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豚鼠气单胞菌抗独特型单克隆抗体的制备和初步鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第5期22卷 644-645页

作者：唐旭陈瑞于辉金晓航师建国黄威权第四军医大学组织学与胚胎学教研室陕西西安710032 第四军医大学病理学教研室陕西西安710032

目的:制备豚鼠气单胞菌(Aeromonascaviae)抗独特型单克隆抗体(AIdmAb)并进行鉴定。方法:以具有中和作用的抗豚鼠气单胞菌mAb1F1免疫BALB/c小鼠,采用常规杂交瘤技术制备豚鼠气单胞菌AIdmAb。用ELISA法对mAb的效价及其模拟豚鼠气单胞菌的... 详细信息

目的:制备豚鼠气单胞菌(Aeromonascaviae)抗独特型单克隆抗体(AIdmAb)并进行鉴定。方法:以具有中和作用的抗豚鼠气单胞菌mAb1F1免疫BALB/c小鼠,采用常规杂交瘤技术制备豚鼠气单胞菌AIdmAb。用ELISA法对mAb的效价及其模拟豚鼠气单胞菌的特性进行鉴定。结果:获得4株能稳定分泌豚鼠气单胞菌AIdmAb的杂交瘤细胞株,分别命名为1E12、4F6、6G6、7C1。经测定杂交瘤细胞腹水mAb效价为10-3～10-4。竞争抑制实验结果表明4株AIdmAb均能不同程度地抑制豚鼠气单胞菌与兔抗豚鼠气单胞菌多克隆抗体的结合。制备杂交瘤细胞腹水的BALB/c小鼠血清均能与豚鼠气单胞菌反应,其效价为1∶50～1∶800。结论:成功地制备了豚鼠气单胞菌抗独特型mAb的杂交瘤细胞株,为该菌的抗独特型疫苗制备研究奠定了基础。

关键词：抗独特型单克隆抗体疫苗豚鼠气单胞菌杂交瘤

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中华绒螯蟹豚鼠气单胞菌的分离和鉴定

浙江大学学报（农业与生命科学版） 2001年第6期27卷 677-681页

作者：徐海圣黄立峰王淑霞浙江大学动物科学系浙江杭州310029 浙江省水产干部学校浙江杭州310012 浙江大学生物科学系浙江杭州310012

对杭州转塘患“抖抖病”的中华绒螯蟹进行了病原的分离和鉴定 ,从病蟹体内分离到两株病原菌 ,均属革兰氏阴性杆菌 ,单极生鞭毛 ,运动 ,兼性厌氧 ,发酵葡萄糖产酸不产气 ,氧化酶、七叶苷、过氧化氢酶阳性 ,能还原硝酸盐等 ,其形态特征及... 详细信息

对杭州转塘患“抖抖病”的中华绒螯蟹进行了病原的分离和鉴定 ,从病蟹体内分离到两株病原菌 ,均属革兰氏阴性杆菌 ,单极生鞭毛 ,运动 ,兼性厌氧 ,发酵葡萄糖产酸不产气 ,氧化酶、七叶苷、过氧化氢酶阳性 ,能还原硝酸盐等 ,其形态特征及生理生化反应与豚鼠气单胞菌基本相同 ,故鉴定为豚鼠气单胞菌 .人工注射感染健康蟹后 ,均在 3d内死亡 ,死亡率为 10 0 %,证实豚鼠气单胞菌为中华绒螯蟹的致病菌 .药敏试验结果表明 ,此病原菌对链霉素、卡那霉素、新霉素、环丙沙星、氟哌酸、氯霉素、庆大霉素、妥布霉素、氟嗪酸、壮观霉素、复达欣、头孢呋肟、菌必治、萘啶酸、呋喃妥因等药物高度敏感 .

关键词：中华绒螯蟹豚鼠气单胞菌病原分离鉴定

豚鼠气单胞菌超声灭活PEG结合疫苗的制备及免疫效果

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浙江农业学报 2010年第2期22卷 177-182页

作者：宋颖关万春易鹏邓婕潘长旺常彦祥温州医学院浙江温州325035

以超声波瞬间高温、高压及剪切力作为灭活方式,用聚乙二醇(PEG)作为超声介质及疫苗载体,将豚鼠气单胞菌制成PEG结合疫苗。该疫苗与传统疫苗分别经腹腔注射免疫接种锦鲤成鱼,经检测血细胞吞噬百分率、吞噬指数、抗菌活力、抗体效价及免... 详细信息

