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密度梯度离心和贴壁筛选法分离培养兔骨髓间充质干细胞的形态学观察

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中华临床医师杂志（电子版） 2012年第22期6卷 7261-7265页

作者：武海军银和平李树文白明杜志才曹振华内蒙古医科大学呼和浩特在读研究生010030 内蒙古医科大学第二附属医院微创脊柱外科

目的探讨兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)分离培养、鉴定和扩增的方法,同时观察BMSCs的生长特性,为组织工程中种子细胞的选择提供实验基础。方法应用密度梯度离心法和贴壁培养法相结合分离纯化BMSCs并进行体外扩增,倒置显微镜下观察原代及传... 详细信息

目的探讨兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)分离培养、鉴定和扩增的方法,同时观察BMSCs的生长特性,为组织工程中种子细胞的选择提供实验基础。方法应用密度梯度离心法和贴壁培养法相结合分离纯化BMSCs并进行体外扩增,倒置显微镜下观察原代及传代细胞的形态、生长情况,计数细胞数目,绘制细胞生长曲线。HE染色光镜观察细胞形态,免疫细胞化学方法检测细胞表面标志抗原CD29、CD34和CD44的表达,进行表型鉴定。结果成功地完成了兔BMSCs体外分离培养及扩增。生长特性观察发现,第1～3代细胞增殖能力强,生长旺盛,随着传代次数的增加传代细胞增殖能力逐渐下降。分离培养的BMSCs阳性表达CD29、CD44,阴性表达CD34。结论体外应用密度梯度离心法和贴壁培养法相结合,可获得高纯度的BMSCs,培养的BMSCs呈纤维状、克隆样生长,第1～3代细胞活性较强,可作为组织工程的种子细胞用于进一步的实验研究。

关键词：兔间质干细胞密度梯度离心法贴壁培养法体外培养

大鼠骨髓间充质干细胞体外培养与慢病毒转染方法的建立

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中国实验血液学杂志 2011年第6期19卷 1472-1476页

作者：张红珊方建培苏浩彬杨旻中山大学孙逸仙纪念医院儿科广东广州510120 复旦大学附属儿科医院消化科上海201102

本研究建立大鼠骨髓间充质干细胞(BMMSC)体外分离培养、表型鉴定和标记的方法,为临床进行细胞移植治疗提供合格的细胞。无菌条件下取大鼠股骨、胫骨,用冲洗法冲出骨髓,贴壁培养法分离纯化BMMSC,体外扩增;流式细胞术进行免疫表型鉴定,并... 详细信息

本研究建立大鼠骨髓间充质干细胞(BMMSC)体外分离培养、表型鉴定和标记的方法,为临床进行细胞移植治疗提供合格的细胞。无菌条件下取大鼠股骨、胫骨,用冲洗法冲出骨髓,贴壁培养法分离纯化BMMSC,体外扩增;流式细胞术进行免疫表型鉴定,并进行成骨,成脂分化鉴定;利用携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的慢病毒液转染大鼠BMMSC。结果表明,贴壁培养法能有效分离纯化大鼠BMMSC,细胞呈均一的成纤维细胞样;流式细胞术显示,第4代BMMSC中CD29、CD44表达阳性,CD34、CD45表达阴性。在相应的诱导培养条件下,BMMSC均能成骨及成脂分化。BMMSC用慢病毒液转染后表达GFP。结论:贴壁培养法简单、可行和稳定;分离培养的细胞具有BMMSC的生物学特性和多向分化潜能;BMMSC经慢病毒液转染后表达GFP,标记效率高,可作为标记细胞的一种有效手段,适合体内示踪。

关键词：骨髓间充质干细胞慢病毒转染贴壁培养法

非接触共培养条件下兔骨髓间充质干细胞向类髓核细胞诱导分化的实验研究

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非接触共培养条件下兔骨髓间充质干细胞向类髓核细胞诱导分化的实...

