-108copies/μL这7个浓度梯度的标准品DNA为模板建立标准曲线,结果表明,该标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,扩增效率在90-110%之间,在qPCR扩增效率范围内;标准曲线的相关系数在0.998-1.000之间,说明该体系有较好的检测效能。该qPCR方法最低检测限为10 copies/μL,其灵敏度是常规PCR的100倍。将Y47A、Y47A+Y47β、Y47A+Y35β的侵染性克隆分别接种本氏烟,观察症状发现,单独接种Y47A的本氏烟不表现症状,接种Y47A+Y47β的本氏烟表现严重的向下叶卷,皱缩,黄脉,脉增厚等症状,接种Y47A+Y35β则表现植株矮化,茎严重扭曲,脉增厚,没有观察到黄脉和叶皱缩现象,Y47A侵染率为54.5%,Y47A+Y47β在本氏烟上的侵染率为100%,而Y47A+Y35β的侵染率则为72.7%,且显症时间(4d)也早于Y47A+Y35β(7d)。qPCR分析结果显示,接种Y47A+Y47β、Y47A+Y35β的本氏烟中Y47A的积累量均要高于单独接种Y47A的本氏烟,说明β卫星的存在提高了其辅助病毒Y47A的积累量。异源卫星Y35β伴随Y47A接种本氏烟时,Y35β可以稳定复制,但其复制水平低于接种Y47A+Y47β的本氏烟中Y47β的复制水平,表明伴随同一辅助病毒时异源β卫星的复制水平低于同源β卫星的复制水平。将Y47A+Y47β+Y35A+Y35β的侵染性克隆接种本氏烟,观察症状发现,本氏烟在侵染早期症状较严重,表现出皱缩、向下卷叶、黄脉、曲茎、矮化、脉突等症状,但在侵染后期与Y35A+Y35β引起的症状相似,黄脉症状消失。特异性检测表明,在整个侵染过程中,在接种本氏烟中均可扩增到Y35A和Y35β的特异性条带,积累量总体呈上升趋势,并在接种后90d达到最高值。而Y47A和Y47β的积累量在侵染过程中呈下降趋势,接种120d后检测不到Y47β,接种180d后Y47A也丢失,说明Y47A/Y47β病害复合体和Y35A/Y35β病害复合体在同一寄主内复制时存在竞争。在不同组合接种本氏烟中,接种60d后Y47A的积累量从高到低依次为:Y47A+Y47β、Y47A+Y47β+Y35A+Y35β、Y47A+Y35β和Y47A,再次证明β卫星与同源辅助病毒之间的互作特异性比与异源辅助病毒之间特异性更强,辅助病毒将优先支持其同源β卫星的复制。

关键词：赛葵黄脉病毒烟草曲茎病毒 β卫星互作实时荧光定量PCR

赛葵黄脉病毒及其伴随卫星影响本氏烟内源基因表达分析

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赛葵黄脉病毒及其伴随卫星影响本氏烟内源基因表达分析

赛葵黄脉病毒卫星DNA在不同寄主中的分子变异比较

绿色生态可持续发展与植物保护——中国植物保护学会第十二...

作者：余化斌荆陈沉李彭拜李科杜江吴根土孙现超青玲西南大学植物保护学院植物病害生物学重庆市高校级重点实验室

赛葵黄脉病毒（Malvastrumyellow vein virus,MaYVV）是菜豆金色花叶病毒属（Begomovirus）且伴随β卫星分子MaYVB的单组份双生病毒,在我国云南、四川等地区的赛葵上广泛发生。该病毒在本氏烟上造成曲叶和黄脉症状,为明确MaYVV及其卫星M... 详细信息