以超声波瞬间高温、高压及剪切力作为灭活方式,用聚乙二醇(PEG)作为超声介质及疫苗载体,将豚鼠气单胞菌制成PEG结合疫苗。该疫苗与传统疫苗分别经腹腔注射免疫接种锦鲤成鱼,经检测血细胞吞噬百分率、吞噬指数、抗菌活力、抗体效价及免疫保护力等指标,评价疫苗效果。结果表明PEG6000作为结合剂制备的疫苗其各指标和绝对值全部高于其他试验组。PEG6000疫苗免疫保护力相比也最高,达到80%,高于传统灭活疫苗26.7个百分点,说明PEG6000作为结合剂制备的疫苗效果最好。

关键词：豚鼠气单胞菌超声灭活 PEG结合疫苗免疫保护力

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豚鼠气单胞菌的分离、鉴定及药敏试验

黑龙江畜牧兽医 2015年第7期 178-180页

作者：吴亚文张玉玲杨佳冰李知新李志红王玉梅张和平张学军王晓亮王磊宁夏动物疾病预防控制中心银川750004

为了弄清宁夏某鱼塘草鱼大批死亡的原因,试验采用常规细菌分离技术、生化试验、药敏试验、动物试验及人工感染试验对该鱼塘内2条死亡草鱼的脏器进行了病原的分离与鉴定。结果表明:该致病菌为豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae),对草鱼和小... 详细信息

为了弄清宁夏某鱼塘草鱼大批死亡的原因,试验采用常规细菌分离技术、生化试验、药敏试验、动物试验及人工感染试验对该鱼塘内2条死亡草鱼的脏器进行了病原的分离与鉴定。结果表明:该致病菌为豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae),对草鱼和小白鼠有很强的致病性,对阿米卡星、头孢吡肟、头孢他啶、环丙沙星及头孢噻肟敏感。

关键词：草鱼豚鼠气单胞菌分离鉴定药敏试验动物试验人工感染试验

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豚鼠气单胞菌致结直肠溃疡菌血症1例

解放军医学院学报 2022年第9期43卷 1005-1006,F0003页

作者：安萌吴鹏白鹏林香春北京大学国际医院北京102206

结肠溃疡为消化科常见疾病,病因包括感染、免疫、药物、肿瘤等。部分病例病因鉴别困难。因粪便培养阳性率有限,感染致结肠溃疡的病原学常难以明确。本例患者为免疫功能低下老年人,表现为血便、关节囊肿合并感染,肠镜可见结肠溃疡,最终... 详细信息

结肠溃疡为消化科常见疾病,病因包括感染、免疫、药物、肿瘤等。部分病例病因鉴别困难。因粪便培养阳性率有限,感染致结肠溃疡的病原学常难以明确。本例患者为免疫功能低下老年人,表现为血便、关节囊肿合并感染,肠镜可见结肠溃疡,最终通过血高通量检测明确为豚鼠气单胞菌感染,抗感染后好转。本病例提示临床医生怀疑结肠溃疡为感染所致时,除沙门菌、志贺菌、大肠埃希菌外,应考虑到豚鼠气单胞菌可能,可采用高通量检测方式进一步明确病原。

关键词：豚鼠气单胞菌结直肠溃疡菌血症高通量基因检测老年人 80岁以上

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豚鼠气单胞菌研究进展

动物医学进展 2024年第6期45卷 106-110页

作者：袁中华宋海超刘俊彤康元环孙武文单晓枫吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118

豚鼠气单胞菌属于气单胞菌属,在自然界中通过食物和水广泛传播,是人、动物和水生生物共患的条件性病原菌,严重危害人类身体健康,同时是造成多种淡水鱼疾病的主要原因,给水产养殖业造成了巨大的威胁。目前,对豚鼠气单胞菌发展的研究,学... 详细信息

豚鼠气单胞菌属于气单胞菌属,在自然界中通过食物和水广泛传播,是人、动物和水生生物共患的条件性病原菌,严重危害人类身体健康,同时是造成多种淡水鱼疾病的主要原因,给水产养殖业造成了巨大的威胁。目前,对豚鼠气单胞菌发展的研究,学界很少从系统去概述,论文从豚鼠气单胞菌的病原学、临床特征、流行现状、致病机理及防治等几个方面的最新研究进展进行概述,旨在为其防治及研究提供参考。

关键词：豚鼠气单胞菌流行病学临床特征致病机理防治

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豚鼠气单胞菌—病毒的分离与鉴定

豚鼠气单胞菌—病毒的分离与鉴定

作者：邓敬轩华中师范大学

学位级别：硕士

在自然水体中分离得到一对野生并具生态优势噬菌体—宿主系统,结合其形态,通过16SrDNA鉴定其宿主为豚鼠气单胞菌。噬菌体属烈性噬菌体,经蔗糖密度梯度离心纯化后电镜观察头部直径约50nm,噬菌体的裂解周期约120min,释放量在约为125。其... 详细信息