作者：武海军内蒙古医科大学

学位级别：硕士

第一部分密度梯度离心和贴壁筛选法分离培养兔骨髓间充质干细胞的形态学观察目的探讨兔骨髓间充质干细胞（bone marrow-derived mesenchymal stem cells，BMSCs）分离培养、鉴定和扩增的方法，同时观察BMSCs的生长特性。方法应用密度... 详细信息

第一部分密度梯度离心和贴壁筛选法分离培养兔骨髓间充质干细胞的形态学观察目的探讨兔骨髓间充质干细胞（bone marrow-derived mesenchymal stem cells，BMSCs）分离培养、鉴定和扩增的方法，同时观察BMSCs的生长特性。方法应用密度梯度离心和贴壁筛选法相结合分离纯化BMSCs并在体外扩增，利用倒置显微镜对各代BMSCs的生长情况及形态进行对比，对BMSCs的数目进行计数，绘制BMSCs的生长曲线图。对BMSCs行HE染色后观察其形态学特征，免疫细胞化学方法检测细胞表面标志抗原CD29、CD34和CD44的表达，进行表型鉴定。结果在体外成功的实现了兔BMSCs的培养与增殖。观察发现前3代的BMSCs增殖速度较快，生长旺盛，随着BMSCs的不断传代增殖活力逐渐降低。分离培养的BMSCs阳性表达CD29，CD44，阴性表达CD34。结论体外应用密度梯度离心法和贴壁培养法相结合，可获得高纯度的BMSCs，培养的BMSCs呈纤维状、克隆样生长，第1-3代细胞活性较强，可作为组织工程的种子细胞用于进一步的实验研究。第二部分不同代次兔髓核细胞的形态学特征和生物学性状目的研究兔不同代次髓核细胞的生物学特性，旨在找出合适的种子细胞去治疗椎间盘退变性疾病。方法从新西兰大耳白兔椎间盘髓核组织中，分离并培养髓核细胞同时进行培养传代，对原代及第3，4代髓核细胞进行苏木精-伊红染色观察细胞形态学变化;甲苯胺蓝染色和免疫细胞化学法检测髓核细胞内聚集蛋白聚糖和Ⅱ型胶原的表达;反转录PCR法测定Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖mRNA的表达水平，观察各代髓核细胞生物学特性的变化。结果兔椎间盘髓核细胞可以在体外培养并进行传代，原代髓核细胞一般需7d左右贴壁，形状呈类圆形或多角形，前3代髓核细胞都呈圆形或多角形，活力较强，HE染色后细胞核被染成均一蓝黑色，胞浆呈现淡粉色;髓核细胞经过甲苯胺蓝染色后，胞浆内呈现天蓝色，通过Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色后，胞浆内表现为黄褐色沉淀。到第4代细胞出现退变，Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖mRNA的表达水平较前几代细胞显著下降。结论前三代的髓核细胞代谢旺盛，表型一致，聚集蛋白聚糖和Ⅱ型胶原表达正常，传第4代后髓核细胞开始出现衰老、退变。第三部分非接触共培养条件下兔骨髓间充质干细胞向类髓核细胞诱导分化的实验研究目的研究兔骨髓间充质干细胞向类髓核细胞分化的潜能，为椎间盘退变性疾病的生物学治疗提供大量的细胞来源。方法提取兔BMSCs，进行培养传代至第3代，提取培养兔NPCs，将第3代BMSCs与NPCs按培养要求分为三组，BMSCs单独培养组，NPCs单独培养组，BMSCs与NPCs共培养组，应用Transwell6孔培养板将BMSCs与NPCs进行非接触式共培养。倒置显微镜观察各组细胞的变化，在培养7天后利用免疫细胞化学、RT-PCR及Western-blot技术分别对BMSCs单独培养组、共培养组中BMSCs和NPCs单独培养组中NPCs的Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的表达进行测定，最后对各组细胞测定的结果进行对比分析。结果成功分离提取兔骨髓间充质干细胞和髓核细胞;免疫细胞化学检测、RT-PCR检测和Western-blot检测结果显示Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖在共培养组中BMSCs的表达与NPCs单独培养组中NPCs的表达相近，较BMSCs单独培养组中BMSCs的表达显著增加。结论兔骨髓间充质干细胞具有向髓核细胞诱导分化的潜能，在BMSCs与NPCs共培养的条件下BMSCs可转化成为NPCs，BMSCs可能为椎间盘退变性疾病的生物学治疗提供足够的细胞来源。

