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污染物去甲基化表观遗传毒性EGFP评价载体的构建及性能测试

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污染物去甲基化表观遗传毒性EGFP评价载体的构建及性能测试

作者：王春辉安徽医科大学

学位级别：硕士

目的构建用于评价去甲基化表观遗传污染物健康损害风险的真核表达载体。方法经过大肠杆菌扩增后大量提取pEGFP-C3质粒;对pEGFP-C3质粒进行双酶切,胶回收目的双酶切短片段;并对其中EGFP基因启动子区DNA片段实施定向甲基化处理。随后将其... 详细信息

目的构建用于评价去甲基化表观遗传污染物健康损害风险的真核表达载体。方法经过大肠杆菌扩增后大量提取pEGFP-C3质粒;对pEGFP-C3质粒进行双酶切,胶回收目的双酶切短片段;并对其中EGFP基因启动子区DNA片段实施定向甲基化处理。随后将其与双酶切长片段回复连接成环,胶回收重组质粒,双酶切验证重组质粒的高甲基化状态。将甲基化处理重组pEGFP-C3质粒转染进HepG-2细胞,以5-AZA为阳性去甲基化毒物与转染细胞共培养,通过亚硫酸氢钠测序法定量检测EGFP基因启动子区甲基化状态,通过实时定量PCR定量检测EGFP基因表达,借助流式细胞术和荧光定量摄片定量检测共培养细胞的绿色荧光强度,在DNA甲基化、EGFP基因mRNA表达、GFP蛋白等多个层次研究5-AZA染毒处理与其去甲基化能力的响应关系。结果双酶切和亚硫酸氢钠测序结果表明pEGFP-C3质粒GFP基因启动子区处于高甲基化状态。高甲基化pEGFP-C3质粒成功转染进入HepG2肝癌细胞株,并在DNA甲基化、EGFP基因mRNA表达、GFP蛋白多个层次对EGFP基因表达情况进行了成功的检测。当5-AZA的染毒梯度为0.0016,0.008,0.004,0.2uM时,其染毒量与基因启动子区甲基化水平,EGFP基因mRNA表达、GFP蛋白荧光强度均呈现良好的线性关系。C3质粒EGFP基因启动子区甲基化水平与5-AZA处理浓度存在线性相关,线性方程为y = -0.1962x + 0.856;R2 = 0.800。EGFP表达相对量和5-AZA剂量梯度成良好的剂量效应关系,y = 1.359Ln(x) + 8.0869,R2 = 0.6569。细胞GFP荧光强度均数与5-AZA存在良好的剂量效应线性关系,线性方程为y = 10.402x + 6.0334;R2 = 0.829。结论成功构建了高甲基化的绿色荧光蛋白的报道基因载体,并且其在真核细胞内的绿色荧光蛋白基因表达与阳性受试去甲基化污染物存在比较灵敏的响应关系。敏感、稳定的高甲基化pEGFP-C3质粒载体为研究污染物去甲基化表观遗传毒性评价方法奠定了坚实基础。

关键词：去甲基化表观遗传毒性评价载体 EGFP 污染物

雷达图:中班幼儿个性化运动评价载体的园本探索

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湖州师范学院学报 2023年第12期45卷 98-107页

作者：范惠雯孙彩霞杭州市滨江区奥体中心幼儿园浙江杭州310051 湖州师范学院教师教育学院浙江湖州313000

随着大数据时代的到来,借助智能工具来评价幼儿运动能力已经成为一种趋势。然而在幼儿个性化运动发展过程中,现有的教师评价存在观察目标不够清晰、观察记录缺乏针对性、观察分析依赖主观判断等问题,导致幼儿不能在自己现有水平上得到... 详细信息

