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双表达盒人骨唾液酸蛋白毕赤酵母工程细胞的构建

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中国生化药物杂志 2005年第5期26卷 264-266,269页

作者：王征王捷杨静张宏斌武婕魏春华广州军区广州总医院医学实验中心广东广州510010

目的构建含人骨唾液酸蛋白(hBSP)双表达盒的毕赤酵母工程细胞,为hBSP在毕赤酵母中的高效非融合分泌表达奠定基础。方法用PCR方法扩增hBSP基因,将其亚克隆到毕赤酵母表达载体pPICZαA中,并在此基础上构建含有双表达盒的重组pPICZαAN-2×... 详细信息

目的构建含人骨唾液酸蛋白(hBSP)双表达盒的毕赤酵母工程细胞,为hBSP在毕赤酵母中的高效非融合分泌表达奠定基础。方法用PCR方法扩增hBSP基因,将其亚克隆到毕赤酵母表达载体pPICZαA中,并在此基础上构建含有双表达盒的重组pPICZαAN-2×hBSP载体,电转化毕赤酵母GS115,通过Zeocin高抗性筛选转化子并对其表型进行PCR鉴定。结果得到GS115/pPICZαAN-hBSP和GS115/pPICZαAN-2×hBSP毕赤酵母工程细胞。结论GS115/pPICZαAN-2×hBSP毕赤酵母工程细胞中含双表达盒hBSP。

关键词：人骨唾液酸蛋白毕赤酵母表达盒

伪狂犬病病毒gG启动子控制的绿荧光蛋白表达盒的构建

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伪狂犬病病毒gG启动子控制的绿荧光蛋白表达盒的构建

共转化6-SFT和bar表达框小麦的获得及检测

第四届中国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会

作者：方六荣陈焕春肖少波钱平何启盖王革非华中农业大学牧医学院动物病毒室

克隆了伪狂犬病病毒鄂A株晚期糖蛋白gG基因的启动子并进行了序列分析。根据测序结果,以pEGFP—N1为模板,设计一对引物,对含增强绿荧光蛋白(EGFP)cDNA、SV40 Poly(A)约1.0kb的片断进行PCR扩增,将纯化和酶切后的扩增产物合到gG的启动子下... 详细信息

克隆了伪狂犬病病毒鄂A株晚期糖蛋白gG基因的启动子并进行了序列分析。根据测序结果,以pEGFP—N1为模板,设计一对引物,对含增强绿荧光蛋白(EGFP)cDNA、SV40 Poly(A)约1.0kb的片断进行PCR扩增,将纯化和酶切后的扩增产物合到gG的启动子下游,构建pgG—EGFP—SV40Poly(A)表达盒。为今后深入研究伪狂犬病病毒分子生物学提供了良好的工具。

关键词：伪狂犬病病毒 gG启动子绿荧光蛋白表达盒

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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湖北农业科学 2022年第24期61卷 185-188,193页

作者：贺晓岚王建伟陈新宏李文旭秦绍钊汤宏吴显芝凯里学院大健康学院贵州凯里556011 凯里学院理学院贵州凯里556011 西北农林科技大学农学院/陕西省植物遗传工程育种重点实验室陕西杨凌712100 河南省农业科学院小麦研究所郑州450002

为了探究源于华山新麦草和簇毛麦的果聚糖合成酶基因6-SFT改良小麦(Triticum aestivum L.)抗非生物胁迫的可行性,以bar为筛选标记基因,通过基因枪介导法将Ph-6-SFT或Dv-6-SFT基因导入普通小麦(科农199)幼胚愈伤组织中,用除草剂草丁膦作... 详细信息

为了探究源于华山新麦草和簇毛麦的果聚糖合成酶基因6-SFT改良小麦(Triticum aestivum L.)抗非生物胁迫的可行性,以bar为筛选标记基因,通过基因枪介导法将Ph-6-SFT或Dv-6-SFT基因导入普通小麦(科农199)幼胚愈伤组织中,用除草剂草丁膦作为筛选剂筛选得到抗性植株,并对其进行PCR及GUS组织化学染色鉴定。结果显示,通过PPT筛选体系分别得到146株和187株抗性植株,其中PCR阳性植株分别为4株和6株,GUS组织化学染色阳性植株均为1株,转化率分别为0.24%和0.19%。结果表明,Ph-6-SFT和Dv-6-SFT基因已分别整合到小麦基因组中,获得了无抗生素标记基因的转基因小麦。

关键词：小麦(Triticum aestivum L.) 共转化 Ph-6-SFT基因 Dv-6-SFT基因 bar基因表达盒

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同源重组介导的重组病毒研究进展

江苏农业科学 2016年第11期44卷 1-6页

作者：赵银龙李健朱海霞颜新敏赵志荀吴健张强穆晓峰吴国华中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 西北民族大学甘肃兰州730124 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118