关键词：兔骨髓间充质干细胞密度梯度离心法贴壁培养法体外培养兔髓核细胞聚集蛋白聚糖 Ⅱ型胶原髓核细胞非接触式共培养

回输同基因大鼠骨髓间充质干细胞对肝移植大鼠的免疫调节作用研究

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回输同基因大鼠骨髓间充质干细胞对肝移植大鼠的免疫调节作用研究

作者：陈旭明昆明医学院

学位级别：硕士

第一部分Lewis大鼠骨髓间充质干细胞的体外分离培养、表型鉴定及生物学特性的研究目的: 将Lewis大鼠骨髓间充质干细胞进行了原代分离,通过体外培养扩增,观察细胞的生物学特性,并进行了鉴定。行混合淋巴细胞培养,及测定IL-2、IL-4、IL-1... 详细信息

第一部分Lewis大鼠骨髓间充质干细胞的体外分离培养、表型鉴定及生物学特性的研究目的: 将Lewis大鼠骨髓间充质干细胞进行了原代分离,通过体外培养扩增,观察细胞的生物学特性,并进行了鉴定。行混合淋巴细胞培养,及测定IL-2、IL-4、IL-10和干扰素γ水平,为本实验的下一步研究提供了基本条件及实验依据。方法: 贴壁培养法分离纯化Lewis大鼠BMSC体外培养和连续传代,在倒置显微镜下连续观察细胞的形态变化,摄片及绘制生长曲线;取第三代BMSC行CD34、CD44免疫组化法鉴定,用流式细胞仪行特征性抗体CD34、CD44、CD45、CD90的表型分析;混合淋巴细胞培养体系(MLC),取正常DA和Lewis大鼠脾脏,尼龙毛吸附法制备纯化T细胞,分别作为刺激细胞和反应细胞,于反应细胞培养板中加入丝裂霉素C处理过的2.5×10个BMSC作为实验组,只加培养液的孔作为空白孔,单纯刺激细胞加反应细胞为空白对照,单纯加BMSC为调控细胞对照,计算细胞生长抑制率;在BMSC原代培养至第3、5d,收集半量换液之离心上清,酶联免疫法(ELISA)测定IL-2、IL-4、IL-10和干扰素γ水平。结果: BMSC体外培养生长状况良好,单个细胞呈狭长梭形,排列有明显方向性呈旋涡状、网状,复层生长的细胞形态呈多边角型;生长曲线近似“S”形;经免疫组化法鉴定,血管源性细胞表面抗原CD34表达阴性,而BMSC相对特异性标记物CD44表达阳性;流式细胞仪检测,CD34、CD44、CD45、CD90细胞阳性率分别为7.9%±1.3%、89.5%±4.5%、4.3%±0.5%、95%±3.8%;在MLC体系中,实验组吸光度A值为0.769±0.154,对照组A值为1.479±0.126,抑制率为48.05%,表明当BMSC与T细胞比值为1:1时,T淋巴细胞增殖明显受到抑制;在BMSC原代培养至第3d、5d、7d、9d,收集半量换液之离心上清,酶联免疫法(ELISA)测定IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ水平发现其含量与空白对照组无明显差别。