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血清凝集、基因测序联合检测群霍乱弧菌的应用

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现代检验医学杂志 2015年第2期30卷 84-86页

作者：刘万静王多春唐倩安康市疾病预防控制中心生物检验科陕西安康725000 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所北京102206 安康市人民医院检验科陕西安康725000

目的：避免霍乱弧菌检测假阳性，提高检测正确率。方法随机选取2013年1～7月，全国各省市 CDC 送往中国CDC 霍乱初筛阳性菌株14株；用 LB 营养琼脂培养12 h，挑取单菌落进行霍乱弧菌血清凝集，同时水煮模板法提取菌株的DNA。针对弧菌属1... 详细信息

目的：避免霍乱弧菌检测假阳性，提高检测正确率。方法随机选取2013年1～7月，全国各省市 CDC 送往中国CDC 霍乱初筛阳性菌株14株；用 LB 营养琼脂培养12 h，挑取单菌落进行霍乱弧菌血清凝集，同时水煮模板法提取菌株的DNA。针对弧菌属16SrDNA 序列设计引物，进行弧菌16SrDNA PCR 检测，电泳观察16SrDNA 产物，将16SrDNA 阳性产物送测序公司测序，测序结果在 NCBI 网站上进行 Blast 比对，分析比较血清凝集和 Blast 比对结果。结果共选取14株菌进行实验，血清凝集阳性12株，2株未凝。经弧菌16SrDNA 扩增，电泳观察14株菌均扩增出相应的片段，说明所选菌株均为弧菌属。将14株菌的16SrDNA 阳性产物测序，并将测序结果进行 Blast 比对：2株血清未凝集菌均是哈维氏弧菌；12株血清凝集阳性的菌中，1株是需钠弧菌，其余11株是霍乱弧菌。结论血清凝集和基因测序联合检测群霍乱弧菌，可避免霍乱弧菌检测假阳性，提高检测正确率。

关键词：霍乱弧菌血清凝集 16SrDNA 基因测序

沙门氏菌快速检测技术方法学评估及临床应用研究

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沙门氏菌快速检测技术方法学评估及临床应用研究

作者：秦建成河北北方学院

学位级别：硕士

目的,对四种快速新型的沙门氏菌检测方法进行评估、比较及其临床应用研究,同时探索能够对沙门氏菌快速鉴定、分型、分析的最佳方法并建立和优化临床标本检测流程。方法,以生化反应联合血清凝集法为标准方法分别对胶体金法、质谱法、16Sr... 详细信息

