检索结果-南通市图书馆

作者：孙艳哈尔滨医科大学

学位级别：硕士

目的:了解哈尔滨医科大学附属第二医院临床分离耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(Carbapenem-resistant Enterobacteriaceae,CRE)对临床上常用抗菌药物的耐药特点,探讨我院CRE菌株产碳青霉烯酶情况及产酶基因型,阐述我院CRE耐药机制,为临床进... 详细信息

目的:了解哈尔滨医科大学附属第二医院临床分离耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(Carbapenem-resistant Enterobacteriaceae,CRE)对临床上常用抗菌药物的耐药特点,探讨我院CRE菌株产碳青霉烯酶情况及产酶基因型,阐述我院CRE耐药机制,为临床进一步采取措施预防及控制CRE感染提供依据。方法:收集2017年7月至2019年12月临床非重复分离的70株CRE,采用K-B纸片药敏法和MIC法检测受试菌株对临床常用抗菌药物的敏感性,采用MHT、m CIM及e CIM试验进行碳青霉烯酶表型检测,采用PCR法检测常见碳青霉烯酶耐药基因bla 、bla 、bla 、bla 、bla ,通过DNA测序进一步确定碳青霉烯酶基因亚型。结果:分离到的CRE菌株以肺炎克雷伯菌(47株,占67.14%)及大肠埃希菌(19株,占27.14%)为主,另外检出2株粘质沙雷菌,1株阴沟肠杆菌以及1株产酸克雷伯菌;主要分布于外科(45.71%),重症监护病房分离率也较高(24.28%),肺炎克雷伯菌主要来源于痰液(46.81%)及静脉血(25.53%)标本,而大肠埃希菌在穿刺液及尿液标本中分离较多,分别占42.10%和26.32%。70株CRE菌株对青霉素类、头孢菌素类、喹诺酮类抗生素抗生素高度耐药,耐药率均高于86.21%,对复方新诺明耐药率相对较低,为57.14%,替加环素和阿米卡星对CRE的抑菌活性较强,耐药率分别为1.43%和25.71%,大肠埃希菌对各种抗生素的耐药率均高于肺炎克雷伯菌,其对青霉素类,头孢菌素类及氨曲南的耐药率均达100%,70株CRE菌株中仅1株肺炎克雷伯菌对替加环素耐药。PCR法检测出66株CRE菌株携带一种或多种碳青霉烯酶基因,DNA测序结果显示31株仅携带bla 、18株仅携带bla 、3株仅携带bla ,检出11株菌株同时携带bla 和bla ,1株同时携带bla 和bla ,另检出两株同时携带bla 、bla 和bla ,本次研究未检出bla 和bla 基因。表型筛选结果发现,61株CRE菌株MHT试验结果阳性,67株CRE菌株m CIM试验结果阳性,e CIM试验阳性结果共检出37株,30株菌株e CIM试验阴性,另有3株菌株因m CIM结果阴性而未做解释。结论:我院分离的CRE菌株以肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌为主,主要分布在外科及ICU病房。我院CRE耐药情况较为严重,均为多重耐药菌株,对几乎所有的β-内酰胺类药物耐药,但对替加环素和阿米卡星较为敏感。我院分离的CRE菌株耐碳青霉烯类的重要机制是产碳青霉烯酶,bla 及bla 基因是介导我院CRE耐药的主要基因型,肺炎克雷伯菌主要产KPC-2,而大肠埃希菌主要产NDM-1。

关键词：耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌碳青霉烯酶基因耐药性表型确证试验

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产超广谱β内酰胺酶肠杆菌科细菌的表型及分子生物学研究

产超广谱β内酰胺酶肠杆菌科细菌的表型及分子生物学研究

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作者：陈天宝中国人民解放军军事医学科学院

学位级别：硕士

背景和目的 β内酰胺类抗生素的发现和使用为人类抵御细菌感染做出了巨大贡献,但随着抗生素的广泛、大量使用,细菌耐药性问题,尤其是由超广谱β内酰胺酶(extended-spectrumβ-lactamases,ESBLs)介导的β内酰胺类抗生素耐药性,导致细菌... 详细信息

