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慢性代谢性酸中毒显著诱导大鼠系膜细胞的增殖

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中国病理生理杂志 2005年第8期21卷 1514-1519页

作者：李琨顾勇赖凌云刘少军郝传明林善锬复旦大学附属华山医院肾脏科上海200023

目的:研究慢性代谢性酸中毒对大鼠肾小球体积、系膜细胞增殖、基质表达的影响及分子机制。方法:采用0·28mol/L NH4Cl喂饲大鼠构建大鼠慢性代谢性酸中毒模型。采用光镜结合图像分析软件观察和分析大鼠肾小球结构。从肾皮质分离大鼠肾小... 详细信息

目的:研究慢性代谢性酸中毒对大鼠肾小球体积、系膜细胞增殖、基质表达的影响及分子机制。方法:采用0·28mol/L NH4Cl喂饲大鼠构建大鼠慢性代谢性酸中毒模型。采用光镜结合图像分析软件观察和分析大鼠肾小球结构。从肾皮质分离大鼠肾小球,肾小球增殖细胞核抗原(pCAN)和p27的表达采用免疫组化和/或Westernblotting检测。肾皮质纤维连接蛋白(FN)mRNA的表达采用荧光定量RT-pCR检测。分别采用[3H]-TdR掺入法和ELISA方法检测了慢性酸负荷对体外培养的大鼠系膜细胞增殖及FN合成的影响。结果:各时点实验组大鼠动脉血pH、[HCO3-]均显著低于对照组(ppppCNA表达增加,p27表达下调,免疫组织化学检测显示肾小球内阳性pCNA细胞主要位于系膜区;第7d、14d大鼠肾皮质FN mRNA的表达显著高于对照组(p蛋白p27的表达下调有关。本研究为慢性代谢性酸中毒参与慢性肾小球疾病的硬化提供了体内和体外证据。

关键词：酸中毒,代谢性肾小球肥大系膜细胞纤维蛋白类增殖细胞核抗原蛋白质p27

阿托伐他汀影响自发性高血压大鼠血压的机制探讨

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中国病理生理杂志 2005年第12期21卷 2324-2327页

作者：葛长江胡申江浙江大学医学院附属第一医院心内科浙江杭州310003

目的:探讨阿托伐他汀控制自发性高血压大鼠(SHR)高血压的机制,研究阿托伐他汀对SHR血浆内皮素-1(ET-1)和主动脉一氧化氮合酶(NOS)的影响,以及对SHR的主动脉平滑肌细胞(ASMC)凋亡和p27蛋白表达的影响。方法:选用8周龄SHR 12只,随机分为... 详细信息

目的:探讨阿托伐他汀控制自发性高血压大鼠(SHR)高血压的机制,研究阿托伐他汀对SHR血浆内皮素-1(ET-1)和主动脉一氧化氮合酶(NOS)的影响,以及对SHR的主动脉平滑肌细胞(ASMC)凋亡和p27蛋白表达的影响。方法:选用8周龄SHR 12只,随机分为阿托伐他汀治疗组(ATV组,N=6)和SHR组(N=6),并以同周龄 WKY(N=6)作为对照。ATV组给以阿托伐他汀(50MG·KG-1·D-1)灌胃。10周后观察3组大鼠血压、血清总胆固醇 (TC)、总甘油三酯(TG)含量变化,血浆ET-1和主动脉NOS活性的改变,以及TUNEL法检测ASMC凋亡率,测定动脉 ASMC p27蛋白表达。结果:阿托伐他汀给药10周后,ATV组动脉收缩压显著低于SHR组[(134．17±3．60)MMHG VS (173．33±3．78)MMHG,pppppROTEIN VS (0．124±0．057)KU／G pROTEIN,ppp27蛋白表达阳性率显著高于WKY大鼠(33．02％± 5．01％ VS 24．25％±4．41％,ppp27蛋白表达阳性率有关。

关键词：阿托伐他汀高血压大鼠内皮缩血管肽1 一氧化氮合酶主动脉细胞凋亡蛋白质p27

1,25二羟维生素D3联合顺铂对子宫内膜癌HEC-1-A细胞增殖及Skp2/p27表达的影响

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现代妇产科进展 2010年第6期19卷 423-426页

作者：林兰郑秀余江江敏郭彩凤李素霞福建中医学院附属第二人民医院妇产科福州350013 福建中医学院附属第二人民医院中心实验室福州350013 福建医科大学附属第一医院妇产科