赛葵黄脉病毒（Malvastrumyellow vein virus,MaYVV）是菜豆金色花叶病毒属（Begomovirus）且伴随β卫星分子MaYVB的单组份双生病毒,在我国云南、四川等地区的赛葵上广泛发生。该病毒在本氏烟上造成曲叶和黄脉症状,为明确MaYVV及其卫星MaYVB侵染本氏烟后寄主内源基因的表达情况,本研究以MaYVV及其卫星MaYVB侵染性克隆接种本氏烟21天后叶片为材料,构建了本氏烟基因表达谱（委托北京诺禾致源生物信息科技有限公司）,并运用Gene Onlogy（GO）数据库、KEGG pathway数据库对差异表达基因的功能和可能参与的分子调控途径进行了分析与预测。差异表达基因筛选以padj＜0.05为标准,分析结果得出,处理组总共有5条基因差异表达,其中有2条040 327基因表达上调、2 713条基因表达下调。对差异表达基因进行GO功能富集分析可知,这些差异表达基因显著富集到136个term,分布在分子功能、生物过程和细胞组分三大类中。其中,生物过程有75个,主要包括:有机物代谢（合成）过程、初级代谢产物、氮化合物代谢过程、酰胺生物合成过程、肽代谢（合成）过程、羧酸代谢过程、tRNA代谢过程等;细胞组分有25个,主要包括:光系统II析氧复合体、转录因子TFIID复合物、转录因子复合体等;分子功能部分有36个,主要包括:连接酶活性、细胞骨架蛋白结合、蛋白复合体结合等,对差异基因KEGG通路富集分析可知,这些差异表达基因主要富集在核糖体、卟啉与叶绿素代谢、氨酰tRNA生物合成等3个通路中。以上结果为进一步了解赛葵黄脉病毒与寄主的互作机理奠定基础。

关键词：赛葵黄脉病毒表达谱 Gene Onlogy KEGG pathway

来源： cnki会议评论

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赛葵黄脉病毒卫星DNA在不同寄主中的分子变异比较

MYVYNV和MYVV两种双生病毒病害复合体的检测及伴随卫星DNA的分子变异

2014年中国植物保护学会学术年会

作者：曹刘素青玲西南大学植物保护学院植物病害生物学重庆市高校级重点实验室

为了明确寄主对赛葵黄脉病毒(Malvastrum yello vein virus,MYVV)伴随卫星DNA的遗传结构特点及种群变异水平的影响,将采自云南自然侵染赛葵黄脉病毒的辣椒YN57和赛葵黄脉病毒及伴随卫星的全长侵染性克隆通过农杆菌接种侵染本氏烟和心叶... 详细信息

为了明确寄主对赛葵黄脉病毒(Malvastrum yello vein virus,MYVV)伴随卫星DNA的遗传结构特点及种群变异水平的影响,将采自云南自然侵染赛葵黄脉病毒的辣椒YN57和赛葵黄脉病毒及伴随卫星的全长侵染性克隆通过农杆菌接种侵染本氏烟和心叶烟,通过分子克隆技术得到3种寄主的克隆种群,分析赛葵黄脉病毒伴随卫星(Malvastrum yellow vein virus satellite DNA beta,MYVB)在3种寄主中的变异水平、突变分布及碱基变异类型。结果表明,自然感染MYVB的寄主YN57中种群突变克隆百分率为55.6%,突变频率为1.4×10;在本氏烟中MYVB种群突变克隆百分率为100%,突变频率为2.4×10;在心叶烟中MYVB种群突变克隆百分率为100%,突变频率为1.8×10,表明MYVB自然种群突变水平略低于实验种群。对MYVB种群变异类型及分布特点分析表明,自然寄主中不仅检测到碱基的突变而且检测到碱基的缺失和增加,在实验寄主中只检测碱基的突变和碱基的增加,且多为碱基A的增加和突变;自然种群突变主要发生在SCR区,实验种群突变主要发生在A-rich区。

关键词：寄主赛葵黄脉病毒卫星DNAβ 种群变异

来源： cnki会议评论

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MYVYNV和MYVV两种双生病毒病害复合体的检测及伴随卫星DNA的分子...