目的,对四种快速新型的沙门氏菌检测方法进行评估、比较及其临床应用研究,同时探索能够对沙门氏菌快速鉴定、分型、分析的最佳方法并建立和优化临床标本检测流程。方法,以生化反应联合血清凝集法为标准方法分别对胶体金法、质谱法、16Sr DNA法、CLSPT法结果、方法学、临床应用进行研究、比较和评估。应用沙门氏菌胶体金法试剂对65例临床腹泻患者粪便标本(其中沙门菌属感染20例,非沙门菌感染45例)及44株纯培养的沙门菌属菌悬液进行检测,评价胶体金试剂的检测性能。同时应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization–Time of Flight Mass Spectrometry,MALDI-TOF-MS)16Sr DNA、CLSPT(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats locus spacer pair typing,CLSPT)方法对上述分离和纯培养的64株已知的沙门菌进行检测,统计鉴定符合率,并对各方法进行比较分析。结果,胶体金法敏感性100%,特异性98.7%,准确度99.3%,最低检出限1×106 cfu·ml-1;试剂可实现A不同亚群沙门氏菌检测,与其他肠道腹泻致病菌无交叉反应,且在4℃和37℃避光保存6个月,检测结果未发生改变。该检测试剂联合快速亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液能够很好的提高沙门菌检出率。质谱技术,质谱仪对沙门菌的属水平鉴定率达100%(64/64);血清型水平上,肠炎沙门菌符合率97.22%(35/36),鼠伤寒沙门菌为100%(17/17)。CLSPT结果,扩增片段在750bp左右,64株沙门菌经CLSPT方法检测结果肠炎沙门菌34株,碱基匹配率为97%-100%,鉴定符合率94.44%(34/36);鼠伤寒沙门符合率100%(17/17)。甲型副伤寒100%(2/2),乙型副伤寒100%(2/2)。16sr DNA结果,PCR片段碱基长度1500bp左右,检测出肠炎沙门菌35株,碱基匹配率为99%-100%,鉴定符合率97.22%(35/36);鼠伤寒沙门菌17株,鉴定符合率100%(17/17)。四种方法在属水平鉴定符合率无显著差异(P>0.05),在种水平上MALDI-TOF-MS、16Sr DNA、CLSPT方法鉴定符合率无显著差异(P>0.05),三种方法有较高的一致率,和比较满意的一致性。胶体金法与质谱技术法最为节省时间(见表4-9)。如两种方法联合应用可为临床提供快速准确报告,具有重要意义。结论,胶体金法使用非常方便,检测速度非常快,但只能将沙门菌鉴定到属水平;质谱技术无论在属水平还是种水平都有较好的鉴定结果,且具有强大的数据分析能力,速度也非常快;CLSPT基于成簇的规律间隔的短回文重复序列(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)分型方法的改进方法,即CRISPR位点间隔序列分型(CLSPT)法分析位点简化、简单方便、准确率高,但结果影响因素多检测时间长;16sr DNA法,虽然很快很准但对沙门氏菌种间碱基分辨率较差。胶体金法和MALDI-TOF-MS法均为目前最为快速的沙门菌检测方法,胶体金法最适用于快速初筛检测且准确可靠,可为临床提供快速的初步报告,为患者的快速诊疗提供主要方向,质谱技术最适用于快速鉴定、分型、数据分析,可快速的为临床提供详细的病原信息及分析工具,如两者联合应用,可互为补充,大大提高临床标本的检测速度、灵敏度和特异度,具有广阔的应用前景。

关键词：沙门氏菌快速检测胶体金法 MALDI-TOF-MS 16SrDNA CLSPT 生化反应血清凝集

与诊断血清发生交叉凝集的5株肠杆菌的分离鉴定

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现代预防医学 2012年第11期39卷 2824-2825+2833页

作者：刘伟王菊光杨扬孙晓华谢利军李繁北京市海淀区疾病预防控制中心

目的了解能与主要肠道致病菌诊断血清发生交叉凝集的肠杆菌科常见细菌,提示交叉凝集是血清凝集试验中较常见的现象,避免由于交叉凝集而产生的错误判断,为今后的细菌鉴定工作提供参考。方法参照《食品卫生微生物学检验》GB/T4789-2008(20... 详细信息

目的了解能与主要肠道致病菌诊断血清发生交叉凝集的肠杆菌科常见细菌,提示交叉凝集是血清凝集试验中较常见的现象,避免由于交叉凝集而产生的错误判断,为今后的细菌鉴定工作提供参考。方法参照《食品卫生微生物学检验》GB/T4789-2008(2003)和GB 4789-2010检测2008～2010年海淀区各次食物中毒送检样品.对检出的交叉凝集菌进行血清学试验和生化试验。结果在肠道菌的检测中检出5株与诊断血清发生交叉凝集的细菌,分别是蜂房哈夫尼亚菌、阴沟肠杆菌、产H2S的大肠埃希氏菌和2株弗氏柠檬酸盐杆菌。结论某些属的肠道细菌因携带与一些主要肠道致病菌相同或相关的抗原,所以会发生交叉凝集现象。故在鉴定肠道致病菌时要用生化试验结合血清学试验来共同确认。

