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双链置换探针实时荧光定量PCR结合融解曲线特性分析检测高危型人乳头瘤病毒16、58亚型

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交通医学 2009年第5期23卷 493-496页

作者：张金业吴月平刘继斌林兰李明吴晓燕南通大学附属肿瘤医院检验科江苏226361 南通市第三人民医院检验科

目的:建立一种准确、快速、实用的检测人乳头瘤病毒(HPV)16、58亚型的方法。方法:根据HPV16和HPV58亚型的序列特异性各设计一对引物和一对型特异性双链置换探针,采用实时荧光PCR扩增后,通过非高分辨的融解曲线分析在同一荧光通道内有效... 详细信息

目的:建立一种准确、快速、实用的检测人乳头瘤病毒(HPV)16、58亚型的方法。方法:根据HPV16和HPV58亚型的序列特异性各设计一对引物和一对型特异性双链置换探针,采用实时荧光PCR扩增后,通过非高分辨的融解曲线分析在同一荧光通道内有效区分两种HPVDNA基因亚型。结果:1ng/μl、0.1ng/μl和0.01ng/μlHPV16和HPV58模板荧光PCR扩增及融解曲线分析显示,融解曲线分析较定量扩增更灵敏、特异。HPV16和HPV58融解曲线对应的Tm值分别为83.5°C和87°C。结论:所建双链置换探针实时荧光定量PCR结合融解曲线分析检测HPV16、58亚型的方法灵敏、特异,有临床应用价值。

关键词：双链置换探针实时荧光定量PCR 人乳头瘤病毒(HPV) 融解曲线宫颈癌

实时荧光PCR结合融解曲线分析快速鉴定临床常见曲霉菌

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中国真菌学杂志 2012年第6期7卷 330-334,338页

作者：史俊艳郭莉娜徐英春王瑶王贺刘文静中国医学科学院北京协和医院北京100730

目的采用实时荧光PCR结合融解曲线分析的方法快速将临床常见曲霉菌鉴定到种的水平。方法①普通PCR扩增真菌ITS区后进行序列比对,准确鉴定菌种并设计种特异性引物和探针。②采用实时荧光PCR的方法及融解曲线分析,根据不同的解链温度将5... 详细信息

目的采用实时荧光PCR结合融解曲线分析的方法快速将临床常见曲霉菌鉴定到种的水平。方法①普通PCR扩增真菌ITS区后进行序列比对,准确鉴定菌种并设计种特异性引物和探针。②采用实时荧光PCR的方法及融解曲线分析,根据不同的解链温度将5种临床常见曲霉菌鉴定到种的水平。③特异性、敏感性、重复性试验。结果①解链曲线分析显示,不同种曲霉菌的种特异性探针有特异的Tm值,根据Tm值的不同可以将5种曲霉菌区分开来:烟曲霉Tm=61.4℃,黄曲霉Tm=57.4℃,黑曲霉Tm=67.7℃,土曲霉Tm=55.2℃和64.5℃,构巢曲霉Tm=65.8℃。其中小孢根霉和疣状瓶霉与烟曲霉探针发生交叉反应,阴性对照不出现特异性的解链曲线。②该方法对5种曲霉菌的检测下限分别为:烟曲霉56.8 fg,黄曲霉1 110 fg,黑曲霉13.7 fg,土曲霉123 fg,构巢曲霉780 fg。③重复性试验结果显示,同一种曲霉菌的Tm值波动范围不超过0.5℃。结论采用实时荧光PCR结合融解曲线分析的方法可以快速准确地将临床常见曲霉菌鉴定到种的水平,具有良好的敏感性、特异性和可重复性,有助于临床侵袭性曲霉感染的诊断和指导抗真菌药物使用。

关键词：实时荧光PCR 曲霉菌融解曲线

革胡子鲶MHC基因表达qPCR分析的引物设计与评估

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天津农学院学报 2016年第4期23卷 33-37,42页

作者：李转转王妍高金伟王晓梅陈成勋李涛莫宝霖天津农学院水产学院天津市水产生态及养殖重点实验室天津300384 天津海友佳音生物科技股份有限公司天津300350 天津农学院基础科学学院天津300384

为应用实时荧光定量PCR(qPCR)技术分析革胡子鲶主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)基因的表达谱,本研究利用Primer 5软件设计扩增革胡子鲶MHC基因片段的引物并进行qPCR评估。结果显示:引物MHCF1-MHCR3在qPCR... 详细信息

为应用实时荧光定量PCR(qPCR)技术分析革胡子鲶主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)基因的表达谱,本研究利用Primer 5软件设计扩增革胡子鲶MHC基因片段的引物并进行qPCR评估。结果显示:引物MHCF1-MHCR3在qPCR扩增时,融解曲线为单一尖锐峰;标准曲线分析显示:引物的扩增效率为99.3%,R2值为0.998。上述结果说明该对引物具有良好的扩增特异性和扩增效率,满足了qPCR扩增的要求。本研究为革胡子鲶MHCⅠ基因表达的qPCR分析奠定了基础。

关键词：革胡子鲶主要组织相容性复合体实时荧光定量PCR 融解曲线扩增效率

血鹦鹉TYR基因表达qPCR分析的引物设计与评估

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天津农业科学 2018年第12期24卷 46-50页

作者：孙学亮高微微石洪玥方珍珍梁健季延滨陈成勋胡婷莹天津农学院水产学院天津市水产生态及养殖重点实验室天津300384

为了解色素相关基因和体色之间的关系,应用实时荧光定量PCR(qPCR)技术分析血鹦鹉的酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)基因的表达谱,通过Primer 5软件设计扩增血鹦鹉TYR基因片段的引物并进行qPCR评估研究。结果显示,引物TYR2F-TYR2R在q PCR扩增时... 详细信息

为了解色素相关基因和体色之间的关系,应用实时荧光定量PCR(qPCR)技术分析血鹦鹉的酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)基因的表达谱,通过Primer 5软件设计扩增血鹦鹉TYR基因片段的引物并进行qPCR评估研究。结果显示,引物TYR2F-TYR2R在q PCR扩增时,融解曲线为单一尖锐峰;标准曲线分析显示,引物的扩增效率为103.3%,R2值为0.994。上述结果说明该对引物具有良好的扩增特异性和扩增效率,满足了qPCR扩增的要求,该研究结果可为血鹦鹉TYR基因表达的qPCR分析奠定基础。

关键词：血鹦鹉酪氨酸酶基因(TYR) 实时荧光定量PCR 融解曲线

运用实时荧光PCR技术诊断Bart’s水肿胎儿及——SEA携带者

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运用实时荧光PCR技术诊断Bart’s水肿胎儿及——SEA携带者