检索结果-南通市图书馆

作者：张敏山东农业大学

学位级别：硕士

我国是世界养鹅大国,鹅的存栏量和出栏量一直稳居世界第一位。但是随着我国养鹅业的不断发展,鹅的饲养密度不断增大,发病率逐年增多,特别是小鹅瘟、禽流感、新城疫、坦布苏病毒感染和鹅圆环病毒感染等,它们单一感染或共感染,造成鹅的发... 详细信息

我国是世界养鹅大国,鹅的存栏量和出栏量一直稳居世界第一位。但是随着我国养鹅业的不断发展,鹅的饲养密度不断增大,发病率逐年增多,特别是小鹅瘟、禽流感、新城疫、坦布苏病毒感染和鹅圆环病毒感染等,它们单一感染或共感染,造成鹅的发病、死亡或生产性能降低,给养鹅业造成了巨大的经济损失。1、建立针对鹅病毒病的快速检测方法是进行流行病学调查的重要前提。本研究根据H9亚型禽流感病毒(H9-AIV)的HA基因、新城疫病毒的HN基因和坦布苏病毒的NS3基因的保守序列,设计合成3对特异性引物;采用Tizol法提取H9-AIV、NDV和TMUV的RNA并反转录为cDNA,混合后作为PCR体系模板。在普通PCR方法的基础上,通过对退火温度、ExTaq DNA聚合酶、Buffer浓度、2.5mmol/L dNTP浓度、引物浓度比等反应体系及条件进行优化,建立同时扩增H9-AIV (560bp)、NDV (427 bp)和TMUV (277 bp)的多重RT-PCR方法。经特异性、敏感性及临床验证性试验,结果表明：在同一RT-PCR反应体系中可以同时检测到这3种病毒,而对鹅呼肠孤病毒、鹅细小病毒、鸭呼肠孤病毒的检测均为阴性;H9-AIV、NDV和TMUV的最低检出限分别为5.8×105个拷贝、7.2x105个拷贝和4.6x105个拷贝。利用该方法对临床阳性样品进行检测验证,结果均一致。证明建立的多重RT-PCR方法可对H9-AIV、NDV和TMUV同时进行检测,具有简便快速、特异性好、灵敏度高、实用性强的特点,可为鹅群这三种疾病的检测和诊断提供快速准确的方法,便于及时有效的采取防控措施,减少养鹅业的损失。2、为了解小鹅瘟、H9亚型禽流感、新城疫、坦布苏病毒感染和鹅圆环病毒感染等重要鹅病毒病在我国的流行情况,本研究于2014-2015年间在我国11个主要养鹅省份的规模化鹅场,采集临床上发病鹅的病料478羽份,应用建立的针对H9-AIV、NDV和TMUV多重RT-PCR检测方法进行H9-AIV、NDV和TMUV的检测;应用建立的针对GPV和GoCV的普通PCR检测方法进行鹅细小病毒和鹅圆环病毒的检测;并对检测结果进行统计分析。结果表明478份样品中,单一感染190份,双重感染82份,三重感染30份,四重感染3份,阳性率分别为40%、17%、6%、1%,阴性感染173份,比例为36%;GPV、H9-AIV、NDV、TMUV和GoCV感染的阳性检出率分别为17.1%、21.7%、18.4%、17.4%和21.7%。 GPV、H9-AIV、TMUV和GoCV等病毒的感染中混合感染比例较高,分别为55%、62%、74%和54%, NDV感染中混合感染的比例相对较低,为44%。不同季节发病情况统计分析表明,H9和ND在春、冬季节的检出率最高,在夏、秋季节相对较低;TMUV和GoCV在夏季检出率较高,冬季检出率较低,GPV在春季检出率较高。不同日龄发病情况统计分析表明,H9和GoCV在不同日龄段检测的阳性率均很高,成年鹅中检测的阳性率最高;NDV、TMUV在不同日龄段检测的阳性率差异不显著,但雏鹅和成年鹅感染率偏高;GPV在雏鹅时的感染率较高,育成鹅和成年鹅也普遍存在被感染的情况,但感染率较低。综上所述,GPV、H9-AIV、NDV、TMUV和GoCV在我国大部分规模化鹅场中普遍存在,且单一感染和共感染的现象均十分严重;混合感染中以双重感染和三重感染为主,其中免疫抑制病病原体之间的共感染率较高,是造成我国规模化鹅场疫病防控复杂化的主要原因之一。

