检索结果-南通市图书馆

大口黑鲈源豚鼠气单胞菌的分离鉴定及全基因组分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国畜牧兽医 2024年第4期51卷 1706-1716页

作者：王迎平赵静贤尚佳富郝成森左妤祺朱桓奕冯旭东徐婷婷倪兴维刘霞杨晓伟曹蓝云张立武谭昌藩曹礼静赵光伟西南大学动物医学院重庆402460 贵州省动物疫病预防控制中心贵阳550008 重庆三杰众鑫生物工程有限公司重庆402460 重庆市巫山县职业教育中心重庆404799 重庆市荣昌区职业教育中心重庆402460

【目的】探究患病大口黑鲈的致病菌及其主要生物学特性,为临床疾病防控提供技术支撑。【方法】首先对发病大口黑鲈进行病理组织学观察,进而利用平板划线法分离细菌,通过革兰染色、生化试验和16S rDNA序列测定对分离菌进行鉴定,通过致病... 详细信息

【目的】探究患病大口黑鲈的致病菌及其主要生物学特性,为临床疾病防控提供技术支撑。【方法】首先对发病大口黑鲈进行病理组织学观察,进而利用平板划线法分离细菌,通过革兰染色、生化试验和16S rDNA序列测定对分离菌进行鉴定,通过致病性试验观察分离菌对小鼠主要脏器造成的病理损伤;而后分别利用PCR方法和Kirby-Bauer(K-B)纸片法对分离菌的常见毒力基因和耐药特征进行检测分析;最后利用二代测序技术绘制其全基因组草图,并通过生物信息学方法对其分子特征进行解析。【结果】自然感染大口黑鲈肝细胞肿大,空泡变性,肠黏膜下层出血,肠壁坏死;于患病黑鲈体内分离到1株优势菌,在血平板上呈乳白色,半透明,直径约1 mm的小菌落,呈β溶血,革兰染色为阴性短杆菌,两端钝圆,经生化试验和16S rDNA测序证实分离菌为豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae),将其命名为SCMS。试验小鼠接种后24 h内死亡率为100%,病理特征与自然感染大口黑鲈相似;SCMS株中共检测到9种毒力基因,分别为Aha、Ahp、Aer、Alt、gcaT、Act、Exu、Ela和eprCAI;药敏试验结果显示,分离菌对大多数四环素类、大环内酯类药物表现耐药或中度敏感;全基因组测序显示,分离菌全长4329602 bp,GC含量为61.5%,基因组信息在GenBank中的登录号为JARFUQ000000000,相似性分析显示分离菌与人源、食品源豚鼠气单胞菌具有高度相似性;病原毒力因子数据库(VFDB)比对显示,分离菌携带多种与黏附、侵入及分泌系统相关的毒力基因;耐药基因数据库(CGE)分析显示,菌株中携带7种耐药基因,部分基因与耐药表型存在不一致的现象。【结论】本试验通过全基因组测序技术解析了1株大口黑鲈源豚鼠气单胞菌的毒力基因和耐药基因,其结果可为大口黑鲈临床疾病防控提供技术支撑。

关键词：大口黑鲈豚鼠气单胞菌全基因组测序毒力基因耐药基因

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

豚鼠气单胞菌致结直肠溃疡菌血症1例

解放军医学院学报 2022年第9期43卷 1005-1006,F0003页

作者：安萌吴鹏白鹏林香春北京大学国际医院北京102206

结肠溃疡为消化科常见疾病,病因包括感染、免疫、药物、肿瘤等。部分病例病因鉴别困难。因粪便培养阳性率有限,感染致结肠溃疡的病原学常难以明确。本例患者为免疫功能低下老年人,表现为血便、关节囊肿合并感染,肠镜可见结肠溃疡,最终... 详细信息

结肠溃疡为消化科常见疾病,病因包括感染、免疫、药物、肿瘤等。部分病例病因鉴别困难。因粪便培养阳性率有限,感染致结肠溃疡的病原学常难以明确。本例患者为免疫功能低下老年人,表现为血便、关节囊肿合并感染,肠镜可见结肠溃疡,最终通过血高通量检测明确为豚鼠气单胞菌感染,抗感染后好转。本病例提示临床医生怀疑结肠溃疡为感染所致时,除沙门菌、志贺菌、大肠埃希菌外,应考虑到豚鼠气单胞菌可能,可采用高通量检测方式进一步明确病原。

