利用Pen a 1表位抗体亲和纯化目标蛋白的研究

作     者：赵杰 高美须 潘家荣 兰丽平 睢珂 牟慧 许舒婷 ZHAO Jie;GAO Mei-xu;PAN Jia-rong;LAN Li-ping;SUI Ke;MOU Hui;XU Shu-ting

作者机构：中国农业科学院农产品加工研究所北京100193 中国计量学院生命科学院浙江杭州31008 

出 版 物：《分析测试学报》 (Journal of Instrumental Analysis)

年 卷 期：2013年第32卷第10期

页      面：1174-1179页

核心收录：

学科分类：081702[工学-化学工艺] 07[理学] 070205[理学-凝聚态物理] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 080501[工学-材料物理与化学] 0805[工学-材料科学与工程（可授工学、理学学位）] 0703[理学-化学] 0702[理学-物理学] 

基　　金：国家"十二五"科技支撑课题(2011BAK10B03) 农业部公益性行业科研专项(201103007) 

主　　题：Pen a 1 表位抗体 免疫亲和柱 ELISA 

摘      要：以虾致敏蛋白Pen a 1（Tropomyosin）抗原表位为研究对象,建立了利用Pena 1表位抗体亲和纯化致敏蛋白的新方法.Fmoc法合成致敏Pen a 1蛋白的C端含有3个抗原表位的第247 ～284位氨基酸对应的多肽片段,应用马来酰亚胺法将多肽与KLH（匙孔血蓝蛋白）、BSA（牛血清白蛋白）偶联制备人工免疫抗原（Pep-tide-KLH）和人工包被抗原（Peptide-BSA）,免疫人工抗原免疫纯种新西兰白兔,获得多克隆抗血清,抗血清经辛酸-硫酸铵及特异性血清纯化预装柱（HiTrap rProtein A FF）纯化后与溴化氰活化琼脂糖凝4B（CNBr-Activated Sepharose 4B）进行偶联.ELISA（酶联免疫吸附试验）测定该多克隆抗体效价为2.05×106,多肽对抗体的IC50（50％抑制浓度）为0.21 mg/L,交叉试验表明该抗体与虾中非Pena 1蛋白无交叉反应性;Bradford法测定CNBr-Activated Sepharose 4B与抗体的偶联率为90.76％.间接竞争ELISA测定1 mL偶联介质的吸附容量为2.84 mg Pen a 1,免疫亲和柱的加标回收率为89.6％～93.6％,亲和柱使用寿命为4次.