目的:探讨1,25二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]与顺铂(DDp)联合抑制人子宫内膜癌HEC-1-A细胞的增殖,测定二者作用下S期激酶相关蛋白(Skp2)、抑癌基因p27蛋白的表达。方法:用CCK-8法测定1,25(OH)2D3、DDp及二者联合处理后细胞增殖情况,用流式... 详细信息

目的:探讨1,25二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]与顺铂(DDp)联合抑制人子宫内膜癌HEC-1-A细胞的增殖,测定二者作用下S期激酶相关蛋白(Skp2)、抑癌基因p27蛋白的表达。方法:用CCK-8法测定1,25(OH)2D3、DDp及二者联合处理后细胞增殖情况,用流式细胞仪分析细胞周期,用W estern blot检测Skp2及p27蛋白表达的变化。结果:与对照组相比,1,25(OH)2D3、DDp作用下细胞吸光度(OD)值减少,细胞增殖受到抑制(pp均能增加G0/G1期细胞比例,降低S、G2/M期细胞比例,从而降低细胞增殖指数(pp2表达减少,p27蛋白表达增多。结论:1,25(OH)2D3有增强DDp抗肿瘤的作用,二者均可能通过下调Skp2、上调p27蛋白表达,抑制癌细胞增殖。

关键词： 1,25二羟维生素D3 子宫内膜肿瘤细胞系顺铂 Skp2 蛋白质p27

SIV p27单克隆抗体的制备、性质分析和初步应用

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SIV p27单克隆抗体的制备、性质分析和初步应用

作者：孙敏中国协和医科大学

学位级别：硕士

猴免疫缺陷病毒(Simian Immunodeficiency Virus, SIV)在基因组成、形态、理化特性、分子生物学特性和致病机制等方面与HIV非常相似，因此以SIV或SHIV(SIV与HIV-1构成的一种嵌合病毒)感染动物，建立的灵长类模型成为目前AIDS研究中最常... 详细信息

猴免疫缺陷病毒(Simian Immunodeficiency Virus, SIV)在基因组成、形态、理化特性、分子生物学特性和致病机制等方面与HIV非常相似，因此以SIV或SHIV(SIV与HIV-1构成的一种嵌合病毒)感染动物，建立的灵长类模型成为目前AIDS研究中最常用的动物模型。在模型的建立和使用中，血液SIV抗原检测对于病毒血症、疾病过程、早期诊断、判断预后和抗病毒药物的体外筛选十分重要。在SIV诸多结构蛋白中，衣壳蛋白p27因氨基酸序列保守，且具有群抗原性，被认为是抗原检测的标志物。故本研究选择以纯化的SIV p27蛋白为免疫原制备单克隆抗体，进而依据双抗体夹心ELISA的原理，初步应用鼠抗SIV p27单克隆抗体，探索构建检测SIV p27抗原的试剂体系，以期成为今后艾滋病及其相关研究的有效方法。本研究内容主要包括两大部分。第一部分是SIV p27单克隆抗体的制备和特性分析。我们使用质粒重组的SIV p27蛋白免疫BALB／c小鼠，采用杂交瘤技术和半固体培养基法建立杂交瘤细胞株，经检测筛选，最终保留4株能稳定分泌SIV p27单克隆抗体的杂交瘤细胞。使用秋水仙碱将杂交瘤细胞阻断在细胞分裂中期，染色体核型分析表明4株细胞确为杂交瘤细胞，其分泌的单抗1C3、286为IgG1类，2E12为IgG2b类，3G3为IgG2a类。Western Blot和间接免疫荧光检测表明4株单抗特异性良好，均能识别SIV的p27蛋白，与逆转录病

关键词： SIV 蛋白质p27 杂交瘤单克隆抗体 ELISA

胃癌组织Skp2表达的意义及与p27表达的关系

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实用肿瘤杂志 2006年第1期21卷 24-28页

作者：马秀梅刘江惠郭建文刘颖左连富河北医科大学第四附属医院肿瘤研究所河北石家庄050011

目的探讨人胃癌S期激酶相关蛋白2(S-phase k inase-assoc iated prote in 2,Skp2)表达的意义及与p27表达的关系。方法采用免疫组化方法检测138例原发性胃癌,配对癌旁胃黏膜,102例配对淋巴结转移胃癌组织,30例非典型增生,30例肠上皮化生... 详细信息