结论: 贴壁筛选法成功获得BMSC,从形态学、免疫组化、细胞表型、功能活性等方面对其进行全面鉴定,证实了分离、培养体系的正确性。实验并证实了BMSC对T淋巴细胞的增殖有明显的抑制作用,且从BMSC培养上清液中检测IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ水平发现其含量与空白对照组无明显区别。满足进一步实验的要求。第二部分建立DA-Lewis大鼠原位肝移植急性排斥模型目的: 建立大鼠原位肝移植急性排斥模型,为进一步的实验研究奠定基础。方法: DA大鼠做为供体,雄性Lewis大鼠做为受体,采用改良后的Kamada“二袖套管法”,建立大鼠原位肝移植模型。观察术后存活情况,并对其生存时间及术后的生存率进行统计分析。结果: 20例大鼠肝移植手术中,术后超过48小时的有17例,供体手术时间(30±8)min,修肝时间(15±2)min,受体手术时间(60±7)min,无肝期时间(21±3)min,手术成功率85%。术后4至5天开始出现黄疸,精神差,睁眼困难,反应迟钝,并于术后13天内全部死亡。结论: 根据近交系大鼠自身结构特点,对大鼠原位肝移植模型建立方法进行了改进,取得了一定的成效。DA-Lewis为稳定、可靠的大鼠肝移植急性排斥模型,是研究肝移植排斥反应及免疫耐受的理想动物模型。第三部分回输同基因BMSC对肝移植大鼠的免疫调节作用研究目的: 通过大鼠肝移植术中经门静脉回输同基因骨髓间充质干细胞,探讨骨髓间充质干细胞的低免疫原性和免疫调节特性,并研究其对异基因大鼠移植肝的保护作用。方法: 用贴壁筛选法,体外分离培养Lewis大鼠的骨髓间充质干细胞,并取第三代用流式细胞仪行表型分析及鉴定,见第一部分。用DA大鼠做为供体,雄性Lewis大鼠做为受体,采用改良后的Kamada“二袖套管法”,建立大鼠原位肝移植急性排斥模型,见第二部分。实验分4组,A组行DA-Lewis大鼠原位肝移植,做为空白对照组(n=24),术中经门静脉输注生理盐水1ml:B组为环胞素组(n=24),手术同A组,术后2d经胃予环胞素A10mg/kg,每天一次;C组BMSC组(n=24),行DA-Lewis大鼠原位肝移植,术中经门静脉输注术前准备好的骨髓间充质干细胞2×10cells,共1ml;D组BMSC+环胞素A组(n=24),手术同C组,术后2d经胃予B组半量的环胞素,5mg/kg,每天一次。观察受体术后生存时间和一般情况,各组分成4个亚组(n=6),留1个亚组观察大鼠移植后生存期,另外3个亚组分别于移植后3d、7d和10d处死大鼠,检测血清ALT,AST,TBIL水平;ELISA法测定IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ水平;