背景和目的 β内酰胺类抗生素的发现和使用为人类抵御细菌感染做出了巨大贡献,但随着抗生素的广泛、大量使用,细菌耐药性问题,尤其是由超广谱β内酰胺酶(extended-spectrumβ-lactamases,ESBLs)介导的β内酰胺类抗生素耐药性,导致细菌对临床常用抗生素耐药。不适当的初始抗生素治疗,可引起病人住院时间延长、费用增加,并可能导致死亡率上升。因此快速准确检测超广谱β内酰胺酶,将有助于相应感染性疾病的治疗和预防。检测超广谱β内酰胺酶的方法可分为表型鉴定法和分子生物学方法。表型鉴定法包括CLSI(Clinical and Laboratory Standards Institute)推荐的ESBLs检测法(包括筛选试验和表型确证试验),三维试验,Etest ESBLs条,Vitek ESBLs检测卡,Microscan ESBLs检测板和BD Phoenix自动化微生物系统等。分子生物学方法包括DNA探针法,寡核苷酸分型,PCR-RFLP,PCR-SSCP,连接酶反应,Real-time PCR和核酸测序法等。 Vitek-2高级专家系统通过对多种抗生素最小抑菌浓度的分析来推测ESBLs表型,通常对细菌药敏结果给出多种参考结果,这要求检测者具有丰富的经验。检测者一旦将菌株确认为产ESBLs,仪器会自动将体外测试敏感的药物修改为耐药表型,极大地限制了临床应用药物的种类。为确证Vitek-2仪器配套药敏卡AST-GN10(ref 22009)和AST-N021(ref 22030)推测产ESBLs结果的可靠性和找到一种简便实用的鉴定ESBLs的方法,我们收集高级专家系统提示产ESBLs的G菌(主要为大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌),用CLSI(Clinical and LaboratoryStandards Institute)推荐的药敏纸片表型确证方法和PCR基因分型法进行研究。方法实验分三个部分。首先收集Vitek-2提示ESBLs阳性菌株采用国产药敏纸片进行表型确证试验,然后对所有确证试验阳性菌株和部分阴性菌株进行常规PCR扩增、测序、与已知基因序列比对,最后将设计引物应用到荧光染料法实时PCR扩增,建立了TEM、SHV和CTX-M型ESBLs荧光染料法实时PCR检测的方法。结果及讨论 1表型确证试验实验结果证明Vitek-2高级专家系统和药敏纸片确证试验两种方法一致性达到89.7%(78/87,仅计算CLSI纸片确证法推荐应用菌株)。对于那些受经济条件限制,无法得到Vitek-2仪器的医院,可以应用国产药敏纸片进行ESBLs检测。10株Vitek-2提示产ESBLs菌株,应用纸片法确证试验未达ESBLs阳性标准。这些差异需要分子生物学试验进一步验证。实验中发现5株阴沟肠杆菌、1株弗劳地枸橼酸杆菌仪器提示产ESBLs,纸片确证试验也阳性,但CLSI尚未把这些细菌列入产ESBLs确证试验范围,有望用分子生物学方法解决这一问题。我们同时对纸片测试提示头孢西丁耐药的菌株(Vitek提示通透性改变)用酶粗提物三维试验和药敏纸片细菌直接测试法进行质粒头孢菌素酶检测,仅一株细菌表型检测阳性,推测本院产ESBLs菌头孢西丁抗性可能主要由于细菌膜通透性改变引起。 2常规PCR反应及测序结果根据文献发表的基因序列,应用引物设计软件,在TEM、SHV和CTX-M型耐药基因保守区设计引物,对已知基因型菌株(TEM和SHV)及表型方法确证为产ESBLs的G菌进行PCR扩增,引物TEM、SHV、CTX-M-3、CTX-M-19均得到扩增产物,发现多数细菌携带TEM和CTX-M-1群耐药基因,部分细菌携带SHV和CTX-M-9群耐药基因。扩增结果同时提示在院内还未出现携带CTX-M-8、2、25群基因的细菌。本文设计的引物对不携带耐药基因的标准菌株扩增结果为阴性。通过对肺炎克雷伯菌(标本号为071703的)扩增产物进行基因测序并将测序结果与Pubmed公布基因比对,同源性均在98%以上。证明此四对引物可特异扩增相应基因,适合今后开展临床基因扩增研究。应用设计引物扩增,大肠埃希菌中TEM型、CTX-M-1群、CTX-M-9群基因产物阳性率分别为85.2%,63.0%,48.1%。肺炎克雷伯菌中TEM型、SHV型、CTX-M-1群、CTX-M-9群基因产物阳性率分别为64.0%,68.0%,56.0%,28.0%。TEM、SHV型ESBLs基因的鉴别主要依赖全基因测序,因此携带这些基因的细菌可能仅代表具有广谱耐药性,是否为产ESBLs菌需进一步验证。CTX-M-1群、CTX-M-9群基因在大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌均有扩增,提示CTX-M型酶为院内优势ESBLs。部分菌株同时携带CTX-M-1,CTX-M-9这两种同一基因型不同亚群耐药基因,此两种基因是否存在于同一质粒或整合子上及两种基因表达的调控及相互关系值得进一步研究。

关键词：超广谱β内酰胺酶表型确证试验聚合酶链反应实时PCR

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临床产超广谱β-内酰胺酶菌株的耐药性分析

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中国康复理论与实践 2005年第4期11卷 297-298页