作者：李茵西南大学

学位级别：硕士

赛葵黄脉病毒（Malvastrum yellow vein virus, MYVV）和云南赛葵黄脉病毒（Malvastrum yellow vein Yunnan virus, MYVYNV）是在我国云南、四川地区广泛发生的双生病毒科（Geminiviridae）菜豆金色花叶病毒属（Begomovirus）病毒,伴随卫星称之为赛葵黄脉病毒伴随卫星DNAβ （Malvastrum yellow vein betasatellite, MYVB）和云南赛葵黄脉病毒伴随卫星DNAβ （Malvastrum yellow vein Yunnan betasatellite, MYVYNB）,已在多个科属寄主上发现其侵染报道。研究表明,MYVV/MYVB和MYVYNV/MYVYNB是两种完全不同的病害复合体。卫星MYVB为辅助病毒MYVV引起典型症状必需的致病决定因子：与之不同的是,MYVYNB能够加重MYVYNV致病引起的症状但并非是必需的致病决定因子,且田间仅有部分MYVYNV分离物伴随卫星MYVYNB。为了进一步调查这两种双生病毒/卫星DNAβ病害复合体在四川地区的发生发展情况及研究其变异进化规律,本研究利用双生病毒及其伴随卫星通用引物和MYVV、MYVYNV和MYVB、 MYVYNB特异性引物对采自我国四川地区的表现双生病毒典型症状的胜红蓟、赛葵和锦葵等3种田间杂草共计255份样品进行PCR检测和鉴定,分析部分分离物DNA-A和卫星DNAβ全基因组结构和遗传多样性,并对这两种病毒伴随卫星种群遗传结构和变异进行研究。 PCR检测结果表明,利用双生病毒通用引物PA/PB,在255份样品中共有195份能扩增到预期约500bp的特异条带,阳性检出率为76.5%。其中有11份样品受MYVV侵染,162份样品受MYVYNV侵染,MYVV和MYVYNV的检出率分别为4.3%和63.5%,这两种病毒复合侵染的检出率为3.5%,在赛葵杂草寄主上MYVV和MYVYNV普遍发生。利用双生病毒卫星DNAP的通用引物β01/β02,在255份样品中共有159份能扩增到约1,300bp的特异条带,阳性检出率为62.4%。MYVB和MYVYNB检出率分别为20.0%和37.3%。分别选取来自于不同寄主及伴随不同卫星的5个代表性分离物进行全基因组测序,并对这两种病毒及伴随卫星进行基因组结构和遗传多样性分析。结果表明,MYVV和MYVYNV分离物均具有典型双生病毒DNA-A基因组结构特征,共编码6个开放阅读框（open reading frames, ORFs）,即AV1、AV2和AC1、AC2、AC3、 AC4, AV2和AC1被IR区隔开,IR区包含双生病毒保守的各种顺式组件,如茎环结构（含有9个核苷酸TAATATT/AC）. TATA box以及重复序列等。分析总核苷酸的相似性、各个编码框的核苷酸序列相似性及相应地各个ORFs所推导的氨基酸序列相似性,结果表明,IR区变异最大,核苷酸相似性最低;AC4区相对保守,核苷酸相似性较高;ACl区主要发生同义突变;AC3区和AC4区主要发生非同义突变。MYVB和MYVYNB分离物基因组具有双生病毒卫星DNAβ的典型结构,互补链上编码一个ORFs,含一个保守的卫星共同区（Satellite conserved region, SCR）,具有保守的九核苷酸TAATATT/AC茎环结构和富含腺嘌呤A的区域（A-rich region）。 MYVB和MYVYNB为两种不同类型的卫星,具有不同的致病机理。本文以MYVB和MYVYNB为研究对象,研究MYVB种群在自然寄主和实验寄主中和MYVYNB种群在不同自然寄主中的遗传结构和变异水平。结果表明,自然感染MYVB的寄主YN57中种群突变克隆百分率为55.6%,突变频率为1.4x10-3;在本氏烟中MYVB种群突变克隆百分率为100%,突变频率为2.4x10-3;在心叶烟中MYVB种群突变克隆百分率为100%,突变频率为1.8×10-3,表明MYVB自然种群突变水平略低于实验种群。对MYVB种群变异类型及分布特点分析表明,自然寄主中不仅检测到碱基的突变而且检测到碱基的缺失和增加,在实验寄主中只检测碱基的突变和碱基的增加,且多为碱基A的增加和突变;自然种群突变主要发生在SCR区,而实验种群突变主要发生在A-rich区。在寄主辣椒YN65中MYVYNB种群突变克隆百分率为84.2%,突变频率为1.5×10-3;在锦葵MY382中种群突变克隆百分率为35.0%,突变频率为2.6x10-4;在赛葵SC95中种群突变克隆百分率为76.2%,突变频率为9.9x10-4,表明不同寄主中变异水平存在一定差异。对MYVYNB种群变异类型及分布特点分析表明,在寄主辣椒中

