耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌耐药特点及耐药基因分析

作     者：孙艳 

作者单位：哈尔滨医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：多丽波

授予年度：2020年

学科分类：100208[医学-临床检验诊断学] 1002[医学-临床医学] 10[医学] 

主      题：耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌 碳青霉烯酶基因 耐药性 表型确证试验 

摘      要：目的:了解哈尔滨医科大学附属第二医院临床分离耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(Carbapenem-resistant Enterobacteriaceae,CRE)对临床上常用抗菌药物的耐药特点,探讨我院CRE菌株产碳青霉烯酶情况及产酶基因型,阐述我院CRE耐药机制,为临床进一步采取措施预防及控制CRE感染提供依据。方法:收集2017年7月至2019年12月临床非重复分离的70株CRE,采用K-B纸片药敏法和MIC法检测受试菌株对临床常用抗菌药物的敏感性,采用MHT、m CIM及e CIM试验进行碳青霉烯酶表型检测,采用PCR法检测常见碳青霉烯酶耐药基因bla 、bla 、bla 、bla 、bla ,通过DNA测序进一步确定碳青霉烯酶基因亚型。结果:分离到的CRE菌株以肺炎克雷伯菌(47株,占67.14%)及大肠埃希菌(19株,占27.14%)为主,另外检出2株粘质沙雷菌,1株阴沟肠杆菌以及1株产酸克雷伯菌;主要分布于外科(45.71%),重症监护病房分离率也较高(24.28%),肺炎克雷伯菌主要来源于痰液(46.81%)及静脉血(25.53%)标本,而大肠埃希菌在穿刺液及尿液标本中分离较多,分别占42.10%和26.32%。70株CRE菌株对青霉素类、头孢菌素类、喹诺酮类抗生素抗生素高度耐药,耐药率均高于86.21%,对复方新诺明耐药率相对较低,为57.14%,替加环素和阿米卡星对CRE的抑菌活性较强,耐药率分别为1.43%和25.71%,大肠埃希菌对各种抗生素的耐药率均高于肺炎克雷伯菌,其对青霉素类,头孢菌素类及氨曲南的耐药率均达100%,70株CRE菌株中仅1株肺炎克雷伯菌对替加环素耐药。PCR法检测出66株CRE菌株携带一种或多种碳青霉烯酶基因,DNA测序结果显示31株仅携带bla 、18株仅携带bla 、3株仅携带bla ,检出11株菌株同时携带bla 和bla ,1株同时携带bla 和bla ,另检出两株同时携带bla 、bla 和bla ,本次研究未检出bla 和bla 基因。表型筛选结果发现,61株CRE菌株MHT试验结果阳性,67株CRE菌株m CIM试验结果阳性,e CIM试验阳性结果共检出37株,30株菌株e CIM试验阴性,另有3株菌株因m CIM结果阴性而未做解释。结论:我院分离的CRE菌株以肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌为主,主要分布在外科及ICU病房。我院CRE耐药情况较为严重,均为多重耐药菌株,对几乎所有的β-内酰胺类药物耐药,但对替加环素和阿米卡星较为敏感。我院分离的CRE菌株耐碳青霉烯类的重要机制是产碳青霉烯酶,bla 及bla 基因是介导我院CRE耐药的主要基因型,肺炎克雷伯菌主要产KPC-2,而大肠埃希菌主要产NDM-1。