关键词：豚鼠气单胞菌结直肠溃疡菌血症高通量基因检测老年人 80岁以上

豚鼠气单胞菌噬菌体vB＿AceP＿PAc的生物学特性及治疗小鼠肠道感染的研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

豚鼠气单胞菌噬菌体vB＿AceP＿PAc的生物学特性及治疗小鼠肠道感...

作者：迟腾吉林农业大学

学位级别：硕士

豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae,A.caviae)是一种常见的人-兽-水生动物共患的条件性病原菌,能够引起多种水生动物发病。关于A.caviae强毒株引起动物胃肠炎甚至急性死亡的案例报道也逐渐增多,严重影响水产养殖业发展以及公共卫生安全。... 详细信息

豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae,A.caviae)是一种常见的人-兽-水生动物共患的条件性病原菌,能够引起多种水生动物发病。关于A.caviae强毒株引起动物胃肠炎甚至急性死亡的案例报道也逐渐增多,严重影响水产养殖业发展以及公共卫生安全。目前主要应用抗生素类药物治疗A.caviae引起的疾病,然而抗生素的滥用不仅造成了严重的药物残留问题,危害着人类健康,也增加了治疗由耐药A.caviae引起相关疾病的难度,寻找一种能够替代抗生素的新型产品已成为当下研究热点。噬菌体(Bacteriophage)是一种能在细菌体内完成自我生长繁殖的病毒,广泛分布于任何环境中。噬菌体对耐药菌具有高度特异性,能够特异性感染杀死其目的宿主菌。因此,应用噬菌体控制A.caviae引起的疾病具有重要意义。此外,噬菌体的分离途径简单,研发周期短,所需成本低。治疗过程中所需剂量较少,进入动物机体能够快速遍布全身,具有少量高效的优点。在杀灭病原菌的同时,噬菌体还具有清除生物被膜的作用。噬菌体凭借各种优点使其在治疗细菌感染尤其是耐药菌感染方面具有重要的潜力。综上,本研究以耐药A.caviae AC-CY为宿主菌,从长春市污水中分离出一株裂解性噬菌体vB＿AceP＿PAc。透射电镜下观察到为有尾噬菌体目成员,其最佳MOI为1;一步生长曲线结果表明,该噬菌体潜伏期为30 min,平稳期为80 min;在pH 6-9和温度4℃-50℃范围内能保持相对稳定的活性;对紫外线敏感,并且对乙醇、次氯酸钠类化学类试剂也具有敏感性;此外对宿主菌生长的生物被膜也具有一定清除能力,可以在4℃冰箱可长期储存。噬菌体vB＿AceP＿PAc的全基因组测序分析发现全长大小为123,933 bp,为线性的双链DNA,其中G+C含量35.73%,共编码213个预测开放阅读框(ORF),ORF所编码的蛋白大小区间为3.06 k Da到131.39 k Da,其中29个ORF为具有一定功能的蛋白。NCBI上的比对分析结果显示仅有9株噬菌体(Aeromonas phage phi A047、Aeromonas phage phi A009、Aeromonas phage phi A019、Aeromonas phage2L372X、Aeromonas phage 2L372D、Aeromonas phage 4L372D、Aeromonas phage4L372XY、Pseudaeromonas phage vB＿Ppe M＿KLEP7、Aeromonas phage phi A005)与vB＿AceP＿PAc具有不同程度的相似(92.03%-76.39%),并且覆盖率均在50%以下。通过构建系统发育树也表明,噬菌体vB＿AceP＿PAc单独一支,与其他噬菌体亲缘性相对较远,可能为一株新的噬菌体。其基因组具有多个功能模块(结构组成蛋白模块、裂解功能模块以及生命活动功能模块),不含有溶原性模块,并且不含有毒力因子及耐药基因,在基因水平上具有安全性,具备治疗的潜力。测定了A.caviae AC-CY对小鼠的半数致死量(LD)为2.0×10CFU/只。噬菌体治疗结果显示,噬菌体治疗组的小鼠存活率与对照组相比提高了30%。RT-qPCR结果表明vB＿AceP＿PAc能够减少促炎因子的表达,进一步通过病理切片表明vB＿AceP＿PAc能够减缓组织炎性病症。综上,vB＿AceP＿PAc可以有效治疗由耐药菌引起的小鼠肠道感染,为治疗豚鼠气单胞菌感染奠定了一定基础。