关键词：规模化鹅场鹅重要病毒病多重RT-PCR 共感染

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扬州规模化鹅场沙门菌流行病学研究

扬州规模化鹅场沙门菌流行病学研究

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作者：张美花扬州大学

学位级别：硕士

沙门菌是世界范围内重要的食源性病原菌,长期以来对畜禽养殖业和人类健康都造成了严重的危害,近年来对养鹅业的影响日趋严重。本研究调查了扬州某规模化鹅场孵化、养殖和屠宰等生产环节中的沙门菌污染状况、血清型分布特征,以及优势血... 详细信息

沙门菌是世界范围内重要的食源性病原菌,长期以来对畜禽养殖业和人类健康都造成了严重的危害,近年来对养鹅业的影响日趋严重。本研究调查了扬州某规模化鹅场孵化、养殖和屠宰等生产环节中的沙门菌污染状况、血清型分布特征,以及优势血清型对雏鹅和鹅胚的致病性,并运用分子分型技术,探明鹅场生产链中不同环节来源菌株间的内在联系,找出沙门菌污染的关键环节,从而为鹅场沙门菌防控和食品安全控制提供数据支持。一、鹅场沙门菌分离鉴定、耐药性及致病性分析本研究选取扬州某鹅场的孵化环节、养殖环节和屠宰环节,采集样品903份,共分离沙门菌329株,总分离率36.4%。其中孵化环节样品中沙门菌分离率为51.8%,养殖环节样品中沙门菌分离率为17.6%,屠宰环节样品中沙门菌分离率为43.8%。流行病学调查发现,鹅场孵化环节的死胚、养殖环节的水池和屠宰环节的内脏污染沙门菌较严重。此外,沙门菌分离率也受季节影响。血清学鉴定结果表明,波茨坦沙门菌是孵化环节最优势血清型,鼠伤寒沙门菌是养殖环节和屠宰环节最优势血清型,其他血清型,如科特布斯沙门菌、纽波特沙门菌、塞罗沙门菌等也较常见。沙门菌在鹅场中的分布情况表明,孵化室环境是鹅场细菌污染的关键因素。本研究选取165株沙门菌用于耐药性试验,结果显示耐药性均不明显。选取优势血清型波茨坦沙门菌人工感染雏鹅和鹅胚,观察临床表现和病理变化。发现该菌感染雏鹅后,未见明显的临床症状和眼观病变,仅有轻微的组织病理变化;但鹅胚感染细菌后,有较高的致死率,严重影响了鹅胚的孵化。二、鹅场沙门菌分子分型及相关性分析选取鹅场不同生产环节的82株沙门菌进行多位点序列分型(MLST),结果表明鹅场孵化、养殖和屠宰环节来源的沙门菌存在2个主要的ST型,即ST2039和ST99。分别选取37株波茨坦沙门菌和12株鼠伤寒沙门菌进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型,结果显示37株波茨坦沙门菌和12株鼠伤寒沙门菌分别存在6个和5个PFGE型。孵化环节不同时间来源的波茨坦沙门菌PFGE型较为一致,这些沙门菌可能是孵化环节的固有菌群,对孵化室造成持续性污染。养殖和屠宰环节中的鼠伤寒沙门菌PFGE型也趋于一致,说明这两个环节中的鼠伤寒沙门菌亲缘关系较近。

关键词：规模化鹅场沙门菌血清型多位点序列分型脉冲场凝胶电泳

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规模化鹅场主要病毒核酸检测结果与分析

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中国农业科学 2023年第10期56卷 2021-2034页

