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谷氨酰胺转移酶对明胶-CaCO3矿物质膜成膜性的影响

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现代食品科技 2014年第5期30卷 18-22页

作者：刘安军王跃猛王稳航郑捷李鑫祝传望朱红天津科技大学食品工程与生物技术举院天津300457

本实验通过向明胶-碳酸钙矿物质膜中添加谷氨酰胺转移酶(TGase),研究了谷氨酰胺转移酶对明胶-碳酸钙矿物质膜特性的影响,对谷氨酰胺转移酶处理前后样品进行厚度、质构、水溶性、水蒸气透过系数、扫描电镜(SEM)、流变性、差示热量扫描(D... 详细信息

本实验通过向明胶-碳酸钙矿物质膜中添加谷氨酰胺转移酶(TGase),研究了谷氨酰胺转移酶对明胶-碳酸钙矿物质膜特性的影响,对谷氨酰胺转移酶处理前后样品进行厚度、质构、水溶性、水蒸气透过系数、扫描电镜(SEM)、流变性、差示热量扫描(DSC)等方法表征。研究结果表明:在成膜溶液中加入谷氨酰胺转移酶(6 U/g)可以使矿物质膜的厚度增加19.69%、成膜液凝胶强度增加17.24%、膜的抗拉强度增加28.05%、断裂伸长率增加21.27%,而水溶性和水蒸气透过率没有显著改变;扫描电镜表明,谷氨酰胺转移酶交联的矿物质膜表面和断面与不加谷氨酰胺转移酶的矿物质膜相比更加粗糙;流变性结果表明,谷氨酰胺转移酶加入后成膜溶液的粘度显著增加;差示热量扫描表明,谷氨酰胺转移酶催化明胶-碳酸钙矿物膜产生了交联。

关键词：谷氨酰胺转移酶明胶碳酸钙矿物质膜

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谷氨酰胺转移酶改性对花生蛋白膜性能的影响

食品与发酵工业 2013年第12期39卷 35-38页

作者：张春红高爽王六强李晨沈阳农业大学食品学院辽宁沈阳110161

采用谷氨酰胺转移酶对花生蛋白进行改性制备花生蛋白膜以提高膜的性能,研究了谷氨酰胺转移酶对花生蛋白膜性能、微观结构、差示扫描热量以及红外光谱的影响。与对照相比,改性花生蛋白膜的拉伸强度、断裂伸长率和阻氧性分别提高了91.69%... 详细信息

采用谷氨酰胺转移酶对花生蛋白进行改性制备花生蛋白膜以提高膜的性能,研究了谷氨酰胺转移酶对花生蛋白膜性能、微观结构、差示扫描热量以及红外光谱的影响。与对照相比,改性花生蛋白膜的拉伸强度、断裂伸长率和阻氧性分别提高了91.69%、53.69%和4.97%;水溶性和水蒸气透过率分别降低了15.12%和了32.85%。改性后,花生蛋白膜的内部孔洞变小,结构更加致密,但热稳定性下降。研究同时表明,谷氨酰胺转移酶主要作用于花生蛋白分子中的羟基及胺基,通过交联作用形成了酰胺基团,并改变了花生蛋白分子原有的二级结构。

关键词：谷氨酰胺转移酶花生蛋白膜改性 DSC 红外

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谷氨酰胺转移酶对大豆分离蛋白膜性能的影响

食品科学 2010年第5期31卷 26-29页

作者：姜燕唐传核温其标张宏梅广东工业大学轻工化工学院广东广州510006 华南理工大学轻工与食品学院广东广州510640

研究注模前酶作用时间对谷氨酰胺转移酶(TGase)改性大豆分离蛋白(SPI)膜性能的影响。在注模之前,将TGase(8U/gSPI)加入到成膜溶液中,分别在磁力搅拌下作用0、30、60、120min,然后注模成膜。利用质构仪检测蛋白膜的机械性能,结合哈克流... 详细信息