病毒同源重组是以同源臂为基础的将目的基因整合到病毒基因组中的技术。将表达盒串联到转移载体,通过同源重组构建重组病毒从而实现病毒基因改造、外源基因表达以及重组活载体疫苗制备等。就重组病毒的优缺点、构建原理及应用进展进行... 详细信息

病毒同源重组是以同源臂为基础的将目的基因整合到病毒基因组中的技术。将表达盒串联到转移载体,通过同源重组构建重组病毒从而实现病毒基因改造、外源基因表达以及重组活载体疫苗制备等。就重组病毒的优缺点、构建原理及应用进展进行了概述,对重组病毒构建的难点进行了分析,全面系统地阐述了重组病毒的构建模式,针对基因框(启动子-报告基因-目的基因-调控元件-终止子)给出具体的构建方案,同时对其未来发展前景进行了展望,以期为今后重组病毒的构建提供理论基础。

关键词：同源重组表达盒转移载体重组病毒病毒载体

独立表达双基因的伪狂犬病毒通用转移载体的构建

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黑龙江畜牧兽医 2016年第10期 175-177页

作者：黄红亮何玲任常宝谢小雨佘峥唐兆新陈瑞爱肇庆大华农生物药品有限公司/农业部动物疫病防控生物技术与制品创制重点实验室广东肇庆526238 华南农业大学兽医学院广州510642

为了构建能同时独立表达双基因的重组伪狂犬病毒通用转移载体,试验采用前期构建的p UC19-g E/HEK为骨架,将设计合成的独立表达双基因的表达盒(p CMV+MCS1+p CMV+MCS2+BGH p A)克隆至其XbaⅠ位点,获得通用转移载体pg E-CMV2,以多克隆位... 详细信息

为了构建能同时独立表达双基因的重组伪狂犬病毒通用转移载体,试验采用前期构建的p UC19-g E/HEK为骨架,将设计合成的独立表达双基因的表达盒(p CMV+MCS1+p CMV+MCS2+BGH p A)克隆至其XbaⅠ位点,获得通用转移载体pg E-CMV2,以多克隆位点限制性内切酶单酶切,并将EGFP基因克隆至MCS1的SpeⅠ/PstⅠ位点、DsRed基因克隆至MCS2的KpnⅠ/XhoⅠ位点,转化BHK-21细胞同时观察荧光。结果表明:多克隆位点限制性内切酶单酶切pg E-CMV2呈现单一条带,EGFP和DsRed均呈现目标荧光,且将两种荧光蛋白分别克隆至同一分子的MCS1与MCS2,两种荧光蛋白均能有效表达。说明pg E-CMV2构建正确,且能独立有效表达双基因,可用于实现将两个或多个外源基因一次重组入PRV基因组中,实现"一针多防"。

关键词：伪狂犬病毒双基因独立表达通用转移载体载体构建表达盒

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抗菌肽多基因表达技术与策略

黑龙江畜牧兽医 2016年第8期 52-56页

作者：祁丽姜宁张爱忠张晨雪刘晓明姜殿慧黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院黑龙江大庆163319

以抗菌肽为代表的小分子多肽表达量低、表达产物不稳定、与宿主之间的毒性作用等一直制约其规模化生产。只单纯表达抗菌肽单体的简单载体构建,不足以实现抗菌肽表达的高通量和高活性,而以多聚体的蛋白表达或基因复合体组装有可能达到理... 详细信息

以抗菌肽为代表的小分子多肽表达量低、表达产物不稳定、与宿主之间的毒性作用等一直制约其规模化生产。只单纯表达抗菌肽单体的简单载体构建,不足以实现抗菌肽表达的高通量和高活性,而以多聚体的蛋白表达或基因复合体组装有可能达到理想目标。因此,研究抗菌肽分子聚合体表达的载体构建技术是未来抗菌肽生物工程化生产的发展趋势,多基因表达系统是研究大分子聚合物的结构和功能的有效工具。文章针对这些问题,重点介绍了几种多基因共表达系统种类,阐述了多基因表达系统应用于抗菌肽领域的表达策略、前景和价值,同时为抗菌肽表达量的提高提供一些理论参考。

关键词：抗菌肽多基因一共表达系统表达系统种类表达技术表达策略表达盒

口蹄疫三价重组鸡痘病毒疫苗分子设计及其构建

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高技术通讯 2007年第3期17卷 288-294页

作者：马鸣潇金宁一刘慧娟沈国顺郑敏金明兰鲁会军霍晓伟马海利中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所全军基因工程重点实验室长春130062 辽宁医学院动物医学院锦州121001 吉林大学畜牧兽医学院长春130062