关键词：豚鼠气单胞菌噬菌体基因组学分析噬菌体治疗

豚鼠气单胞菌噬菌体vB＿AceP＿PAc的安全性及代谢动力学的研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

豚鼠气单胞菌噬菌体vB＿AceP＿PAc的安全性及代谢动力学的研究

作者：朱子山吉林农业大学

学位级别：硕士

由于抗生素的不合理不规范应用,导致细菌产生耐药性,新的抗生素的研发速度远低于细菌产生耐药性的速度,因此,迫切需要发现一种替代抗生素治疗的疗法。噬菌体可以高效、特异地裂解细菌,与抗生素的作用机制不同,是新型的抗菌物质,可被用... 详细信息

由于抗生素的不合理不规范应用,导致细菌产生耐药性,新的抗生素的研发速度远低于细菌产生耐药性的速度,因此,迫切需要发现一种替代抗生素治疗的疗法。噬菌体可以高效、特异地裂解细菌,与抗生素的作用机制不同,是新型的抗菌物质,可被用于抗生素替代疗法。但由于噬菌体是否会刺激机体产生抗体,产生的抗体是否会对噬菌体治疗产生影响,该噬菌体在体内分布代谢的特点是怎样的,这些都是我们需要解决的问题。基于以上问题,本试验利用实验室分离并保存的一株对豚鼠气单胞菌具有高效裂解活性的噬菌体,探索噬菌体vB＿AceP＿PAc在小鼠体内的安全性,以及在体内的代谢动力学进行评价。通过对其安全性和代谢动力学的研究,为其应用于治疗豚鼠气单胞菌的感染提供依据。首先,我们连续7 d腹腔注射噬菌体vB＿AceP＿PAc(1.0×10 PFU/m L),并且通过小鼠行为状态和体重变化、血常规、血生化、细胞因子的分泌、主要器官H&E染色来评价噬菌体vB＿AceP＿PAc(1.0×10 PFU/m L)对小鼠是否安全。收集7 d饲喂小鼠的粪便进行16S r RNA测序,从Alpha多样性指数、Beta多样性和物种丰富度分析来评价噬菌体对小鼠肠道菌群的影响。结果发现所有小鼠期间内状态良好,无异常行为表现;在血常规和血生化指标中发现,试验组白细胞数目和淋巴细胞百分比高于对照组,但差异不显著(p>0.05),试验组丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、总蛋白、胆固醇、肌酐和尿素含量无显著变化(p>0.05),结果表明,连续注射噬菌体vB＿AceP＿PAc不会对肝脏和肾脏造成损伤;通过ELISA试剂盒检测在注射7 d后小鼠血清中IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α、TGF-β、IFN-γ的变化,试验组IL-10略有上升,但差异不显著(p>0.05),其他细胞因子与对照组无明显差异;对注射期内小鼠的主要器官(肝脏、脾脏、肾脏和肠)进行H&E染色观察,试验期内主要器官没有发现炎性细胞浸润,细胞皱缩等现象,说明试验期内注射噬菌体vB＿AceP＿PAc并未对小鼠机体主要器官造成损伤;对小鼠粪便中的细菌进行16S