密度梯度离心和贴壁筛选法分离培养兔骨髓间充质干细胞的形态学观察

作     者：武海军 银和平 李树文 白明 杜志才 曹振华 WU Hai-jun;YIN He-ping;LI Shu-wen;BAIMing;DU Zhi-cai;CAO Zhen-hua

作者机构：内蒙古医科大学呼和浩特在读研究生010030 内蒙古医科大学第二附属医院微创脊柱外科 

出 版 物：《中华临床医师杂志（电子版）》 (Chinese Journal of Clinicians(Electronic Edition))

年 卷 期：2012年第6卷第22期

页      面：7261-7265页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100101[医学-人体解剖与组织胚胎学] 10[医学] 

基　　金：内蒙古自治区自然科学基金项目(2009MS1117) 

主　　题：兔 间质干细胞 密度梯度离心法 贴壁培养法 体外培养 

摘      要：目的探讨兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)分离培养、鉴定和扩增的方法,同时观察BMSCs的生长特性,为组织工程中种子细胞的选择提供实验基础。方法应用密度梯度离心法和贴壁培养法相结合分离纯化BMSCs并进行体外扩增,倒置显微镜下观察原代及传代细胞的形态、生长情况,计数细胞数目,绘制细胞生长曲线。HE染色光镜观察细胞形态,免疫细胞化学方法检测细胞表面标志抗原CD29、CD34和CD44的表达,进行表型鉴定。结果成功地完成了兔BMSCs体外分离培养及扩增。生长特性观察发现,第1～3代细胞增殖能力强,生长旺盛,随着传代次数的增加传代细胞增殖能力逐渐下降。分离培养的BMSCs阳性表达CD29、CD44,阴性表达CD34。结论体外应用密度梯度离心法和贴壁培养法相结合,可获得高纯度的BMSCs,培养的BMSCs呈纤维状、克隆样生长,第1～3代细胞活性较强,可作为组织工程的种子细胞用于进一步的实验研究。