关键词：间充质干细胞贴壁培养法肝移植大鼠近交系急性排斥骨髓间充质干细胞急性排斥反应

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蜗轴螺旋动脉平滑肌的培养及其鉴定

蜗轴螺旋动脉平滑肌的培养及其鉴定

作者：王烨第四军医大学

学位级别：硕士

1.目的本研究的目的是通过联合两种常用的细胞培养方法(酶消化培养法和组织贴壁培养法),建立了一个体外的蜗轴螺旋动脉平滑肌细胞原代培养的模型。 2.方法 2.1用于进行实验的的蜗轴螺旋动脉的平滑肌来自于豚鼠。将蜗轴螺旋动脉血管组... 详细信息

1.目的本研究的目的是通过联合两种常用的细胞培养方法(酶消化培养法和组织贴壁培养法),建立了一个体外的蜗轴螺旋动脉平滑肌细胞原代培养的模型。 2.方法 2.1用于进行实验的的蜗轴螺旋动脉的平滑肌来自于豚鼠。将蜗轴螺旋动脉血管组织切碎并且放入37度二氧化碳培养箱中在溶液浓度为0.1%胰蛋白酶溶液中消化20分钟。接着,将这些消化后的血管组织块在35-mm的培养皿中贴壁,组织块中间间隔3-5mm。 2.2联合运用这两种细胞培养方法,我们发现其中混杂的细胞几乎都为成纤维细胞,所以如何去除成纤维细胞是本实验需要克服的问题。经过查阅文献和多次的实践,我们将蜗轴螺旋动脉血管平滑肌细胞原代培养过程中混杂的成纤维细胞通过其与血管平滑肌细胞不同的贴壁能力和成纤维细胞对无血清的培养液不耐受,因为可在在传代的时候被去除。当35mm培养皿中细胞长满80%-90%的时候,就可以进行传代。在传代过程中应用上述的去除成纤维细胞的方法。我们将细胞悬液加入到35mm的培养皿中,15分钟后,吸出液体。将吸出的液体加入另外一个35mm的培养皿中,静置15分钟。吸出液体并加入到第三个35mm的培养皿中。收集第二和第三个培养皿继续培养。反复应用纯化的程序,可以在第三代得到纯的并且活性好的蜗轴螺旋动脉平滑肌细胞。 3.结果 3.1通过倒置显微镜的观察,我们发现在7-10天后,可以见到有细胞从组织块中长出来。大约在3周左右,这些细胞可长满培养皿,大约在细胞长满培养皿80%-90%时,可以进行传代。通过方法中介绍的血管平滑肌细胞纯化的方法,在第三代培养的血管平滑肌细胞中,纯的并且活性好的细胞可以被获得。 3.2经过形态学,免疫荧光化学对于上述方法得到的蜗轴螺旋动脉血管血管平滑肌细胞进行了鉴别。这些细胞呈现梭形的细胞形态,每个细胞含有1-2个核。结果显示了典型的平滑肌的细胞的特点:形态学显示了平滑肌细胞在细胞密度大的时候出现的典型的“峰-谷”样的生长形态。免疫荧光化学显示这些原代培养的蜗轴螺旋动脉血管平滑肌细胞表达平滑肌细胞的特异性标志物(α-SM- actin和myosin)。 3.3透射电镜结果显示的培养的蜗轴螺旋动脉平滑肌细胞中具有密斑,密体,肌丝这些平滑肌细胞的标志性结构。 4.结论本文通过联合两种常见的细胞培养方法,建立了一种有效并且简单的细胞培养方法。应用这种原代培养的方法,大量纯的并且活性良好的蜗轴螺旋动脉血管平滑肌细胞可以在原代培养第三代的时候得到。这些血管平滑肌细胞是一个很好的研究血管平滑肌细胞在内耳循环紊乱过程生理功能的一个体外模型。除此之外,这些活性良好的平滑肌细胞还可以是一些作用于血管平滑肌药物评价的体外模型。

关键词：贴壁培养法酶消化法蜗轴螺旋动脉血管平滑肌细胞

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奶牛乳腺组织两种不同培养体系的比较

农业生物技术学报 2005年第4期13卷 512-515+550页

作者：赵学军吴慧慧张才乔刘建新吴跃明浙江大学动物科学学院杭州310029 浙江大学动物科学学院

以液氮冷冻泌乳奶牛乳腺组织为研究材料,对奶牛乳腺组织的旋转培养法与贴壁培养法进行了比较研究。乳腺组织的培养条件为:DMEM/F12培养液中含2μg/mL氢化可的松、5μg/mL转铁蛋白、10μg/mL胰岛素和10%的胎牛血清。通过台盼蓝染色观察(... 详细信息

以液氮冷冻泌乳奶牛乳腺组织为研究材料,对奶牛乳腺组织的旋转培养法与贴壁培养法进行了比较研究。乳腺组织的培养条件为:DMEM/F12培养液中含2μg/mL氢化可的松、5μg/mL转铁蛋白、10μg/mL胰岛素和10%的胎牛血清。通过台盼蓝染色观察(旋转培养法)、培养组织观察(贴壁培养法)、测定MTT二甲基噻唑二苯基四唑嗅盐活性和基因组DNA降解成为1000bp以下核苷酸片段量来比较两种方法的优缺点。结果发现,旋转培养法在120h后组织和细胞成活率都在80%以上,MTT与基因组DNA降解值显示在72h内组织活性最高;贴壁培养法组织、细胞在24h开始贴壁,到48h后完全贴壁成活,72h后组织具有明显分泌活性,MTT值与基因组DNA降解值显示,72h以后奶牛乳腺组织已表现出分裂增殖能力,组织死亡率明显下降,96h后培养组织的增殖能力与死亡率都达到稳定状态。奶牛乳腺组织贴壁和旋转两种培养方法在72h内都可以保持奶牛乳腺组织基本活性。