r RNA测序分析,多样品比较分析结合PCo A分析结果表明,试验组样本分布相对聚集,物种组成结构相似,群落结构相似度高;而试验组与对照组样本的距离较远,菌群结构差异显著,说明试验组和对照组中小鼠肠道菌群结构产生了不同的特征。物种相对丰度属分类水平上,试验组提高了乳杆菌属(Lactobacillus)、Muribaculaceae、葡萄球菌属(Staphylococcus)的相对丰度,而降低了毛螺菌属NK4A136组(Lachnospiraceae＿NK4A136＿group)的相对丰度。为了探究噬菌体vB＿AceP＿PAc是否会产生中和抗体及其抗体对治疗效果的影响,对小鼠单次腹腔注射噬菌体vB＿AceP＿PAc(1.0×10 PFU/m L),通过ELISA试剂盒检测0、1、3、5、7、14 d小鼠血清中Ig M、Ig G和Ig E的分泌水平。Ig M抗体在注射噬菌体vB＿AceP＿PAc后的第1d就可以检测到,并在第3 d检测到最高滴度;Ig G抗体在注射后噬菌体vB＿AceP＿PAc的第1 d产生,并在第7 d达到最高滴度,第7 d中试验组产生的Ig G抗体极显著高于对照组(p菌体vB＿AceP＿PAc(1.0×10 PFU/m L)体外孵育杀菌实验表明,抗体效价最高时的血清抗体会降低噬菌体的体外杀菌效果。在注射噬菌体vB＿AceP＿PAc(1.0×10PFU/m L)第7 d时,对小鼠攻毒后进行治疗,试验结果表明,试验组小鼠存活率为80%;肠道细菌载量试验发现,试验组的肠道细菌载量与正常治疗组在1 h和6 h时无显著性差异(p>0.05),第24 h试验组肠道细菌载量显著高于正常治疗组(p菌体vB＿AceP＿PAc的代谢动力学,对小鼠单次腹腔注射噬菌体vB＿AceP＿PAc(1.0×10PFU/m L),通过双层平板法检测肝脏、脾脏、肾脏、肠和外周血中的噬菌体vB＿AceP＿PAc的浓度,结果发现小鼠经腹腔注射给药后噬菌体很快分布于肝脏、脾脏、肾脏、肠和外周血中,0.5 h即可在这些组织和外周血中检测到活性噬菌体,其中外周血含量在8h达到峰值,约为5.08×10PFU/m L,注射后24 h,各组织及外周血中的噬菌体vB＿AceP＿PAc浓度均明显降低。注射后48 h,外周血中活性噬菌体vB＿AceP＿PAc完全消失。72 h时,所有小鼠的被检组织中均无活性噬菌体vB＿AceP＿PAc存在。本研究将为噬菌体vB＿AceP＿PAc作为治疗豚鼠气单胞菌感染提供实验基础和数据支持。