关键词：交叉凝集肠道致病菌血清凝集肠杆菌科细菌

11株鼠伤寒沙门菌血清凝集及PFGE的分析

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医学动物防制 2018年第1期34卷 46-48页

作者：李玲崔仑标周品众张宏宾高海英江阴市疾病预防控制中心江苏214434

目的了解江阴市2016年饮食和服务行业从业人员肠道检测中检出的11株鼠伤寒沙门菌的H抗原凝集情况及其同源情况。方法采用培养基生长特征培养、生化反应、荧光PCR检测、血清学凝集试验及脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis... 详细信息

目的了解江阴市2016年饮食和服务行业从业人员肠道检测中检出的11株鼠伤寒沙门菌的H抗原凝集情况及其同源情况。方法采用培养基生长特征培养、生化反应、荧光PCR检测、血清学凝集试验及脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)。结果 11株菌通过培养基生长培养、生化反应、荧光PCR检测阳性符合沙门菌,血清型均为O4,5,12∶Hi∶H2,确定为鼠伤寒沙门菌。PFGE检测样本号JY008和JY009同源,其他均不同源。结论 11株鼠伤寒沙门菌血清型相同,且均凝集出H抗原2相。2016年饮食和服务行业从业人员中鼠伤寒沙门菌基因组多样化,同源性低。

关键词：鼠伤寒沙门菌血清凝集脉冲场凝胶电泳(PFGE) 同源性

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宝山区猪沙门氏菌流行病学调查

宝山区猪沙门氏菌流行病学调查

作者：金明华上海交通大学

学位级别：硕士

通过对宝山区发病猪进行猪沙门氏菌病原分离鉴定，提取抗原，建立血清凝集方法，与ELISA进口试剂盒进行比较，两者差异性为5%左右，血清凝集方法有较高的符合率，完全可以用于临床检测。用此方法检测，结果显示养猪场卫生管理规范，饲... 详细信息

通过对宝山区发病猪进行猪沙门氏菌病原分离鉴定，提取抗原，建立血清凝集方法，与ELISA进口试剂盒进行比较，两者差异性为5%左右，血清凝集方法有较高的符合率，完全可以用于临床检测。用此方法检测，结果显示养猪场卫生管理规范，饲养环境较好猪场，猪霍乱沙门氏菌血清阳性率就低（10%），比较脏乱差且饲养密度大的猪场阳性率就高，可达75%。

关键词：猪沙门氏菌血清凝集 PCR ELISA 临床检测

食品中大肠杆菌O157∶H7疑似菌株的分离和鉴定研究

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中国酿造 2014年第6期33卷 46-49页

作者：杨一群陈洋杜文芳侯斌斌毕旺来李睿武汉轻工大学生物与制药工程学院湖北武汉430023 农产品加工湖北省协同创新中心湖北武汉430023

采集117份食品样品,经过PCR扩增毒力基因stx1、stx2和O157特征基因rfbO157初筛。将部分PCR阳性的食品样品,经过新生霉素EC增菌液增菌、免疫磁珠富集、血清学鉴定、菌落PCR复筛,分离出5株O157:H7疑似菌株。其中1株O157∶H7疑似菌株EC5.1... 详细信息

采集117份食品样品,经过PCR扩增毒力基因stx1、stx2和O157特征基因rfbO157初筛。将部分PCR阳性的食品样品,经过新生霉素EC增菌液增菌、免疫磁珠富集、血清学鉴定、菌落PCR复筛,分离出5株O157:H7疑似菌株。其中1株O157∶H7疑似菌株EC5.11不能与O157诊断血清产生良好凝集反应,采用血清学方法该菌容易漏筛。采用PCR扩增rfbO157基因和H7鞭毛抗原编码基因fliCH7,EC5.11均呈阳性反应。最终包括EC5.11在内的4株疑似菌株被证实为O157∶H7血清型。本研究提出了一种改良方法筛选、鉴定食品中O157∶H7疑似菌株,比起传统方法,减少工作量的同时提高了筛选的特异性。

