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中华口腔医学杂志 2017年第7期52卷 432-438页

作者：侯玉峦凌均棨陈婵婵权晶晶杜宇中山大学光华口腔医学院·附属口腔医院牙体牙髓病科·广东省口腔医学重点实验室广州510055

目的检测裸露角质蛋白同源物2（nakedcuticlehomo／og2，Nkd2）在大鼠牙根形成和牙囊细胞成骨向分化过程中的表达变化，为探讨Nkd2在牙囊细胞成骨向分化中的具体分子机制提供实验基础。方法免疫组化法检测Nkd2在SD大鼠出生后1、3、5、7... 详细信息

目的检测裸露角质蛋白同源物2（nakedcuticlehomo／og2，Nkd2）在大鼠牙根形成和牙囊细胞成骨向分化过程中的表达变化，为探讨Nkd2在牙囊细胞成骨向分化中的具体分子机制提供实验基础。方法免疫组化法检测Nkd2在SD大鼠出生后1、3、5、7、9、11及13d下颌第一磨牙牙胚近基底侧牙囊组织中的表达。茜素红染色和十六烷基吡啶观察分析大鼠牙囊细胞（dentalfolliclecellsofrat，rDVC）矿化诱导l、2、3周钙化结节形成情况。蛋白质印迹法分析rDFC矿化诱导1、2、3周Nkd2蛋白表达变化及其与成骨因子碱性磷酸酶（alkalinephosphatase，ALP）、Runt相关转录因子2（***-2，RUNX2）和骨钙蛋白的关系。小干扰RNA（smallinterferingRNA，siRNA）沉默rDFC中Nkd2（siRNA干扰组，Si组），经矿化诱导1周，蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR（quantitativereal—timePCR，qPCR）检测Si组、阴性对照组（阴性对照RNA组，negativecontrolRNAgroup，Nc组）和空白对照组（mockcontrolgroup，Mock组）Nkd2及其mRNA与ALP、RUNX2和骨钙蛋白的表达变化。结果免疫组化结果显示，大鼠牙根形成中Nkd2在下颌第一磨牙牙胚基底侧牙囊组织中的表达呈现时间差异。随rDFC成骨诱导时间增加，茜素红染色矿化结节逐渐增多，十六烷基吡啶吸光度值逐渐增高（0、1、2、和3周吸光度值分别为0．017±0．005、0．702±0．044、1．812±0．531及2．767±0．253）。蛋白质印迹法结果显示，矿化诱导早期矿化组Nkd2（1．60±0．23）较对照组（1）表达显著上调（P〈0．05），Nkd2表达趋势与成骨相关因子表达趋势一致。siRNA干扰rDFC矿化诱导1周后si组较Nc、Mock组Nkd2和成骨因子在蛋白和mRNA水平显著降低（P〈O．05），Nc与Mock组Nkd2和成骨因子表达差异无统计学意义（P〉0．05）。Si、Nc和Mock组蛋白相对表达量分别为Nkd2：0．42±0．10、1．12±0．07、1；ALP：0．70±0．15、1．11±0．14、1；RUNX2：0．58±0．08、0．93±0．08、1；骨钙蛋白：0．64±0．06、0．99±0．02、1；Si、Nc和Mock组mRNA相对表达量分别为Nkd2：0．39±0．05、0．96±0．10、1；ALP：0．15±0．13、1．01±0．07、1；RUNX2：0．39±0．31、0．97±0．13、1；骨钙蛋白：0．17±0．08、1．08±0．21、1。结论大鼠牙根形成过程中Nkd2参与了牙囊组织的分化，并正向调控大鼠牙囊细胞的早期成骨向分化。

关键词：牙囊裸露角质蛋白同源物2 牙囊细胞成骨向分化

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miR-96干扰NKD2表达对骨肉瘤MG63细胞株的增殖、凋亡的影响

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实用骨科杂志 2021年第7期27卷 615-618,631页

作者：张建业张卫华武汉科技大学附属汉阳医院武汉市汉阳医院骨一科湖北武汉430000

目的探究miR-96通过干扰裸露角质蛋白同源物2(naked cuticle homolog 2,NKD2)的表达对骨肉瘤MG63细胞株的增殖、凋亡的影响。方法回顾性分析我院2013年9月至2018年2月收集的骨肉瘤标本57例临床资料作为研究组,同时收集距肿瘤边界5 cm的... 详细信息

目的探究miR-96通过干扰裸露角质蛋白同源物2(naked cuticle homolog 2,NKD2)的表达对骨肉瘤MG63细胞株的增殖、凋亡的影响。方法回顾性分析我院2013年9月至2018年2月收集的骨肉瘤标本57例临床资料作为研究组,同时收集距肿瘤边界5 cm的癌旁组织作为对照组,其中男39例,女18例;年龄21~49岁,平均(28.16±6.73)岁。将骨肉瘤MG63细胞株分为miR-96抑制组与空白对照组,其中miR-96抑制组细胞给予miR-96抑制剂转染,空白对照组细胞不作任何处理。培养48h后,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)法与Western blot法检测各组人骨肉瘤MG63细胞中miR-96与NKD2蛋白表达水平;采用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyltetrazolium assay,MTT)法检测各组细胞增殖情况;采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况与细胞周期分布情况。结果骨肉瘤组织中miR-96表达水平明显高于正常骨组织(P2蛋白表达水平明显低于正常骨组织(P2表达水平明显高于空白对照组(P2在骨肉瘤组织中呈低表达;miR-96通过抑制NKD2表达而促进骨肉瘤MG63细胞株生长,并抑制骨肉瘤MG63细胞株早期凋亡。

关键词： miR-96 裸露角质蛋白同源物2 骨肉瘤增殖凋亡

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