关键词：豚鼠气单胞菌噬菌体安全性抗体代谢动力学治疗

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

鸡源豚鼠气单胞菌的分离鉴定及药敏试验

黑龙江畜牧兽医 2023年第10期 96-101,140页

作者：赵桂新张闫白和平陶勇刘畅张志强吴同垒史秋梅河北科技师范学院河北省预防兽医学重点实验室河北秦皇岛066604 河北省燕山农业特色产业技术研究院河北秦皇岛066604 河北省肉鸡养殖及加工技术创新中心河北承德068250

2021年7月份,河北省昌黎县某蛋鸡场130日龄左右海兰褐蛋鸡发病,主要临床症状为眼睑肿胀且有干酪样渗出物,肛门粘有绿色稀便,剖检可见腿部肌肉组织溶解和腹腔积液。为了查明感染的病原,试验采集病鸡的眼睑干酪样渗出物、气管黏液、腹腔... 详细信息

2021年7月份,河北省昌黎县某蛋鸡场130日龄左右海兰褐蛋鸡发病,主要临床症状为眼睑肿胀且有干酪样渗出物,肛门粘有绿色稀便,剖检可见腿部肌肉组织溶解和腹腔积液。为了查明感染的病原,试验采集病鸡的眼睑干酪样渗出物、气管黏液、腹腔积液及腿部深层肌肉病变组织,进行细菌的分离纯化、形态学观察、革兰氏染色镜检、生化鉴定、16S rRNA基因PCR鉴定,确定感染病原菌种类;对分离纯化的病原菌采用Kirby-Bauer纸片扩散法进行抗生素敏感性试验,采用牛津杯法进行22种中草药敏感性试验,同时对22种中草药提取液进行体外最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)的测定;对分离纯化的病原菌进行毒力基因检测,应用Balb/c小鼠进行致病性试验。结果表明:经培养,在绵羊血琼脂培养基上可见边缘整齐、光滑、湿润、呈β溶血的灰色菌落,革兰氏染色可见散在或成对存在的革兰氏阴性短杆菌,与豚鼠气单胞菌形态特征相似,将分离菌株命名为TSQDBJ-1;其生化特性与豚鼠气单胞菌符合率达99%,核苷酸相似性达99.7%;分离菌携带丝氨酸蛋白酶(Ahp)、细胞毒性肠毒素(Act)两种毒力基因;对头孢曲松、乙酰甲喹、头孢噻呋敏感;对苏木、五味子、乌梅、五倍子、诃子、石榴皮提取液的MIC为7.8~15.6 mg/mL,MBC为7.8~31.2 mg/mL;接种该菌菌液的小鼠在第4~6天全部死亡。说明该分离菌为鸡源豚鼠气单胞菌,且具有潜在的致病性。

关键词：豚鼠气单胞菌生化鉴定毒力基因药敏试验致病性试验

红鲫豚鼠气单胞菌的分离鉴定与毒力、耐药特性分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

畜牧与兽医 2023年第1期55卷 101-106页

作者：张建李若铭刘俊彤单晓枫吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118

为探究长春市某观赏鱼水产养殖基地患病红鲫的病原及特性,采用菌落特性、理化特征、16S rDNA以及gyrB测序结果相结合的方法对病鱼肝脏组织中分离得到的1株优势菌株CI0701进行分析鉴定;同时,进行回归动物试验、药物敏感性试验、毒力基因... 详细信息

为探究长春市某观赏鱼水产养殖基地患病红鲫的病原及特性,采用菌落特性、理化特征、16S rDNA以及gyrB测序结果相结合的方法对病鱼肝脏组织中分离得到的1株优势菌株CI0701进行分析鉴定;同时,进行回归动物试验、药物敏感性试验、毒力基因及耐药基因检测。鉴定结果表明,该菌与豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae)聚类,且同源性高达99%以上;后续试验结果发现CI0701具有较强致病性,对红鲫和斑马鱼的半数致死量(LD_(50))分别为4.3×10^(3)、5.56×10 CFU/尾;该菌对红霉素、四环素、新霉素、氨苄西林、环丙沙星等12种药物耐药,属于多重耐药菌;携带溶血素(hly)、气溶素(aer)、细胞毒性肠毒素(act)、细胞兴奋性肠毒素(alt)、脂肪酶(Lip)、丝氨酸蛋白酶(Ser)和鞭毛蛋白(fla)7种毒力基因;携带氨基糖苷类[ant(3″)-Ia]、四环素类(tetA)、大环内酯类(ermB)、喹诺酮类(qnrS)和β-内酰胺类(bla_(TEM))5种耐药基因。本研究可以为红鲫携带豚鼠气单胞菌的分离鉴定以及治疗提供一定的理论基础。

关键词：豚鼠气单胞菌红鲫毒力耐药

查干湖鲢源豚鼠气单胞菌分离鉴定及生物学特性研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

动物医学进展 2022年第2期43卷 41-47页

作者：刘长宇田佳鑫张洋徐雪彬钱爱东单晓枫刘艳辉吉林农业大学动物医学学院动物科学技术学院吉林长春130118 吉林省水产科学研究院吉林长春130033

为了探讨2020年初吉林省查干湖分支甩湾子出现鲢大面积死亡现象的原因,从发病鲢中分离纯化出1株具有生长优势的菌株,并对分离菌株进行细菌形态观察和生理生化试验,用16S rDNA和管家基因的序列分析进行分子水平鉴定及系统进化树分析,之... 详细信息