关键词：赛葵黄脉病毒云南赛葵黄脉病毒伴随卫星DNAβ 杂草检测种群变异

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两种双生病毒伴随的卫星启动子的鉴定

两种双生病毒伴随的卫星启动子的鉴定

作者：张馨月浙江大学

学位级别：硕士

DNAβ是与某些单组份双生病毒相伴随的卫星分子,能在自然寄主上引起典型侵染症状。迄今发现的所有DNAβ分子在互补链上都编码一个大小和位置保守的βCl基因,它是一种致病决定因子。关于βCl基因启动子的研究,目前的研究报道还很少。赛... 详细信息

DNAβ是与某些单组份双生病毒相伴随的卫星分子,能在自然寄主上引起典型侵染症状。迄今发现的所有DNAβ分子在互补链上都编码一个大小和位置保守的βCl基因,它是一种致病决定因子。关于βCl基因启动子的研究,目前的研究报道还很少。赛葵黄脉病毒(MYVV)和中国番茄黄化曲叶病毒(TYLCCNV)均是本实验室鉴定的伴随有DNAβ分子的单组份双生病毒,为了进一步明确它们伴随的卫星DNA启动子对病毒症状的调节作用,本论文分离并鉴定了TYLCCNV Y25分离物(TYLCCNV-Y25)和MYVV Y47分离物(MYVV-Y47)DNAβ分子上βCl基因的启动子。利用根癌土壤杆菌介导的方法鉴定了MYVV-Y47 DNAβ分子上βCl基因的启动子。用GUS和GFP基因做为报告基因,通过组织化学法和荧光光度法测定启动子的活性。瞬时表达结果表明,MYVV-Y47βCl基因翻译起始位点上游的991核苷酸(nt)片段具有启动子活性;5'端缺失的片段以及A-rich区缺失的片段均保留了启动子活性;与花椰菜花叶病毒(CaMV)35S启动子相比,991 nt片段的启动子活性最高,是35S启动子活性的28.05%。对启动子进行遗传转化后进行组织化学检测表明,翻译起始位点上游的991 nt和214 nt片段均能够驱动GUS基因在转基因普通烟植株中组成型表达。利用根癌土壤杆菌介导的方法鉴定了TYLCCNV-Y25 DNAβ分子上βCl基因的启动子。用GUS基因做为报告基因,通过组织化学法和荧光光度法测定启动子的活性。瞬时表达结果表明,TYLCCNV-Y25βCl基因翻译起始位点上游的982 nt片段具有启动子活性,其活性是CaMV 35S启动子活性的46.23%。5'端以及A-rich区都缺失的206 nt片段保留有启动子活性并且其活性与982 nt片段的启动子活性没有显著性差异。

关键词：赛葵黄脉病毒中国番茄黄化曲叶病毒 βC1基因启动子

Malvastrum yellow vein virus,a new Begomovirus species associated with satellite DNA molecule

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Chinese Science Bulletin 2003年第20期48卷 2205-2209页

作者： ZHOUXuepinq XIEYan PENGYan ZHANGZhongkai InstituteofBiotechnology ZhejiangUniversityHangzhou310029China YunnanBiotechnologyResearchInstitute YunnanAcademyofAgriculturalSciencesKunming650223China

Virus isolate Y47 was obtained from Malvastrum coromandelianum showing yellow vein symptom in Honghe, Yunnan Province. The complete nucleotide sequence of DNA-A was determined, it contains 2731 nucleotides, having typical genomic organization of a begomovirus, encoding 6 ORFs with 2 ORFs [AV1(CP) and AV2] in virion- sense DNA and 4 ORFs (AC1—AC4) in complementary- sense DNA. Comparisons show that the total DNA-A of Y47 has the highest sequence identity (77%) with that of Okra yellow vein mosaic virus-[201] (AJ002451), while less than 76% identities are found when compared with other begomoviruses. The molecular data show that virus isolate Y47 is a distinct begomovirus species, for which the name Malvastrum yellow vein virus is proposed. Satellite DNA molecule (Y47b) was found to be associated with Y47 using the primers (beta01 and beta02) specific for DNAb. Y47b consists of 1348 nucleotides, with a functional ORF (C1) in complementary-sense DNA. Y47b has 62%—67% sequence identity with DNAb molecule associated with Cotton leaf curl Multan virus or Cotton leaf curl Rajasthan virus, while lower than 46% sequence identities are found when compared with other reported DNAb molecules. Relationship dendrograms show that DNAb molecules are co-evolved with their help begomoviruses.

关键词：植物病毒赛葵黄脉病毒卫星DNA 核苷酸序列测定寄主植物