目的探讨人胃癌S期激酶相关蛋白2(S-phase k inase-assoc iated prote in 2,Skp2)表达的意义及与p27表达的关系。方法采用免疫组化方法检测138例原发性胃癌,配对癌旁胃黏膜,102例配对淋巴结转移胃癌组织,30例非典型增生,30例肠上皮化生(肠化),10例慢性浅表性胃炎和5例正常胃黏膜Skp2的表达及138例原发性胃癌p27的表达。结果Skp2表达的阳性率(%),肠化(12.68±0.86)及癌旁胃黏膜(19.32±1.22)均明显高于慢性浅表性胃炎(0.53±0.13)及正常胃黏膜(0.47±0.19)(p=0.000),后两者差异无显著性(p=0.716);非典型增生(16.74±0.82)明显高于肠化(p=0.000);原发性胃癌(31.34±2.17)明显高于非典型增生及癌旁胃黏膜(p值均=0.000);淋巴结转移胃癌组织(39.76±2.00)明显高于原发性胃癌(p=0.037)。胃癌Skp2的阳性率与分化程度(rho=0.315,p=0.000)、脉管内瘤栓(rho=0.303,p=0.000)及淋巴结转移(rho=0.254,p=0.000)呈正相关。胃癌Skp2表达与靶蛋白p27表达呈负相关(rho=-0.451,p=0.000)。结论Skp2蛋白过表达与胃癌的发生及转移有关;胃癌Skp2蛋白过表达与p27蛋白降解有关,提示Skp2蛋白过表达在胃癌发生、发展过程中可能起重要作用。

关键词：胃肿瘤 S期激酶相关蛋白2 蛋白质p27 肿瘤转移免疫组织化学

p27蛋白表达对精氨酸加压素介导心脏成纤维细胞增殖的影响

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心脏杂志 2001年第2期13卷 122-124页

作者：陈永清赵连友彭育红范延红周秀荣徐琳第四军医大学唐都医院心内科陕西西安710038

目的 :观察精氨酸加压素 (AVp)作用下 p2 7蛋白表达在心脏成纤维细胞 (CFs)中的变化 ,探讨 p2 7蛋白调控AVp促 CFs增殖的作用。方法 :以培养的新生 SD大鼠 CFs为实验动物模型 ,采用胰酶消化、差速贴壁法培养CFs,四氮唑盐 (MTT)比色法检... 详细信息

目的 :观察精氨酸加压素 (AVp)作用下 p2 7蛋白表达在心脏成纤维细胞 (CFs)中的变化 ,探讨 p2 7蛋白调控AVp促 CFs增殖的作用。方法 :以培养的新生 SD大鼠 CFs为实验动物模型 ,采用胰酶消化、差速贴壁法培养CFs,四氮唑盐 (MTT)比色法检测细胞增殖 ,碘化丙啶标记细胞 DNA ,p2 7蛋白的单抗和标记了 FITC的二抗标记细胞内的 p2 7蛋白 ,采用流式细胞分析仪技术测定细胞周期及 p2 7蛋白表达的阳性率。结果 :1随 AVp浓度的增加 ,MTT法测得的 CFs的 A值呈递增趋势 ,其中 10 - 7,10 - 6 m ol/ L AVp组分别为 0 .30 7± 0 .0 0 9,0 .337± 0 .0 0 7,均明显地高于对照组 (0 .2 98± 0 .0 0 9) ,并有统计学意义 (分别 ppp浓度的增加 ,CFs的 S期细胞百分率和细胞增殖指数 (pI)逐渐增加 ,G0 / G1 期百分率下降 ,10 - 7,10 - 6 mol/ L AVp组与对照组比较差异非常显著 (pp2 7蛋白表达阳性率随 AVp浓度的增加而呈递减趋势 ,其中 10 - 7,10 - 6 m ol/ L AVp组 (分别为 71.6 %± 2 .2 % ,6 3.1%± 2 .3% )明显低于对照组 (86 .5 %± 2 .3% ) ,并有统计学意义 (pp2 7蛋白是 AVp促 CFs增殖过程的重要负性调节因子 ,AVp通过下调 p2 7蛋白发挥促 CFs增殖作用。

关键词：蛋白质p27 精氨酸升压素成纤维细胞心脏增殖高血压

p27蛋白和增殖细胞核抗原在上颌窦鳞癌中的表达

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山东大学基础医学院学报 2005年第3期19卷 145-148页

作者：韩敏张秋贵陈瑛青岛大学医学院附属医院耳鼻喉科山东青岛266003 山东大学齐鲁医院

目的:探讨p2 7蛋白和增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen ,pCNA)在上颌窦鳞癌中的表达及其与上颌窦鳞癌发生发展的关系。方法:应用免疫组化SABC法检测35例上颌窦鳞癌和15例鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤的p2 7蛋白和pCNA表达。结... 详细信息