为了探讨2020年初吉林省查干湖分支甩湾子出现鲢大面积死亡现象的原因,从发病鲢中分离纯化出1株具有生长优势的菌株,并对分离菌株进行细菌形态观察和生理生化试验,用16S rDNA和管家基因的序列分析进行分子水平鉴定及系统进化树分析,之后对分离株进行携带毒力基因情况、生长曲线测定、人工感染试验及药敏试验。结果显示,分离菌株为革兰氏阴性,鼠李糖、卫矛醇半固体、ONPG、甘露醇、丙二酸盐、阿拉伯糖、乳糖、赖氨酸脱羧酶、氨基酸脱羧酶、明胶为阳性。综合生理生化试验、16S rDNA及管家基因的鉴定,可判断分离株隶属于豚鼠气单胞菌。通过对分离菌株毒力基因PCR结果表明,分离菌株携带7种毒力基因,其对斑马鱼以及鲢的半数致死量分别为2.51×10^(2) CFU和2×10^(4) CFU,证明其具有强致病性。分离菌对青霉素、苯唑西林、氨苄西林、羧苄西林、头孢氨苄、米诺环素、头孢他啶、克林霉素、麦迪霉素、万古霉素、头孢拉定、头孢唑啉耐药,说明属于多重耐药菌株。

关键词：豚鼠气单胞菌分离鉴定毒力基因药敏试验

四种免疫佐剂对豚鼠气单胞菌AC-CY株灭活疫苗免疫效果的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

四种免疫佐剂对豚鼠气单胞菌AC-CY株灭活疫苗免疫效果的影响

作者：贾凡吉林农业大学

学位级别：硕士

近年来,由豚鼠气单胞菌侵染水生动物的报道逐渐增多,给水产养殖带来了严重威胁。由于当今对该细菌引发疾病的治疗仍处于使用化学药物的阶段,而大量使用不同抗生素则导致病原菌严重耐药,进而造成食品安全问题。疫苗的使用则不仅能有效预... 详细信息

近年来,由豚鼠气单胞菌侵染水生动物的报道逐渐增多,给水产养殖带来了严重威胁。由于当今对该细菌引发疾病的治疗仍处于使用化学药物的阶段,而大量使用不同抗生素则导致病原菌严重耐药,进而造成食品安全问题。疫苗的使用则不仅能有效预防疾病,且可以缓解上述问题。如果佐剂与灭活疫苗联用,则能够事半功倍的发挥疫苗效力,更好的抵御病原菌的侵袭。鉴于尚未出现豚鼠气单胞菌佐剂灭活苗的报道,本研究将已鉴定的豚鼠气单胞菌AC-CY株制备成灭活疫苗,并选用氢氧化铝凝胶、葡聚糖、黄芪和蜂胶作为疫苗佐剂,分别与灭活疫苗配伍免疫鲫鱼,在根据全面考虑佐剂来源、使用成本、运用方式和途径、安全性等诸多情况下,筛选出更适宜于大量生产的豚鼠气单胞菌灭活疫苗佐剂。本研究探讨将四种不同免疫佐剂与灭活疫苗配伍,对鲫鱼血清生化指标、血清抗体效价、白细胞吞噬活性、组织免疫相关细胞因子表达量等免疫指标的影响。将各佐剂与灭活疫苗按照1:1的比例配伍制成佐剂灭活苗,同时设立一个空白对照组和一个无佐剂灭活苗实验组。在饲喂的第1d和第14d进行腹腔免疫注射,于首次免疫前0d,免疫后第7d、14d、21d、28d和35d随机挑选不同鲫鱼进行血液和组织器官的采集用于免疫相关指标检测。研究结果表明,各免疫组鲫鱼血清中ACP、AKP、C3、C4、CAT、Ig M、LZM、SOD表达量相较对照组均有显著(p豚鼠气单胞菌的感染,且佐剂组要更优于疫苗组;细菌载量检测中各免疫组均能有效抑制豚鼠气单胞菌在鲫鱼体内增值并可以降低系统性器官中的细菌载量。最终结果表明鲫鱼接种灭活疫苗能使鱼体产生免疫保护力,铝胶、葡聚糖、黄芪多糖、蜂胶作为佐剂均能提高鲫鱼的免疫能力和对豚鼠气单胞菌AC-CY株的抗感染能力,黄芪多糖组与蜂胶组鲫鱼的整体免疫能力最强,其次为葡聚糖组,铝胶组在各项结果中略低于前者。综上,筛选出更适宜于大量生产的豚鼠气单胞菌灭活疫苗佐剂,可更有效的预防豚鼠气单胞菌感染,为豚鼠气单胞菌灭活疫苗佐剂的应用方面提供更加有力的数据支持及参考。

