裸露角质蛋白同源物2正向调控大鼠牙囊细胞的成骨向分化研究

作     者：侯玉峦 凌均棨 陈婵婵 权晶晶 杜宇 Hou Yuluan;Ling Junqi;Chen Chanchan;Quan Jingjing;Du Yu

作者机构：中山大学光华口腔医学院·附属口腔医院牙体牙髓病科·广东省口腔医学重点实验室广州510055 

出 版 物：《中华口腔医学杂志》 (Chinese Journal of Stomatology)

年 卷 期：2017年第52卷第7期

页      面：432-438页

核心收录：

学科分类：1003[医学-口腔医学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81170932) 广东省自然科学基金(2015A030313048) 

主　　题：牙囊 裸露角质蛋白同源物2 牙囊细胞 成骨向分化 

摘      要：目的检测裸露角质蛋白同源物2（nakedcuticlehomo／og2，Nkd2）在大鼠牙根形成和牙囊细胞成骨向分化过程中的表达变化，为探讨Nkd2在牙囊细胞成骨向分化中的具体分子机制提供实验基础。方法免疫组化法检测Nkd2在SD大鼠出生后1、3、5、7、9、11及13d下颌第一磨牙牙胚近基底侧牙囊组织中的表达。茜素红染色和十六烷基吡啶观察分析大鼠牙囊细胞（dentalfolliclecellsofrat，rDVC）矿化诱导l、2、3周钙化结节形成情况。蛋白质印迹法分析rDFC矿化诱导1、2、3周Nkd2蛋白表达变化及其与成骨因子碱性磷酸酶（alkalinephosphatase，ALP）、Runt相关转录因子2（***-2，RUNX2）和骨钙蛋白的关系。小干扰RNA（smallinterferingRNA，siRNA）沉默rDFC中Nkd2（siRNA干扰组，Si组），经矿化诱导1周，蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR（quantitativereal—timePCR，qPCR）检测Si组、阴性对照组（阴性对照RNA组，negativecontrolRNAgroup，Nc组）和空白对照组（mockcontrolgroup，Mock组）Nkd2及其mRNA与ALP、RUNX2和骨钙蛋白的表达变化。结果免疫组化结果显示，大鼠牙根形成中Nkd2在下颌第一磨牙牙胚基底侧牙囊组织中的表达呈现时间差异。随rDFC成骨诱导时间增加，茜素红染色矿化结节逐渐增多，十六烷基吡啶吸光度值逐渐增高（0、1、2、和3周吸光度值分别为0．017±0．005、0．702±0．044、1．812±0．531及2．767±0．253）。蛋白质印迹法结果显示，矿化诱导早期矿化组Nkd2（1．60±0．23）较对照组（1）表达显著上调（P〈0．05），Nkd2表达趋势与成骨相关因子表达趋势一致。siRNA干扰rDFC矿化诱导1周后si组较Nc、Mock组Nkd2和成骨因子在蛋白和mRNA水平显著降低（P〈O．05），Nc与Mock组Nkd2和成骨因子表达差异无统计学意义（P〉0．05）。Si、Nc和Mock组蛋白相对表达量分别为Nkd2：0．42±0．10、1．12±0．07、1；ALP：0．70±0．15、1．11±0．14、1；RUNX2：0．58±0．08、0．93±0．08、1；骨钙蛋白：0．64±0．06、0．99±0．02、1；Si、Nc和Mock组mRNA相对表达量分别为Nkd2：0．39±0．05、0．96±0．10、1；ALP：0．15±0．13、1．01±0．07、1；RUNX2：0．39±0．31、0．97±0．13、1；骨钙蛋白：0．17±0．08、1．08±0．21、1。结论大鼠牙根形成过程中Nkd2参与了牙囊组织的分化，并正向调控大鼠牙囊细胞的早期成骨向分化。