目的:探讨p2 7蛋白和增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen ,pCNA)在上颌窦鳞癌中的表达及其与上颌窦鳞癌发生发展的关系。方法:应用免疫组化SABC法检测35例上颌窦鳞癌和15例鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤的p2 7蛋白和pCNA表达。结果:p2 7蛋白及pCNA染色阳性细胞均为细胞核着色。其中上颌窦鳞癌的p2 7蛋白阳性率为2 5 .71% ,鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤的阳性率为73.3%。二者差异有高度显著性(p pCNA指数为86 .94±9.83,鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤的pCNA指数为4 6 .14±2 .6 6 ,二者差异有高度显著性(ppCNA指数增加,不同分化间pCNA指数差异有显著性(p p2 7蛋白和pCNA的表达能够快速、准确地反映肿瘤细胞的增殖状态和评价预后,对判定上颌窦鳞癌的恶性程度及指导治疗有一定的意义。

关键词：上颌窦肿瘤肿瘤,鳞状细胞蛋白质p27 增殖细胞核抗原免疫组织化学

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SIV p27单克隆抗体的制备和鉴定

中国比较医学杂志 2006年第1期16卷 29-33,F0003页

作者：孙敏涂新明魏强丛喆蒋虹佟巍陈颂赖春晖于浩秦川中国医学科学院中国协和医科大学实验动物研究所北京100021

目的建立SIVp27杂交瘤细胞株，并对其分泌的SIVp27单克隆抗体进行初步鉴定。方法使用基因重组的SIVp27蛋白免疫BALB/c小鼠，采用杂交瘤技术使用半固体培养基法建立杂交瘤细胞株，制备单克隆抗体。通过染色体核型对杂交瘤细胞株进行鉴定... 详细信息

目的建立SIVp27杂交瘤细胞株，并对其分泌的SIVp27单克隆抗体进行初步鉴定。方法使用基因重组的SIVp27蛋白免疫BALB/c小鼠，采用杂交瘤技术使用半固体培养基法建立杂交瘤细胞株，制备单克隆抗体。通过染色体核型对杂交瘤细胞株进行鉴定；采用Western blot、免疫荧光法、酶联免疫吸附法确定单克隆抗体的交叉反应性、相对亲和力、抗原识别表位、免疫球蛋白的类型和亚类。对单克隆抗体进行鉴定。结果获得4株可稳定分泌SIVp27单克隆抗体的杂交瘤细胞，IC3、286为IgG1类，2E12为IgG2b类，3G3为IgG2a类。4株单抗均能识别SIV的p27蛋白，与逆转录病毒SRV、STLV无交叉反应，286、2E12与H1Vp24有交叉反应。免疫荧光法检测腹水效价为1：10240～1：40960。1C3、286、2E12、3G3染色体平均数分别为103、97、96、101。2E12与3G3识别不同的抗原表位。结论成功地制备出4株SIVp27单克隆抗体，均具有良好的特异性和亲和力，为进一步建立免疫分析方法，进行SIV／SAIDS及其艾滋病相关研究，奠定了基础。

关键词： SIV 蛋白质p27 杂交瘤单克隆抗体

乳腺癌中p27和c-erbB-2的表达及意义

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临床与实验病理学杂志 2004年第6期20卷 718-720页

作者：李刚强王丽霞解放军455医院病理科上海200052

目的　探讨乳腺癌中 p2 7和c erbB 2表达情况和意义。方法　用免疫组化S p法检测 4 0例乳腺癌中 p2 7和c erbB 2的表达。结果　正常乳腺组织c erbB 2表达阴性 ,癌组织中阳性率为 37 5 % (15 / 4 0 ) ,两者差异有显著性 (p <0 0 0 1)。... 详细信息

目的　探讨乳腺癌中 p2 7和c erbB 2表达情况和意义。方法　用免疫组化S p法检测 4 0例乳腺癌中 p2 7和c erbB 2的表达。结果　正常乳腺组织c erbB 2表达阴性 ,癌组织中阳性率为 37 5 % (15 / 4 0 ) ,两者差异有显著性 (p p2 7高表达率为 32 5 % (13/ 4 0 ) ,正常乳腺组织高表达为 80 % ,两者差异有显著性 (p p2 7高表达与癌组织分化、淋巴结转移和复发有关 (p p2 7和c erbB 2表达异常是乳腺癌产生的机制之一 ,与乳腺癌的发生及发展有关。p2

关键词：乳腺肿瘤蛋白质p27 蛋白质c-erbB-2 免疫组织化学