关键词：豚鼠气单胞菌灭活疫苗铝胶葡聚糖黄芪多糖蜂胶

维氏气单胞菌和豚鼠气单胞菌二联灭活疫苗制备及其对鲫免疫效果的评价

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

维氏气单胞菌和豚鼠气单胞菌二联灭活疫苗制备及其对鲫免疫效果的...

作者：索同号吉林农业大学

学位级别：硕士

近年来,关于气单胞菌感染水生动物的报道屡见不鲜,对水产养殖行业造成了严重的经济损失。之前,对于气单胞菌引起的水生动物疾病大多使用抗生素或化学药物进行预防或是治疗,这不仅对水环境造成了严重的污染,多次使用还会增加养殖动物的... 详细信息

近年来,关于气单胞菌感染水生动物的报道屡见不鲜,对水产养殖行业造成了严重的经济损失。之前,对于气单胞菌引起的水生动物疾病大多使用抗生素或化学药物进行预防或是治疗,这不仅对水环境造成了严重的污染,多次使用还会增加养殖动物的耐药性。相比之下,细菌灭活疫苗不仅使用简单便捷,安全性高,而且绿色无污染,生产成本低,非常适合大面积推广使用。我国的水产疫苗虽然起步较晚,但是随着科研工作者们的不懈努力,也取得了较大的成就。目前我国有关水产疫苗的研究大多集中在单价疫苗,虽然保护率高,但是保护对象单一,只能预防单一的病原菌引发的疾病,而水产动物发病大多都是多种病原菌联合致病,本研究将实验室分离保存的维氏气单胞菌菌株和豚鼠气单胞菌菌株用福尔马林进行灭活,制备成二联疫苗,并将疫苗的浓度设成低浓度、中浓度和高浓度三个不同的梯度。采用腹腔注射的方式免疫鲫鱼,而后进行攻毒试验测定疫苗免疫保护率。首先,对菌液灭活时的温度和福尔马林浓度进行了探索,选取最佳灭活温度为28℃,福尔马林终浓度为0.2%,灭活时间12 h。在确定安全性后,将制备的灭活苗用PBS调节至三种不同的浓度:2.0×10CFU/m L、4.0×10CFU/m L和8.0×10CFU/m L。按浓度的不同将疫苗分为三组,同时设置空白对照组。分别在免疫前(0 d),免疫后第7 d、14 d(第二次免疫)、21 d、28 d、35 d随机挑选一定数量鲫鱼麻醉后进行尾静脉采血,采集的血液放入4℃冰箱过夜,经离心后吸取上层血清,用ELIAS试剂盒测定血清中SOD、CAT、Ig M、AKP、LZM、ACP、补体C3、补体C4的含量。采集肝、脾、肾、肠组织,进行实时荧光定量PCR检测。在第35 d进行攻毒试验,测定疫苗免疫保护率。结果显示,在第一次免疫后,所有疫苗组血清中均能产生高水平的Ig M抗体,并在第二次加强免疫后持续升高。同时血清中SOD、CAT、AKP、LZM、ACP、C3、C4的含量也在第一次免疫后显著升高,并在第二次加强免疫后持续上升,在21 d时达到最大值。PBS组在整个免疫周期内无明显变化,与疫苗组形成了显著性差异(P气单胞菌的保护率最高,达到了75%,低浓度与高浓度组对维氏气单胞菌的保护率相同,均为70%。对豚鼠气单胞菌保护率最高的是中浓度组,保护率为80%,保护率最低的是高浓度组,保护率为70%。本试验探究了不同的疫苗浓度对鲫鱼免疫保护率的影响,旨在为二联疫苗的制备提供基础的理论依据。

关键词：鲫鱼维氏气单胞菌豚鼠气单胞菌灭活疫苗二联疫苗