规模化鹅场主要病毒核酸检测结果与分析

作     者：邵震 刁有祥 SHAO Zhen;DIAO YouXiang

作者机构：山东农业大学动物科技学院 

出 版 物：《中国农业科学》 (Scientia Agricultura Sinica)

年 卷 期：2023年第56卷第10期

页      面：2021-2034页

核心收录：

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：现代农业产业技术体系建设专项资金(CARS-42-19) 

主　　题：规模化鹅场 核酸检测 遗传进化分析 

摘      要：【目的】经长期对中国国内各省市的规模化鹅场常见病毒性疫病核酸检出率进行调查，发现国内许多规模化鹅场均可同时检出多种病毒核酸，并且这种现象非常普遍，鉴于目前国内关于规模化鹅场多种病毒性疫病核酸同时检出的相关数据较为匮乏，论文旨在了解规模化鹅场多种病毒性疫病核酸同时检出的情况并进行分析，为规模化鹅场病毒性疫病的防控提供理论指导和科学依据。【方法】2021年5—10月，自山东、黑龙江、四川、吉林、广西、河南、安徽、辽宁、河北、贵州、湖南及内蒙古等省市的47个规模化鹅场采集737份病料，对其采用普通PCR及RT-PCR方法进行番鸭呼肠孤病毒（muscovy duck reovirus, MDRV）、鸭呼肠孤病毒（duck reovirus, DRV）、鹅星状病毒(goose astroviruses, GAstV)、禽腺病毒（fowl adenovirus, FAdV）、禽网状内皮增生病毒（reticuloendotheliosis virus, REV）、新城疫病毒（newcastle disease, ND）、鹅细小病毒(goose parvovirus, GPV)、鹅圆环病毒(goose circovirus, GoCV)、鹅出血性多瘤病毒(goose hemorrhagic polyomavirus, GHPV)、坦布苏病毒（tembusu virus, TMUV）及H9亚型禽流感病毒（avian influenza virus H9, H9-AIV）等11种规模化鹅场常见病毒性疫病的检测。每份病料剖取完整的肝脏、脾脏、肺脏及肾脏，利用Trizol法提取总RNA；以总RNA为模板逆转录合成cDNA的一条链，而后以cDNA为模板继续扩增获得完整的cDNA，随后以该cDNA为模板利用番鸭呼肠孤病毒、鸭呼肠孤病毒、鹅星状病毒、禽腺病毒、禽网状内皮增生性病毒、新城疫病毒、鹅细小病毒、鹅圆环病毒、鹅出血性多瘤病毒、坦布苏病毒及H9亚型禽流感病毒的特异性引物，通过普通PCR反应扩增目的片段；所有扩增片段均进行琼脂糖凝胶电泳，对部分阳性样品进行测序；将所获得的测序结果与GenBank上发表的相应病毒基因序列进行比较，应用MEGA 6.0软件中的邻接法（neighbor-joining, NJ）绘制系统发育进化树进行分析。【结果】番鸭呼肠孤病毒、鸭呼肠孤病毒、鹅星状病毒、禽腺病毒、禽网状内皮增生性病毒、新城疫病毒、鹅细小病毒、鹅圆环病毒、鹅出血性多瘤病毒、坦布苏病毒及H9亚型禽流感病毒感染情况检测结果显示，GAstV核酸检出率最高，为58.21%;REV及NDV核酸检出率最低，分别为1.36%及1.50%；鹅群不同程度上均可同时检出多种病毒核酸，尤其以2种或3种病毒核酸同时检出的情况较为普遍，占样品总数的67.44%。两种病毒核酸同时检出率中GAstV与GoCV同时检出所占比例最大，为18.44%;3种病毒核酸同时检出率中MDRV、GAstV及GPV同时检出所占比例最大，为36.28%。【结论】明确了我国规模化鹅场可以同时检测到多种病毒核酸这一特征，这可能是我国规模化鹅场病毒性疫病复杂化和防控难度加大的重要原因之一。