针对我国口蹄疫（FMD）流行情况,利用计算机软件模拟分析,构建了口蹄疫病毒（FMDV）复合多表位基因工程疫苗表达盒OAAT。该表达盒以O型、A型FMDV结构蛋白VP1全基因和AsiaⅠ型FMDV2个基因拓扑型的结构蛋白VP1基因上的5个抗原表位基因（其... 详细信息

针对我国口蹄疫（FMD）流行情况,利用计算机软件模拟分析,构建了口蹄疫病毒（FMDV）复合多表位基因工程疫苗表达盒OAAT。该表达盒以O型、A型FMDV结构蛋白VP1全基因和AsiaⅠ型FMDV2个基因拓扑型的结构蛋白VP1基因上的5个抗原表位基因（其中2个抗原表位来源于FMDVIND63/7株,该毒株与我国新疆分离株属于同一基因拓扑型,其余3个抗原表位来源于FMDVYNBS/58株）作为主要免疫原基因,以非结构蛋白上的2个Th2细胞表位基因及结构蛋白上的1个Th2细胞表位基因作为辅助基因。将构建好的表达盒OAAT和猪IL-18基因分别插入到鸡痘病毒（FPV）表达载体pUTA-16-LacZ复合启动子（ATI-P7.5×20）和单一启动子（P7.5）下游,构建了携带OAAT表达盒和猪IL-18基因的重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTAL-OAAT-IL18。应用脂质体转染法,将重组鸡痘病毒转移载体质粒与282E4株FPV共转染鸡胚成纤维细胞（CEF）,经BrdU进行3次加压蚀斑筛选后,以不同代次的细胞mRNA为模板,利用FMDVVP1基因和猪IL-18基因特异引物进行RT-PCR和IFA检测,筛选出OAAT和猪IL-18基因共表达的重组鸡痘病毒rF-PV-OAAT-IL18,该重组鸡痘病毒的构建为新型FMDV活载体疫苗的研究奠定了基础。

关键词：复合多表位抗原表达盒 OAAT口蹄疫病毒鸡痘病毒

维普期刊数据库评论

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多基因表达系统研究进展

中国生物工程杂志 2011年第6期31卷 116-123页

作者：楚素霞姚伦广邢延豪周延清河南师范大学生命科学学院新乡453007 河南省伏牛山昆虫生物学重点实验室南阳师范学院中英联合实验室南阳473061

细胞中大多数蛋白质以亚基形式与其他蛋白装配成蛋白复合体而发挥功能。大分子蛋白复合物的结构研究和功能分析在后基因组时代成为热点,如何高效地获得多蛋白复合物是研究其功能和结构的前提。利用基因工程技术实现多个蛋白亚基在同一... 详细信息

细胞中大多数蛋白质以亚基形式与其他蛋白装配成蛋白复合体而发挥功能。大分子蛋白复合物的结构研究和功能分析在后基因组时代成为热点,如何高效地获得多蛋白复合物是研究其功能和结构的前提。利用基因工程技术实现多个蛋白亚基在同一宿主细胞内共表达并装配成复合体是获得多蛋白复合物的有效手段。多基因表达系统在基础和应用研究中正起到越来越重要作用。多基因表达系统研究发展迅速,尤其在近5年内取得较大进步。对各种多基因表达系统进行了总结。同时介绍了不同多基因表达系统的构建策略和构建方法,并对最新的多基因表达载体构建和多基因表达系统的初步应用进行了介绍。多基因表达系统将在作物改良、疫苗制备、基因治疗和药物开发方面发挥更大作用。

关键词：蛋白复合物多基因表达系统表达盒归位酶同尾酶技术

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多拷贝策略在增强目的基因表达中的应用

生命科学研究 2016年第2期20卷 166-170页

作者：吴志伟徐立新佟金陈玉香吉林大学生物与农业工程学院中国吉林长春130025 吉林大学工程仿生教育部重点实验室中国吉林长春130025

作为基因工程领域增强目的基因表达的一种有效手段,多拷贝策略日益受到分子生物学研究者的青睐。该策略分为3种方式:表达盒多拷贝、目的基因多拷贝和启动子多拷贝,目前基因工程领域3种方式均有运用。实现多拷贝的方法有5种,分别是随机... 详细信息

作为基因工程领域增强目的基因表达的一种有效手段,多拷贝策略日益受到分子生物学研究者的青睐。该策略分为3种方式:表达盒多拷贝、目的基因多拷贝和启动子多拷贝,目前基因工程领域3种方式均有运用。实现多拷贝的方法有5种,分别是随机定向串联法、PCR扩增串联法、接头连接法、同尾酶法和化学合成法。多拷贝策略是通过分子生物学手段对基因工程菌目的蛋白质表达进行改良的一种方法,已有多项研究证明了该策略的可行性,该策略对基因工程起到了良好的补充作用,使得转基因产物产量更符合工业生产的需要。

关键词：多拷贝策略启动子目的基因表达盒