作者：邵震刁有祥山东农业大学动物科技学院

【目的】经长期对中国国内各省市的规模化鹅场常见病毒性疫病核酸检出率进行调查，发现国内许多规模化鹅场均可同时检出多种病毒核酸，并且这种现象非常普遍，鉴于目前国内关于规模化鹅场多种病毒性疫病核酸同时检出的相关数据较为匮乏... 详细信息

【目的】经长期对中国国内各省市的规模化鹅场常见病毒性疫病核酸检出率进行调查，发现国内许多规模化鹅场均可同时检出多种病毒核酸，并且这种现象非常普遍，鉴于目前国内关于规模化鹅场多种病毒性疫病核酸同时检出的相关数据较为匮乏，论文旨在了解规模化鹅场多种病毒性疫病核酸同时检出的情况并进行分析，为规模化鹅场病毒性疫病的防控提供理论指导和科学依据。【方法】2021年5—10月，自山东、黑龙江、四川、吉林、广西、河南、安徽、辽宁、河北、贵州、湖南及内蒙古等省市的47个规模化鹅场采集737份病料，对其采用普通PCR及RT-PCR方法进行番鸭呼肠孤病毒（muscovy duck reovirus, MDRV）、鸭呼肠孤病毒（duck reovirus, DRV）、鹅星状病毒(goose astroviruses, GAstV)、禽腺病毒（fowl adenovirus, FAdV）、禽网状内皮增生病毒（reticuloendotheliosis virus, REV）、新城疫病毒（newcastle disease, ND）、鹅细小病毒(goose parvovirus, GPV)、鹅圆环病毒(goose circovirus, GoCV)、鹅出血性多瘤病毒(goose hemorrhagic polyomavirus, GHPV)、坦布苏病毒（tembusu virus, TMUV）及H9亚型禽流感病毒（avian influenza virus H9, H9-AIV）等11种规模化鹅场常见病毒性疫病的检测。每份病料剖取完整的肝脏、脾脏、肺脏及肾脏，利用Trizol法提取总RNA；以总RNA为模板逆转录合成cDNA的一条链，而后以cDNA为模板继续扩增获得完整的cDNA，随后以该cDNA为模板利用番鸭呼肠孤病毒、鸭呼肠孤病毒、鹅星状病毒、禽腺病毒、禽网状内皮增生性病毒、新城疫病毒、鹅细小病毒、鹅圆环病毒、鹅出血性多瘤病毒、坦布苏病毒及H9亚型禽流感病毒的特异性引物，通过普通PCR反应扩增目的片段；所有扩增片段均进行琼脂糖凝胶电泳，对部分阳性样品进行测序；将所获得的测序结果与GenBank上发表的相应病毒基因序列进行比较，应用MEGA 6.0软件中的邻接法（neighbor-joining, NJ）绘制系统发育进化树进行分析。【结果】番鸭呼肠孤病毒、鸭呼肠孤病毒、鹅星状病毒、禽腺病毒、禽网状内皮增生性病毒、新城疫病毒、鹅细小病毒、鹅圆环病毒、鹅出血性多瘤病毒、坦布苏病毒及H9亚型禽流感病毒感染情况检测结果显示，GAstV核酸检出率最高，为58.21%;REV及NDV核酸检出率最低，分别为1.36%及1.50%；鹅群不同程度上均可同时检出多种病毒核酸，尤其以2种或3种病毒核酸同时检出的情况较为普遍，占样品总数的67.44%。两种病毒核酸同时检出率中GAstV与GoCV同时检出所占比例最大，为18.44%;3种病毒核酸同时检出率中MDRV、GAstV及GPV同时检出所占比例最大，为36.28%。【结论】明确了我国规模化鹅场可以同时检测到多种病毒核酸这一特征，这可能是我国规模化鹅场病毒性疫病复杂化和防控难度加大的重要原因之一。

关键词：规模化鹅场核酸检测遗传进化分析

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