在自然水体中分离得到一对野生并具生态优势噬菌体—宿主系统,结合其形态,通过16SrDNA鉴定其宿主为豚鼠气单胞菌。噬菌体属烈性噬菌体,经蔗糖密度梯度离心纯化后电镜观察头部直径约50nm,噬菌体的裂解周期约120min,释放量在约为125。其核酸分子量约23k,经过回收酶切片段并克隆得到病毒的部分序列约8k,该序列与已知病毒布尔克氏菌噬菌体bacp43的gp04和gp16蛋白在氨基酸水平上有较高的相似性。结合电镜图片和酶切结果,判定为肌尾病毒。在建立了一整套分离水体病噬菌体—病毒系统的分离鉴定方法的同时,豚鼠气单胞菌作为重要的鱼类条件致病菌,该噬菌体—宿主系统也可以用来做鱼类疾病研究和防治的材料。

关键词：噬菌体-宿主系统豚鼠气单胞菌分离鉴定

豚鼠气单胞菌胶体金免疫层析快速检测试纸条的研制

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豚鼠气单胞菌胶体金免疫层析快速检测试纸条的研制

作者：辛志明福建农林大学

学位级别：硕士

豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae)是水产养殖常见的细菌性病原体,豚鼠气单胞菌病具有流行广、发病快、死亡率高等特点,常常造成养殖渔业的巨大经济损失,严重危害渔业及其它水产业的发展。目前国内外有关豚鼠气单胞菌鱼病的的诊断主要依... 详细信息

豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae)是水产养殖常见的细菌性病原体,豚鼠气单胞菌病具有流行广、发病快、死亡率高等特点,常常造成养殖渔业的巨大经济损失,严重危害渔业及其它水产业的发展。目前国内外有关豚鼠气单胞菌鱼病的的诊断主要依靠临诊病理观察及细菌学鉴定,两种方法在准确性及检测速度上均有一定限制。鉴于此,本文采用柠檬酸三钠还原氯金酸制备胶体金颗粒,选择20nm的胶体金颗粒,标记抗豚鼠气单胞菌单克隆抗体并制备胶体金垫。将胶体金垫、喷涂有豚鼠气单胞菌兔多克隆抗体和羊抗鼠抗体的硝酸纤维素膜、样品垫及吸收垫等组装成免疫层析试纸条,建立豚鼠气单胞菌的快速检测方法。用灭活细菌与血清混合的模拟样本测定试纸条的特异性、灵敏度。结果显示,试纸条对嗜水气单胞菌、温和气单胞菌等7种常见病原菌均无交叉反应,与豚鼠气单胞菌显示特异反应,检测灵敏度为***,显示时间小于5min。研制的豚鼠气单胞菌胶体金免疫层析检测试纸条具有快速、简便、特异性高、适用于基层临床生产推广应用。为豚鼠气单胞菌病的检测及防治提供新的技术方法。具体实验方法及结果如下: (1)通过动物免疫、细胞融合、筛选、克隆化及利用ELISA检测技术,制备并鉴定抗豚鼠气单胞菌的单克隆抗体(mAb)。共得到3株能稳定分泌mAb的细胞株,分别命名为:0E10、1C4和1F10。亚类鉴定显示:0E10属于IgG1,1C4和1F10属于IgG2a,Balb/c小鼠腹水中mAbs效价范围为2.56×10～5.12×10:交叉实验结果显示各株单克隆抗体与气单胞菌属内另两种常见致鱼病性细菌嗜水气单胞菌、温和气单胞菌,以及其他四种常见致病性细菌鳗弧菌、迟缓爱德华菌、创伤弧菌、溶藻弧菌等均不发生交叉反应,表明所制备的各株单克隆抗体均具有较好的特异性,可用于豚鼠气单胞菌的检测及进一步的研究。 (2)采用柠檬酸三钠法制备了20nm的胶体金颗粒,并对1F10抗豚鼠气单胞菌单克隆抗体进行胶体金颗粒标记,形成金标抗体。金标抗体喷涂在玻璃纤维素膜上,干燥制备释放性好、生物活性高的金标抗体结合垫。 (3)将抗豚鼠气单胞菌多克隆抗体与羊抗鼠抗体分别喷吐在硝酸纤维素膜的检测线和质控线位置,并对空白位点封闭,干燥,制备免疫硝酸纤维素膜。 (4)试纸条的组装:将金标抗体结合垫、免疫硝酸纤维素膜、样品垫、吸收垫依次重叠粘在不干胶底板上,裁成小条,密封包装成免疫层析试纸条。 (5)试验条的检测应用:在样品垫上滴加样品,样品在毛细吸附作用下向前层析迁移,在层析迁移的过程完成免疫学反应。若样品为阳性样品,则在检测线位置形成多克隆抗体—豚鼠气单胞菌—金标单克隆抗体免疫复合物并显色,质控线位置形成羊抗鼠抗体—金标单克隆抗体免疫复合物并显色:若样品为阴性则检测线不形成免疫复合物不显色,质控线仍然显色;若质控线不显色则试纸条失效。综上所述,本研究利用杂交瘤技术制备出多株抗豚鼠气单胞菌的单克隆抗体,对1F10单克隆抗体进行了胶体金标记,建立了金标快速检测方法,制备了豚鼠气单抱菌胶体金免疫层析快速检测试纸条。豚鼠气单胞菌胶体金免疫层析快速检测试纸条的研制在国内外迄今未见报道,本文首次建立了该方法。