随着大数据时代的到来,借助智能工具来评价幼儿运动能力已经成为一种趋势。然而在幼儿个性化运动发展过程中,现有的教师评价存在观察目标不够清晰、观察记录缺乏针对性、观察分析依赖主观判断等问题,导致幼儿不能在自己现有水平上得到阶段性发展。借助“质性+量性”相结合的雷达图综合评价模式,通过“运动信息采集—绘制能力分布雷达图—多维信息分析—策略跟进”的循环推进,以“数据呈现”“个性诊断书”等方式,从个体、班级、年段三个方向,多维度评估、分析幼儿运动的数据,能够帮助教师了解幼儿运动的阶段性特征,提升幼儿个性化运动能力。

关键词：雷达图评价载体个性化运动

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高校思想政治理论课过程评价载体研究

山西高等学校社会科学学报 2012年第3期24卷 48-50,61页

作者：韦世艺北京航空航天大学北海学院广西北海536000

思想政治理论课过程评价载体是指承载评价知识或信息的能有效推动思想政治理论课教师进行过程评价的物质形体。结合过程评价已有的实践探索,高校思想政治理论课过程评价的有效开展,应重视对教学反思日志、过程评价教案以及合作教学团队... 详细信息

思想政治理论课过程评价载体是指承载评价知识或信息的能有效推动思想政治理论课教师进行过程评价的物质形体。结合过程评价已有的实践探索,高校思想政治理论课过程评价的有效开展,应重视对教学反思日志、过程评价教案以及合作教学团队三个评价载体的应用。

关键词：思想政治理论课过程评价评价载体

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评价载体在英语教学中的运用

丝路视野 2018年第34期 227-227页

作者：许光明江苏省南京市江宁区土桥初级中学江苏南京211124

在初中英语教学中,发挥学生的学习主动性,调动学生的学习积极性,激发学生的学习潜能,培养学生的学习自信是新课程改革的重要任务。本文着重从语言、物品、作业、动作和声响几方面阐述了多元评价载体在英语教学中的运用,表明评价载体的... 详细信息

在初中英语教学中,发挥学生的学习主动性,调动学生的学习积极性,激发学生的学习潜能,培养学生的学习自信是新课程改革的重要任务。本文着重从语言、物品、作业、动作和声响几方面阐述了多元评价载体在英语教学中的运用,表明评价载体的丰富多彩有助于提高评价效率、激发学生学习潜能.

关键词：英语教学评价载体运用

污染水产去甲基化表观遗传毒性EGFP评价方法

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中国科学：化学 2011年第9期41卷 1548-1554页

作者：王先良满江红王春辉江艳王小利杨怡姝王菲菲赵秀阁李琴段小丽张衍燊张金良环境基准与风险评估国家重点实验室中国环境科学研究院北京100012 安徽医科大学公共卫生学院劳动卫生与环境卫生系合肥230032 厦门大学海洋与环境学院厦门361005 北京工业大学生命科学与生物工程学院北京100124

pEGFP-C3质粒经过体外人工甲基化处理后,被转染进入HepG2细胞以构建重组细胞株.以5-AZA为阳性去甲基化毒物与重组细胞共培养,通过亚硫酸氢钠测序法定量检测EGFP基因启动子区甲基化状态,通过实时定量PCR检测EGFP基因表达,借助流式细胞术... 详细信息

pEGFP-C3质粒经过体外人工甲基化处理后,被转染进入HepG2细胞以构建重组细胞株.以5-AZA为阳性去甲基化毒物与重组细胞共培养,通过亚硫酸氢钠测序法定量检测EGFP基因启动子区甲基化状态,通过实时定量PCR检测EGFP基因表达,借助流式细胞术和荧光摄片定量检测共培养细胞的绿色荧光强度,在DNA甲基化、EGFP基因mRNA表达、GFP蛋白等多个层次研究5-AZA染毒处理与其去甲基化能力和荧光表达改变的响应关系.对天津污染水产的去甲基化能力进行了实际样品测试.结果表明,5-AZA与重组细胞的DNA甲基化、基因表达、蛋白产物变化之间存在显著关联,具有较低的检出浓度和良好的重复性.天津污染海域的水产去甲基化能力较强.本文初步建立了一种污染物去甲基化表观遗传毒性评价方法.

