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中国动物传染病学报 2024年第4期32卷 73-78页

作者：庄宝灿朱进进余莉安徽医科大学病原生物学教研室、病原生物学安徽省重点实验室人畜共患病安徽高校省级重点实验室合肥230032

制备弓形虫肌动蛋白(TgActin)多肽表位抗体并探讨其应用价值。BepiPred 1.0 Server在线分析设计TgActin抗原表位,并与多种属Actin进行同源比对,选取并合成高特异性多肽片段序列免疫新西兰兔。末次免疫后收集兔血清并使用Protein G纯化抗... 详细信息

制备弓形虫肌动蛋白(TgActin)多肽表位抗体并探讨其应用价值。BepiPred 1.0 Server在线分析设计TgActin抗原表位,并与多种属Actin进行同源比对,选取并合成高特异性多肽片段序列免疫新西兰兔。末次免疫后收集兔血清并使用Protein G纯化抗体,SDS-PAGE检测抗体纯度,ELISA测定抗体效价,Western blot分析抗体的特异性及TgActin表位抗体作为内参抗体的可能性,免疫荧光观察胞内速殖子形态。结果显示,ELISA测定抗体效价为1∶128000,Western blot结果显示抗体特异性识别弓形虫Actin,免疫荧光染色显示TgActin表位抗体可以标记纳虫泡内速殖子。结果表明,成功制备了TgActin多肽表位抗体,可用做弓形虫蛋白检测的内参抗体及其在细胞内的免疫荧光检测,为后续弓形虫研究提供了便利条件。

关键词：弓形虫肌动蛋白表位抗体内参抗体免疫荧光

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利用Pen a 1表位抗体亲和纯化目标蛋白的研究

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分析测试学报 2013年第10期32卷 1174-1179页

作者：赵杰高美须潘家荣兰丽平睢珂牟慧许舒婷中国农业科学院农产品加工研究所北京100193 中国计量学院生命科学院浙江杭州31008

以虾致敏蛋白Pen a 1（Tropomyosin）抗原表位为研究对象,建立了利用Pena 1表位抗体亲和纯化致敏蛋白的新方法.Fmoc法合成致敏Pen a 1蛋白的C端含有3个抗原表位的第247 ～284位氨基酸对应的多肽片段,应用马来酰亚胺法将多肽与KLH（匙孔... 详细信息

以虾致敏蛋白Pen a 1（Tropomyosin）抗原表位为研究对象,建立了利用Pena 1表位抗体亲和纯化致敏蛋白的新方法.Fmoc法合成致敏Pen a 1蛋白的C端含有3个抗原表位的第247 ～284位氨基酸对应的多肽片段,应用马来酰亚胺法将多肽与KLH（匙孔血蓝蛋白）、BSA（牛血清白蛋白）偶联制备人工免疫抗原（Pep-tide-KLH）和人工包被抗原（Peptide-BSA）,免疫人工抗原免疫纯种新西兰白兔,获得多克隆抗血清,抗血清经辛酸-硫酸铵及特异性血清纯化预装柱（HiTrap rProtein A FF）纯化后与溴化氰活化琼脂糖凝4B（CNBr-Activated Sepharose 4B）进行偶联.ELISA（酶联免疫吸附试验）测定该多克隆抗体效价为2.05×106,多肽对抗体的IC50（50％抑制浓度）为0.21 mg/L,交叉试验表明该抗体与虾中非Pena 1蛋白无交叉反应性;Bradford法测定CNBr-Activated Sepharose 4B与抗体的偶联率为90.76％.间接竞争ELISA测定1 mL偶联介质的吸附容量为2.84 mg Pen a 1,免疫亲和柱的加标回收率为89.6％～93.6％,亲和柱使用寿命为4次.

关键词： Pen a 1 表位抗体免疫亲和柱 ELISA

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邮致敏蛋白Pen a 1抗原表位多克隆抗体的制备及应用

邮致敏蛋白Pen a 1抗原表位多克隆抗体的制备及应用

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作者：赵杰中国农业科学院

学位级别：硕士

虾类等海产品因其营养、美味一直是人们钟爱的美食，其消费量及出口量均处于重要地位。但它也是引起食物过敏的重要过敏原之一，这不但对消费者的身体健康及生命安全有巨大的威胁，同时也不利于我国国际贸易的健康发展。因此，开展虾类... 详细信息