研究注模前酶作用时间对谷氨酰胺转移酶(TGase)改性大豆分离蛋白(SPI)膜性能的影响。在注模之前,将TGase(8U/gSPI)加入到成膜溶液中,分别在磁力搅拌下作用0、30、60、120min,然后注模成膜。利用质构仪检测蛋白膜的机械性能,结合哈克流变仪的动态黏弹实验及SDS-PAGE实验进一步分析。注模前适度的酶作用(≤60min)在一定程度上有利于TGase改性的SPI膜机械强度的提高,特别是抗拉强度(TS)值;但是,时间不宜过长,因为注模前的酶作用也会诱导SPI蛋白组分的聚沉反应,从而降低成膜溶液中可溶解蛋白的含量。结果表明,TGase改性SPI膜时,一方面会诱导蛋白交联;另一方面,交联过多又会导致沉淀;在利用TGase提高SPI膜的机械性能时如何把握两者之间的关系,在交联的同时抑制酶促聚沉非常重要。

关键词：谷氨酰胺转移酶蛋白膜改性

谷氨酰胺转移酶对大豆分离蛋白成膜性能的影响

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食品与生物技术学报 2006年第4期25卷 24-28页

作者：姜燕温其标唐传核杨晓泉华南理工大学轻工与食品学院广东广州510641

研究了谷氨酰胺转移酶(TGase)对大豆蛋白膜特性的影响。研究表明:在成膜溶液中加入TGase(4 U/g)可以使膜的抗拉强度增加16.7%,表面疏水性增加39.2%,同时也明显降低了膜的断裂伸长率、水分含量、总可溶性物质量及透光率,但是对水蒸气转... 详细信息

研究了谷氨酰胺转移酶(TGase)对大豆蛋白膜特性的影响。研究表明:在成膜溶液中加入TGase(4 U/g)可以使膜的抗拉强度增加16.7%,表面疏水性增加39.2%,同时也明显降低了膜的断裂伸长率、水分含量、总可溶性物质量及透光率,但是对水蒸气转移速率几无影响。扫描电镜(SEM)显示,酶法交联膜的表面比对照膜略为粗糙,断面却更为均匀致密。SDS-PAGE分析表明,TGase催化SPI产生了共价交联。

关键词：谷氨酰胺转移酶大豆分离蛋白蛋白质膜

谷氨酰胺转移酶对明胶纺丝原液及其纤维的影响

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纺织导报 2017年第6期 62-66页

作者：杨憬逻辑蔡倩董振峰王锐北京服装学院

本论文通过向明胶纺丝原液中添加谷氨酰胺转移酶(TG酶)的方法,制备了环保型明胶纤维,研究了TG酶添加量对明胶纺丝原液及其纤维结构和性能的影响。红外光谱测试结果表明TG酶与明胶分子氨基发生了交联反应;流变结果表明加入TG酶后明胶溶... 详细信息

本论文通过向明胶纺丝原液中添加谷氨酰胺转移酶(TG酶)的方法,制备了环保型明胶纤维,研究了TG酶添加量对明胶纺丝原液及其纤维结构和性能的影响。红外光谱测试结果表明TG酶与明胶分子氨基发生了交联反应;流变结果表明加入TG酶后明胶溶液粘度明显增加;SEM结果表明加入TG酶所制得的纤维结构较为致密;热重分析结果表明TG酶的加入使得明胶热稳定性提高。

关键词：谷氨酰胺转移酶明胶纤维湿法纺丝交联

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谷氨酰胺转移酶对食品中蛋白质改性研究进展

食品工业科技 2017年第7期38卷 381-384页

作者：李斌付桂明刘成梅万茵邹彬童火艳南昌大学食品科学与技术国家重点实验室江西南昌330047 南昌大学食品学院江西南昌330031 南昌大学中德食品工程中心江西南昌330047

谷氨酰胺转移酶是一类可以催化酰基转移反应的酶,能够促进蛋白质分子间发生交联反应,催化蛋白质之间异肽键的形成,并广泛应用于食品加工过程中蛋白质的改性。本文通过查阅近年来国内外研究进展,对谷氨酰胺转移酶的酶来源、酶学性质、酶... 详细信息

谷氨酰胺转移酶是一类可以催化酰基转移反应的酶,能够促进蛋白质分子间发生交联反应,催化蛋白质之间异肽键的形成,并广泛应用于食品加工过程中蛋白质的改性。本文通过查阅近年来国内外研究进展,对谷氨酰胺转移酶的酶来源、酶学性质、酶的催化机理及其对食品蛋白质的改性、在食品中的应用进行了综述。