关键词：去甲基化表观遗传毒性评价载体 EGFP 污染物

基于美育浸润的小学生综合素质评价体系的构建与实践——以南宁市星湖小学“五美五度”评价体系为例

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广西教育 2024年第22期 29-35,42页

作者：李若梅杨谦南宁市星湖小学

深化新时代教育评价改革、全面加强和改进学校美育工作、全面实施学校美育浸润行动是党和国家的意志,要求学校必须认真贯彻落实。南宁市星湖小学在充分调研学生对学校美育工作及美育课程的认识与理解的基础上,全面加强和改进学校美育工... 详细信息

深化新时代教育评价改革、全面加强和改进学校美育工作、全面实施学校美育浸润行动是党和国家的意志,要求学校必须认真贯彻落实。南宁市星湖小学在充分调研学生对学校美育工作及美育课程的认识与理解的基础上,全面加强和改进学校美育工作,积极推进美育浸润行动,通过构建基于美育浸润的学生综合素质评价“五美五度”框架体系、研发“五美五度”学生综合素质评价执行系统,促进学生德智体美劳全面发展,实现美育在小学生综合素质评价体系中的有机浸润。

关键词： “五美五度” 学生综合素质评价评价指标体系评价执行量表评价载体评价机制在线评价系统

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高等院校体育教学俱乐部教学评价研究

内蒙古师范大学学报（自然科学汉文版） 2007年第2期36卷 249-252页

作者：于玲玲内蒙古师范大学公共体育教研部内蒙古呼和浩特010022

传统的体育教学评价很难实现体育教学俱乐部模式下的教学目标.运用文献资料法、问卷调查法对体育教学俱乐部教学进行评价实践,用现代教育理念设计有效评价载体及评价方式,实现体育教学评价向“人-动作-人”的发展教育功能转变.

关键词：体育教学俱乐部教学目标评价载体评价方式高等院校

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小学美术学科过程性评价的实践与思考

中国民族博览 2018年第4期 26-27,30页

作者：沈日儿浙江省嵊泗县教育科学研究室

针对目前学生学习美术兴趣减弱、学习习惯较差、美术学习能力降低等现状，依据2011版新课标提出的评价建议，在形成性评价和自我评价上尤为关注，运用合理的过程评价载体来管理和激励学生在学习过程中的种种表现，使学生在学习美术中得... 详细信息

针对目前学生学习美术兴趣减弱、学习习惯较差、美术学习能力降低等现状，依据2011版新课标提出的评价建议，在形成性评价和自我评价上尤为关注，运用合理的过程评价载体来管理和激励学生在学习过程中的种种表现，使学生在学习美术中得到成功感和自信心，不断形成良好的学习品质，促进学生的发展。如何在培养习惯和美术素养中实施过程性评价，我们尝试探索、开发了适合学生年龄的评价载体，在载体运用中不断改进形式和方法，得到了较好的评价效果。

关键词：过程性评价学习习惯美术素养评价载体运用与思考

基于移动互联技术的高职院校技能考核的教学评价研究--以《Java面向对象程序设计》课程为例

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教育教学论坛 2018年第12期 252-253页

作者：雷静陈琳李凤成都农业科技职业学院四川成都611130

在当前的高职教学中,技能训练占了较大的比重。对于技能操作的掌握情况缺乏一种有效的载体,实现师生间沟通交流。在移动互联技术的支持下,自主开发一种基于Android的高职技能考核通用评价系统"评价宝"。采用该手机应用,可以使教师对学... 详细信息

在当前的高职教学中,技能训练占了较大的比重。对于技能操作的掌握情况缺乏一种有效的载体,实现师生间沟通交流。在移动互联技术的支持下,自主开发一种基于Android的高职技能考核通用评价系统"评价宝"。采用该手机应用,可以使教师对学生的技能操作评价快速有效地被学生获取,帮助学生指导今后的学习。通过在课程教学中的实际使用,获得了师生的肯定,取得较好的应用效果。

关键词：技能考核教学评价评价载体