虾类等海产品因其营养、美味一直是人们钟爱的美食，其消费量及出口量均处于重要地位。但它也是引起食物过敏的重要过敏原之一，这不但对消费者的身体健康及生命安全有巨大的威胁，同时也不利于我国国际贸易的健康发展。因此，开展虾类过敏原的相关研究受到研究者的极大关注。随着过敏原研究的逐步深入，人们对过敏原抗原表位的识别和鉴定技术越发成熟。抗原表位是过敏原引发过敏反应的基础，基于过敏原的抗原表位开展一系列的研究将具有重要的理论及实际意义。本文以虾中存在的最主要的一种致敏蛋白P en a1(tropomyosin)的抗原表位为研究对象，其研究内容及结果如下： 1. Pen a1抗原表位多肽的合成。采用Fmoc法化学合成针对Pen a1抗原表位的5个多肽片段，并将多肽分别与载体蛋白KLH和BSA偶联制得五5种人工免疫原及5种人工包被原。反向高效液相色谱检测多肽合成纯度分别为：85.97%、88.85%、92.76%、95.44%和88.00%，均达到免疫原纯度要求。斑点免疫法验证合成多肽生物活性良好。采用Ellman试剂检测多肽与载体蛋白的偶联率，偶联效果较好。 2. Pen a1抗原表位抗体的制备及鉴定。5种人工免疫原分别免疫新西兰纯种白兔，获得五种多抗血清，其抗体效价均达到1.024106，较理想。分别以5种多肽为竞争物，进行间接竞争ELISA(ic-ELISA)，获得对应回归方程，计算得其IC50分别为：0.1574μg mL、0.4324μg mL、0.2291μg mL、0.1145μg mL和0.3605μg mL。 3. Pen a1表位抗体制备免疫亲和柱及其效能测定。选择特异性良好且抗血清获得量较大的第5号表位多肽抗血清，抗血清经辛酸-硫酸铵及特异性血清纯化预装柱纯化后与溴化氰活化的琼脂糖凝4B进行偶联，Bradford法测定其偶联率为90.76%。ic-ELISA测定1mL偶联介质的吸附容量为2.84mg Pen a1，免疫亲和柱的加标回收率为89.6%-93.6%，亲和柱使用寿命为4次。 4. Pen a1表位抗体用于食品中虾致敏蛋白的快速检测研究。选取市售的标签中标注含有虾肉成分和不含虾肉成分的8种具有代表性的食品，利用Pen a1的第2个表位抗体对食品中是否含有虾过敏成分进行定性及定量判定，其中定性判定结果与标签一致，并且对于标签标示不详的食品，也具有较好的识别性，同时还可大致估算出食品中所含的虾过敏蛋白的含量。 5. Pen a1表位抗体用于检测辐照对Pen a1免疫原性的影响。对提取纯化的2mg/mL的Pen a1采用-射线进行辐照处理，辐照剂量为0、6.7kGy，利用SDS-PAGE结合MALDI-TOF MS测定，发现辐照后，36kD的Pen a1蛋白溶液中出现了约20kD、60kD以及40kD左右的新的条带。Western Bolt验证了60kD附近的蛋白条带也可被5个表位抗体识别，表明表位抗体在检测的过程中具有较好的特异性。综上，本文尝试了从致敏蛋白抗原表位出发，对表位对应的多肽片段进行合成、鉴定、偶联和制备抗体，同时利用抗体进行免疫亲和柱的制备、食品中相应致敏蛋白的检测及检测蛋白经辐照处理后蛋白表位对应的免疫原性的变化情况，为开发致敏蛋白的免疫亲和技术、食品中致敏蛋白的检测及加工处理方法对致敏蛋白脱敏机理的研究奠定基础。

关键词：虾致敏蛋白Pen a1 表位抗体酶联免疫吸附试验

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SSA/Ro抗原及其自身抗体与心律失常的研究进展

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中华临床医师杂志（电子版） 2014年第12期8卷 130-134页

作者：黄媛帅宗文安徽医科大学第一附属医院风湿免疫科合肥230022

抗SSA/Ro抗体的靶抗原SSA/Ro核蛋白由Ro蛋白和hYRNA两部分组成,其中Ro蛋白包括Ro60和Ro52两种类型,Ro60蛋白是由Heat重复区域和vWFA区域两结构域组成,Ro52蛋白则具有三结构域蛋白家族成员的结构特征。Ro60抗原与Ro52抗原均包含一系列抗... 详细信息

抗SSA/Ro抗体的靶抗原SSA/Ro核蛋白由Ro蛋白和hYRNA两部分组成,其中Ro蛋白包括Ro60和Ro52两种类型,Ro60蛋白是由Heat重复区域和vWFA区域两结构域组成,Ro52蛋白则具有三结构域蛋白家族成员的结构特征。Ro60抗原与Ro52抗原均包含一系列抗原表位,并且可分别诱导产生针对这些抗原表位的抗体,这些表位抗体与不同的疾病及临床表现相关。抗SSA/Ro抗体可经胎盘由母亲传递至胎儿,导致胎儿心肌细胞炎症损伤或干扰钙离子通道功能从而产生胎儿或新生儿房室传导阻滞,此外QTc间期延长、窦性心动过缓等心律失常也有报道。曾经认为抗SSA/Ro抗体不会对成人心脏有影响,但最新的研究发现抗SSA/Ro抗体可通过抑制KCNH2离子通道功能干扰心肌细胞复极从而导致成人QTc间期延长,并不断有报道显示抗SSA/Ro抗体与成人房室传导阻滞相关。抗SSA/Ro抗体导致心律失常的确切机制目前仍未完全阐明,抗SSA/Ro表位抗体在心律失常中的分布仍不清楚,对抗SSA/Ro表位抗体与心律失常间关系的研究将具有重要的理论和临床实际意义。

关键词：自身抗体心律失常,心性 SSA Ro抗原表位抗体发病机制

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