关键词：谷氨酰胺转移酶食品蛋白质改性

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谷氨酰胺转移酶毕赤酵母高效表达研究

谷氨酰胺转移酶毕赤酵母高效表达研究

作者：李斌南昌大学

学位级别：硕士

谷氨酰胺转移酶(Transglutaminase,TGase,EC 2.***.2.13)是一类可以催化酰基转移反应的酶,能促进蛋白质分子间的发生交联,催化蛋白质之间异肽键的形成,对蛋白质的溶解性、乳化能力、发泡性能和凝胶化作用等功能产生影响,已广泛应用于食品... 详细信息

谷氨酰胺转移酶(Transglutaminase,TGase,EC 2.***.2.13)是一类可以催化酰基转移反应的酶,能促进蛋白质分子间的发生交联,催化蛋白质之间异肽键的形成,对蛋白质的溶解性、乳化能力、发泡性能和凝胶化作用等功能产生影响,已广泛应用于食品加工过程中蛋白质的改性。TGase广泛存在于哺乳动物、植物、鱼类、细菌、真菌、绿藻等生物中,其中研究及应用最为广泛的一类谷氨酰胺转移酶是微生物谷氨酰胺转移酶(Microbial transglutaminase,MTG),主要来源于链霉菌属(***)以及枯草芽孢杆菌属(Bacillus ***)。随着DNA重组技术的发展,通过基因克隆TGase获得高产菌株,成为未来工业化生产TGase的有效手段。毕赤酵母(Pichia Pastoris)表达系统是近年来最为成功的真核表达系统之一。本文利用实验室保藏的枯草芽孢杆菌BFEC301作为出发菌株,利用PCR扩增TGase基因,经过测序后并进行密码子优化,然后将野生型基因TGase以及经过密码子优化的TGop基因分别转入毕赤酵母GS115中,获得重组毕赤酵母。对比密码子优化前后克隆菌株的蛋白表达及酶活,筛选得到一株高产TGase基因的重组毕赤酵母NCSKL-2,并且对其进行了甲醇诱导发酵,经过Ni-NTA His Bind Resin对目的蛋白纯化后得到了电泳纯的TGase,并且研究了其酶学性质。主要研究结果如下:(1)从枯草芽孢杆菌BFEC301中提取基因组DNA,经过PCR扩增TGase基因并且测序正确后,对测序正确的TGase基因进行密码子优化。将野生型TGase基因以及经过密码子优化后的TGase基因分别连接到表达质粒p PIC9K上,电转化进入毕赤酵母GS115中,经过筛选得到组氨酸阳性His、甲醇快速利用Mut表型重组毕赤酵母GS115。最终筛选得到5株含有野生型TGase基因的重组毕赤酵母以及5株含有经过密码子优化后TGop基因的重组毕赤酵母。(2)以构建的10株重组毕赤酵母作为出发菌株,进行甲醇诱导发酵,研究了两种基因制备的重组毕赤酵母的异源蛋白表达量以及酶活,筛选得到了一株高产重组TGase的密码子优化毕赤酵母NCSKL-2号菌株。研究了甲醇浓度、温度、发酵时间对其产生异源蛋白的影响,以确立最优的发酵条件。研究发现在甲醇浓度0.5%(v/v),温度28C,转速250rpm,发酵时间72h时,蛋白表达量最高为244μg/m L,酶活为10.4U/m L,分别比野生型基因重组毕赤酵母提高2.54倍和1.65倍。(3)根据重组毕赤酵母NCSKL-2号菌株的最优发酵条件进行重组TGase的发酵,收集粗酶液经10k Da的超滤膜浓缩后用Ni-NTA His Bind Resin对目的蛋白进行纯化,咪唑洗脱后,透析得到了电泳纯的重组TGase,比酶活从32.09U/mg提高到了285.6U/mg,酶活回收达到了45.73%,纯化倍数达到了8.89倍。研究纯化后重组TGase的酶学性质,如最适反应温度、最适p H、温度稳定性、p H稳定性以及金属离子对酶活性的影响。研究结果表明,重组TGase的最适反应温度为40C,最适反应p H为8.5,在0～50C的温度范围内、p H8.0～9.5的范围内可以保持80%以上酶活。Na和K以及高浓度的Ca、Mn对重组TGase酶活具有促进作用,Li和Mg以及低浓度Ca、Mn对重组TGase酶活具有抑制作用,Zn、Fe和Cu对重组TGase酶活具有强烈的抑制作用。