作者：李晨周树清高军陈惠马岳珠北京博爱医院院感科北京博爱医院医务处北京市100068 北京博爱医院药剂科北京市100068 北京博爱医院检验科北京市100068

目的探讨临床产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株的耐药谱特点及其耐药变迁趋势.方法采用MIC方法对2001年4月～2004年3月我院临床标本中分离出的非重复大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌进行产ESBLs株初筛,用双纸片扩散法做表型确证试验.结果临床产... 详细信息

目的探讨临床产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株的耐药谱特点及其耐药变迁趋势.方法采用MIC方法对2001年4月～2004年3月我院临床标本中分离出的非重复大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌进行产ESBLs株初筛,用双纸片扩散法做表型确证试验.结果临床产ESBLs菌株分离率呈逐年上升趋势,其耐药率和最小抑菌浓度几何均数Gm均高于ESBLs阴性菌株.结论应加强对产ESBLs菌株的检测,为合理使用抗生素提供依据.

关键词：产超广谱β-内酰胺酶菌株耐药性分析产ESBLs菌株 2004年3月 2001年4月合理使用抗生素肺炎克雷伯菌表型确证试验双纸片扩散法最小抑菌浓度大肠埃希菌耐药变迁临床标本上升趋势几何均数耐药谱 MIC 分离率耐药率

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上海地区产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的实验和临床研究

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中国抗感染化疗杂志 2001年第3期1卷 150-154页

作者：熊自忠朱德妹胡付品吴 张婴元汪复上海复旦大学附属华山医院抗生素研究所 200040

目的 :了解上海地区临床分离大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌中超广谱 β内酰胺酶 (ESBLs)的发生率、流行情况、对抗菌药物的耐药性、产酶基因的转移特征以及感染类型和医院感染的临床特征。方法 :用双纸片法和表型确证试验 (MIC法 )检测ESBL... 详细信息

目的 :了解上海地区临床分离大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌中超广谱 β内酰胺酶 (ESBLs)的发生率、流行情况、对抗菌药物的耐药性、产酶基因的转移特征以及感染类型和医院感染的临床特征。方法 :用双纸片法和表型确证试验 (MIC法 )检测ESBLs产生株 ;Kirby Bauer(KB)法测定细菌对抗菌药物的敏感性 ;接合转移试验检测产酶基因的可传播性 ;对上述细菌感染中部分患者进行病史调查与分析。结果 :肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中ESBLs产生株的发生率分别为 3 9.4 %、2 1.5 % ,ES BLs产生株对于大多数 β内酰胺类药物明显耐药 ,并对氨基糖苷类、氟喹诺酮类多数耐药 ,对亚胺培南则呈现敏感 ;ESBLs产生株可以通过接合转移将其产酶基因转移给敏感株 ,转移频率多在 10 -3～ 10 -7,双纸片法和表型确证试验结果显示转移接合子具有与产ESBLs供体菌相同的耐药表型 ,质粒提取、聚合酶链反应 (PCR)检测结果两者亦相同 ;ESBLs产生株主要引起医院感染且患者的转归较差。结论 :肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌ESBLs产生株大多为多重耐药菌 ;ESBLs产生株可通过结合转移将产酶基因转移给敏感菌 ,导致耐药性传播 ;ESBLs产生株为引起医院感染的重要病原菌 ,治疗较困难 ,需要加强检测。

关键词：上海超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌肺炎克雷伯菌临床研究双纸片法表型确证试验药物敏感性

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肠杆菌科细菌碳青霉烯酶的检测

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国际检验医学杂志 2011年第16期32卷 1836-1836,1838页

作者：李岷赵苏瑛曹慧玲江苏省中医院检验科南京210029

目的调查本院肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的情况。方法收集2010年1～5月临床分离的肠杆菌科细菌,采用K-B纸片法进行药敏试验,以三代头孢菌素、亚胺培南、美罗培南为检测药物,筛选出可能产碳青霉烯酶的菌株120株,采用改良的Hodge试验进行... 详细信息

目的调查本院肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的情况。方法收集2010年1～5月临床分离的肠杆菌科细菌,采用K-B纸片法进行药敏试验,以三代头孢菌素、亚胺培南、美罗培南为检测药物,筛选出可能产碳青霉烯酶的菌株120株,采用改良的Hodge试验进行确证。结果在120株耐一种或多种三代头孢菌素,提示可能产生碳青霉烯酶的肠杆菌科细菌中,通过表型确证试验确证为阳性的细菌有4株,肺炎克雷伯菌2株,大肠埃希菌1株,弗劳地枸橼酸杆菌1株。结论表型确证试验阳性的细菌中,如需准确辨别亚型,最好用分子生物学方法检测基因序列。

关键词：肠杆菌科碳青霉烯酶表型确证试验

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