关键词：大肠杆菌O157∶H7 分离鉴定食品血清凝集聚合酶链反应

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1株鞭毛抗原减弱的吉韦沙门菌分析报告

微量元素与健康研究 2016年第2期33卷 65-66页

作者：沈梅云张晴无锡市锡山区疾病预防控制中心江苏无锡214101

目的:对外环境监测标本中发现的1株吉韦沙门菌进行详细的分离鉴定。方法:采集外环境监测标本进行沙门菌分离培养,参照GB4789.4-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验》的方法进行分离检测,并对分离菌株进行API生化反应、血清学试验... 详细信息

目的:对外环境监测标本中发现的1株吉韦沙门菌进行详细的分离鉴定。方法:采集外环境监测标本进行沙门菌分离培养,参照GB4789.4-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验》的方法进行分离检测,并对分离菌株进行API生化反应、血清学试验、噬菌体裂解试验。结果:从1份甲鱼涂抹标本中检出1株鞭毛抗原减弱的沙门菌,经API生化反应、位相诱导后血清凝集试验及噬菌体裂解试验,此菌株为吉韦沙门菌。结论:沙门菌的鞭毛结构易受损或缺陷,检测中可使用位相诱导试验,达到正确的分型目的。

关键词：外环境血清凝集位相诱导吉韦沙门菌

与志贺菌和大肠埃希菌O157诊断血清交叉凝集反应细菌的分离和鉴定

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预防医学情报杂志 2013年第7期29卷 612-614页

作者：张宗辉奚弟荣南充市疾病预防控制中心四川南充637000

目的了解食品中能与志贺菌、大肠埃希菌O157发生交叉凝集的细菌,为防止误诊提供参考。方法采用染色形态鉴别、血清学及生化等方法进行检测。结果对食品风险监测205件样品中检出2种(3株)肠道杆菌能与志贺菌、大肠埃希菌O157诊断血清交叉... 详细信息

目的了解食品中能与志贺菌、大肠埃希菌O157发生交叉凝集的细菌,为防止误诊提供参考。方法采用染色形态鉴别、血清学及生化等方法进行检测。结果对食品风险监测205件样品中检出2种(3株)肠道杆菌能与志贺菌、大肠埃希菌O157诊断血清交叉凝集。结论肠杆菌科、弧菌科某些种属细菌可携带与志贺菌、大肠埃希菌O157相同或相关抗原,故在鉴定这些杆菌时除依血清学外,还应加用生化试验等检测作出最后判定。

关键词：志贺菌大肠埃希菌O157 血清凝集交叉反应检测

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一起由副溶血性弧菌引起的食物中毒

中国实用医药 2015年第30期10卷 265-266页

作者：郜杏丽高琦陈墨江晓南京市秦淮区疾病预防控制中心 210029 南京市疾病预防控制中心

目的通过实验室检测分析一起食物中毒的病原菌,并对不同类别样品中检出的副溶血性弧菌进行血清分型,评估来源是否一致。方法按照《食品卫生微生物学检验副溶血性弧菌检验》中的方法 ,检测此起食物中毒事件的剩余食物、餐具、患者呕吐物... 详细信息

目的通过实验室检测分析一起食物中毒的病原菌,并对不同类别样品中检出的副溶血性弧菌进行血清分型,评估来源是否一致。方法按照《食品卫生微生物学检验副溶血性弧菌检验》中的方法 ,检测此起食物中毒事件的剩余食物、餐具、患者呕吐物和肛拭子中的溶血性链球菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、霍乱弧菌、蜡样芽孢杆菌、致泻大肠埃希氏菌等致病菌。结果餐具及运输用具类采集14份样品,检出副溶血性弧菌6份。患病学生的14份肛拭和1份呕吐物中,有5份肛拭子检出副溶血性弧菌。其余样品均未检出目标微生物。将餐具和肛拭子中检出的副溶血性弧菌进行血清凝集试验,菌体抗原均为O3,K抗原多价均为K6。结论本起食物中毒是由副溶血性弧菌引起,建议卫生监督部门要加强对食品运输环节的监督检查力度。

关键词：副溶血性弧菌食物中毒餐具血清凝集