关键词：豚鼠气单胞菌杂交瘤技术单克隆抗体酶联免疫吸附试验胶体金免疫层析

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豚鼠气单胞菌鞭毛蛋白A基因的克隆与表达

豚鼠气单胞菌鞭毛蛋白A基因的克隆与表达

作者：秦玉广山东师范大学

学位级别：硕士

本研究以上海海洋大学分离自患出血败血病的杂交鲟的豚鼠气单胞菌XL2-T为实验菌株,以三个不同地域、来源的豚鼠气单胞菌株为对照,对其进行了相关细菌学(Bacteriology)、病原学(Pathology)研究和(端生)单鞭毛(Single Polar flagella)蛋白... 详细信息

本研究以上海海洋大学分离自患出血败血病的杂交鲟的豚鼠气单胞菌XL2-T为实验菌株,以三个不同地域、来源的豚鼠气单胞菌株为对照,对其进行了相关细菌学(Bacteriology)、病原学(Pathology)研究和(端生)单鞭毛(Single Polar flagella)蛋白A(flagellin A简称FlaA)基因(flaA)的克隆和原核与真核表达。为今后豚鼠气单胞菌亚单位基因工程疫苗开发和在水产上的应用进行了有益的探索。参照相关文献,应用报道引物扩增了不同豚鼠气单胞菌flaA基因糖基化核心序列,经分析,近N端氨基酸序列均为NAQRNLM;近C端均为QANQRC极为保守,中间为糖基化可变区。查阅Genebank,将公布的相关豚鼠气单胞菌鞭毛基因应用megalign采用CLUSTAL“W”method进行alignment,设计简并引物,扩增得到flaA序列全长,构建了原核重组表达载体pET-28a+flaA和毕赤酵母(Pichia pastoris)分泌型重组表达载体pPIC9K+flaA。将重组表达载体pET-28a+flaA转化大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达重组蛋白,并免疫新西兰兔制备抗血清,进行了效价测定及细菌凝集试验。将重组pPIC9K+flaA应用限制性内切酶BglII和SacI,在不同位点线性化,采用电转化法转化毕赤酵母GS115,构建MutS和Mut+重组表达菌株。应用真核细胞诱导表达原核FlaA结构蛋白。研究了豚鼠气单胞菌(Aromonas caviae)的适用培养基和培养条件及保存条件、菌落与细菌形态学、细菌生理生化鉴定、16SrDNA分子鉴定、运动性检测、相关毒力检测、药物敏感性检测,研究的侧重点为细菌鞭毛相关研究,包括鞭毛染色(silver stain和Lefison stain)、端生和侧生鞭毛(polar and lateral flagella)的提取,应用自制兔抗重组FlaA血清(anti-rcFlaA)进行了鞭毛蛋白(flagella)蛋白质印迹和不同来源豚鼠气单胞菌鞭毛提取液的免疫印迹,结果抗血清与不同来源的豚鼠气单胞菌的polar and lateral flagellin的蛋白质印迹均成交叉反应阳性,这说明今后如果以flaA为目的基因,开发基因工程疫苗将对不同来源的豚鼠气单胞菌都具有广谱免疫作用,这一结果进一步得到了应用anti-rcFlaA血清进行细菌凝集试验结果的支持。

关键词：豚鼠气单胞菌细菌学鞭毛蛋白A(FlaA)基因(flaA) 克隆与表达