关键词：组织培养旋转培养法贴壁培养法乳腺奶牛

贴壁和悬浮培养的神经前体细胞生物学特性研究及酒精对神经前体细胞Cx43表达的影响

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贴壁和悬浮培养的神经前体细胞生物学特性研究及酒精对神经前体细...

作者：孙涛山东大学

学位级别：硕士

研究背景: 神经前体细胞(neural precursor cells,NPCs)是中枢神经系统中处于不同发育阶段的不成熟神经细胞的总称,具有自我更新、增殖和分化为各类神经细胞的潜能,是公认的神经损伤修复的种子细胞。应用体外扩增的NPCs对神经系统创伤... 详细信息

研究背景: 神经前体细胞(neural precursor cells,NPCs)是中枢神经系统中处于不同发育阶段的不成熟神经细胞的总称,具有自我更新、增殖和分化为各类神经细胞的潜能,是公认的神经损伤修复的种子细胞。应用体外扩增的NPCs对神经系统创伤、变性及退行性疾病的治疗具有广阔的应用前景。1992年,Reynolds首先建立了NPCs的体外悬浮培养方法,开创了NPCs体外培养、扩增及其应用的新纪元。1995年Gage建立了NPCs的贴壁培养方法,大大推动了对NPCs的相关研究。但目前国际上对NPCs的研究仍然处于初级阶段,对两种不同培养方法获得的NPCs生物学特性研究资料还非常缺乏。我国开展NPCs的研究起步较晚,目前主要使用悬浮培养的方法开展工作。为了深入开展对NPCs相关研究,本课题在完善NPCs贴壁培养方法的基础上,对比研究了两种培养条件下的NPCs的生物学特性,为深入开展NPCs的基础研究和临床应用研究提供实验依据。胎儿酒精综合征(fetal alcohol syndrome,FAS)是母亲在妊娠期间过量饮酒造成的子代出生缺陷,其症状包括一系列的中枢神经系统发育异常。体内、外实验发现,酒精可抑制NPCs的增殖,并导致部分NPCs死亡,这被认为是FAS发病的原因之一。但对于酒精损伤NPCs的机理,目前了解还比较少。文献报道,连接蛋白43(connexin 43,Cx43)在NPCs增殖过程中具有重要的作用。酒精对NPCs增殖的抑制作用是否与Cx43的表达有关,目前尚未见相关报道。研究目的: 1、对比研究贴壁培养法和悬浮培养法在体外培养获得的NPCs的生物学特性,为深入开展NPCs的基础研究和临床应用研究提供实验依据。 2、建立体外贴壁培养NPCs的酒精损伤模型,研究酒精对体外培养的NPCs中Cx43表达的影响,探讨酒精抑制NPCs增殖的作用机理。研究方法:以孕14d的胎鼠端脑为实验材料,分别采用贴壁培养和悬浮培养方法进行NPCs的原代、传代及冻存复苏后培养,进行下列实验: 1、两种培养方法获得的NPCs的生物学特性对比实验 (1)倒置相差显微镜下,每天对培养细胞进行形态学观察,并拍照;(2)用免疫荧光细胞化学方法及流式细胞术鉴定培养细胞中NPCs的纯度;(3)用BrdU掺入方法分析NPCs的增殖能力;(4)用细胞计数方法分析两种原代培养方法获得的NPCs的生长曲线;(5)采用去除生长因子的方法诱导NPCs分化,用免疫荧光方法鉴定各类分化细胞并分析其比例特征。 2、酒精对NPCs的Cx43的表达的影响 (1)建立贴壁培养NPCs酒精损伤实验模型,采用倒置相差显微镜观察细胞形态变化,并拍照;(2)采用MTT法检测NPCs琥珀酸脱氢酶的变化,分析酒精对NPCs活性的影响;(3)采用免疫荧光方法观察体外贴壁培养的NPCs中Cx43的表达情况;(4)采用Western-blot法检测NPCs中Cx43的表达量,分析酒精对NPCs中Cx43表达的影响;(5)通过刻痕标记/荧光扩散实验,观察荧光黄(Lucifer Yellow,LY)在NPCs之间的扩散距离,分析酒精对NPCs间隙连接功能的影响。实验结果: 1、两种培养方法获得的NPCs的生物学特性对比实验 (1)形态学观察贴壁培养的NPCs表现出典型的神经上皮细胞的形态特征,细胞群体呈集落状生长,随着培养时间延长,细胞呈放射状向外延伸;悬浮培养的NPCs呈球状克隆生长,细胞多数呈圆形,细胞连接紧密。传代以及冻存复苏后培养的NPCs形态均无明显变化;(2) NPCs纯度鉴定原代贴壁培养细胞中nestin阳性细胞率由第3天的38.69%增加至第9天的93.76%,而原代悬浮培养细胞第9天的nestin阳性细胞率仅为59.75%;两者传代后第2天,贴壁培养细胞的nestin阳性细胞率可达98.36%,悬浮培养细胞为83.34%;冻存复苏后培养第4天,两种方法获得的NPCs纯度达均可达到99.9%;(3) NPCs的增殖能力检测原代贴壁培养的NPCs的增殖指数,由培养第3天的13.68%增加至最高的第7天的38.7%;悬浮培养第7天的NPCs的增殖指数亦达最高,但仅为33.47%;贴壁培养细胞在传代后第2天和复苏后培养第4天,增殖指数分别可达39.08%和39.25%,而悬浮培养的NPCs这两种条件下的增殖指数仅为36.95%和36.73%;(4)原代培养NPCs生长曲线分析两种培养方法获得的生长曲线均为“S”形曲线,但在细胞数量上有明显差异。贴壁培养第12天时,细胞数量最多,为初始接种数的68倍,继续培养细胞数量开始降低;悬浮培养第11天时,细胞数量即达最多,但仅为初始接种量的8.4倍;(5) NPCs的分化能力分析贴壁培养的NPCs诱导分化后培养7d,神经元、星形胶质细胞