关键词：谷氨酰胺转移酶密码子优化毕赤酵母克隆表达酶学性质

焦磷酸钠对氧化猪肉肌原纤维蛋白的谷氨酰胺转移酶交联反应及凝胶性能的影响

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食品科学 2020年第2期41卷 15-21页

作者：孙悦耿晓茜张月姝王石石蕊赵虹霏李春强沈阳农业大学食品学院

以猪肉肌原纤维蛋白为研究对象,考察焦磷酸钠(sodium pyrophosphate,TSPP)对微生物谷氨酰胺转移酶(microbial transglutaminase,MTG)催化天然和氧化肌原纤维蛋白交联的程度及后续蛋白凝胶特性的影响。结果表明,肌原纤维蛋白的氧化程度随... 详细信息

以猪肉肌原纤维蛋白为研究对象,考察焦磷酸钠(sodium pyrophosphate,TSPP)对微生物谷氨酰胺转移酶(microbial transglutaminase,MTG)催化天然和氧化肌原纤维蛋白交联的程度及后续蛋白凝胶特性的影响。结果表明,肌原纤维蛋白的氧化程度随着H2O2溶液浓度的升高而增加,但TSPP在一定程度上可抑制羟自由基对蛋白的攻击,且TSPP处理(+TSPP)样品的MTG交联程度明显高于未经TSPP处理(-TSPP)样品。无论是否添加TSPP,随着H2O2溶液浓度的升高,蛋白凝胶的储能模量(G’)和凝胶强度均逐渐降低,加入MTG后均有所回升,且增幅随着H2O2溶液浓度升高逐渐降低。相对于未经TSPP处理样品,TSPP处理条件下未氧化样品的G’和凝胶强度增幅更高,但氧化时增幅降低速度更快。说明虽然TSPP处理有利于MTG交联引起的凝胶性能提高,但当受到氧化胁迫时,TSPP处理反而对其不利。

关键词：谷氨酰胺转移酶焦磷酸钠肌原纤维蛋白交联凝胶特性

凝血酶增高NMDA受体敏感性与组织型谷氨酰胺转移酶的关系

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中华内科杂志 2005年第9期44卷 668-671页

作者：曾非余绍祖曾庆杏武汉大学人民医院神经内科 430060

目的探讨凝血酶增高大鼠的小脑颗粒细胞N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDA)敏感性是否与细胞内组织型谷氨酰胺转移酶(tTG)变化有关.方法以0.01 U/ml浓度凝血酶单独或与tTG抑制剂单丹磺酰尸胺(MDC) 0.5×10-4 mol/L处理原代培养的Wistar大鼠小... 详细信息

目的探讨凝血酶增高大鼠的小脑颗粒细胞N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDA)敏感性是否与细胞内组织型谷氨酰胺转移酶(tTG)变化有关.方法以0.01 U/ml浓度凝血酶单独或与tTG抑制剂单丹磺酰尸胺(MDC) 0.5×10-4 mol/L处理原代培养的Wistar大鼠小脑颗粒细胞30 min后,以0.1×10-4 mol/L、0.25×10-4 mol/L和0.5×10-4 mol/L 3种浓度NMDA作用3 h诱导上述处理的细胞凋亡,比较流式细胞仪检测到的细胞凋亡率差异以判断NMDA受体敏感性的变化;RT-PCR和Gelpro图像分析软件检测各NMDA浓度有/无凝血酶预处理的细胞内tTG mRNA变化差异.结果凝血酶预处理细胞后上述3种浓度NMDA诱导的细胞凋亡率均升高[(8.3±0.5～15.1±0.8)%, (14.1±1.1～23.8±0.7)%, (26.8±1.9～33.7±2.1)%].预处理细胞时加入MDC可阻断凝血酶对NMDA受体的这种影响,细胞凋亡率降至(5.8±1.2)%、(11.5±1.5)%和(19.0±1.7)%;凝血酶预处理后各浓度NMDA处理细胞内tTG mRNA量均同一浓度单独NMDA处理的细胞高.结论凝血酶通过增高细胞内tTG使小脑颗粒细胞NMDA受体敏感性增高.

关键词：受体 N-甲基-D-天冬氨酸凝血酶脱噬作用 NMDA受体谷氨酰胺转移酶敏感性组织型 N-甲基-D-天冬氨酸受体增高