SIV p27单克隆抗体的制备、性质分析和初步应用

作     者：孙敏 

作者单位：中国协和医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：涂新明

授予年度：2006年

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 08[工学] 09[农学] 100102[医学-免疫学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 10[医学] 

主      题：SIV 蛋白质p27 杂交瘤 单克隆抗体 ELISA 

摘      要：猴免疫缺陷病毒(Simian Immunodeficiency Virus, SIV)在基因组成、形态、理化特性、分子生物学特性和致病机制等方面与HIV非常相似，因此以SIV或SHIV(SIV与HIV-1构成的一种嵌合病毒)感染动物，建立的灵长类模型成为目前AIDS研究中最常用的动物模型。在模型的建立和使用中，血液SIV抗原检测对于病毒血症、疾病过程、早期诊断、判断预后和抗病毒药物的体外筛选十分重要。在SIV诸多结构蛋白中，衣壳蛋白p27因氨基酸序列保守，且具有群抗原性，被认为是抗原检测的标志物。故本研究选择以纯化的SIV p27蛋白为免疫原制备单克隆抗体，进而依据双抗体夹心ELISA的原理，初步应用鼠抗SIV p27单克隆抗体，探索构建检测SIV p27抗原的试剂体系，以期成为今后艾滋病及其相关研究的有效方法。 本研究内容主要包括两大部分。第一部分是SIV p27单克隆抗体的制备和特性分析。我们使用质粒重组的SIV p27蛋白免疫BALB／c小鼠，采用杂交瘤技术和半固体培养基法建立杂交瘤细胞株，经检测筛选，最终保留4株能稳定分泌SIV p27单克隆抗体的杂交瘤细胞。使用秋水仙碱将杂交瘤细胞阻断在细胞分裂中期，染色体核型分析表明4株细胞确为杂交瘤细胞，其分泌的单抗1C3、286为IgG1类，2E12为IgG2b类，3G3为IgG2a类。Western Blot和间接免疫荧光检测表明4株单抗特异性良好，均能识别SIV的p27蛋白，与逆转录病