关键词：神经前体细胞悬浮培养法贴壁培养法酒精连接蛋白43

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大鼠骨髓间充质干细胞体外培养

实用中医内科杂志 2012年第9期26卷 3-4页

作者：王祺杨积武王艳春辽宁中医药大学附属第二医院沈阳110034 辽宁中医药大学附属医院沈阳110032

[目的]通过实验探索并验证行之有效的体外骨髓间充质干细胞分离、纯化、培养的方法。[方法]采用密度梯度离心法和贴壁培养法相结合的方法对骨髓间充质干细胞进行体外培养。[结果]原代细胞10d左右达85%以上融合,传代后细胞约1周左右达85... 详细信息

[目的]通过实验探索并验证行之有效的体外骨髓间充质干细胞分离、纯化、培养的方法。[方法]采用密度梯度离心法和贴壁培养法相结合的方法对骨髓间充质干细胞进行体外培养。[结果]原代细胞10d左右达85%以上融合,传代后细胞约1周左右达85%以上融合;传至5代细胞形态呈较一致的长梭形。[结论]运用贴壁培养法和密度梯度离心法相结合的方法对骨髓间充质干细胞进行体外培养,可获得足够数量纯度较高的骨髓间充质干细胞。

关键词：骨髓间充质干细胞体外培养贴壁培养法密度梯度离心法

体外贴壁和悬浮培养大鼠胚胎脑神经前体细胞生物学特性研究

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体外贴壁和悬浮培养大鼠胚胎脑神经前体细胞生物学特性研究