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蛋白激酶C对低氧诱导小鼠肺动脉平滑肌细胞增殖及蛋白表达的影响

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中华结核和呼吸杂志 2022年第5期45卷 460-467页

作者：施熠炜秦小江曾超张新日山西医科大学第一医院呼吸与危重症监护室太原030012 山西医科大学公共卫生学院太原030001 山西医科大学儿科医学系太原030001

目的探讨经典型蛋白激酶C(PKc)对低氧诱导的小鼠远端肺动脉平滑肌细胞(PASMc)增殖及细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)表达的影响。方法利用Dynal MPc-1磁分离器分离含铁粉的远端肺小动脉,原代培养并鉴定肺动... 详细信息

目的探讨经典型蛋白激酶C(PKc)对低氧诱导的小鼠远端肺动脉平滑肌细胞(PASMc)增殖及细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)表达的影响。方法利用Dynal MPc-1磁分离器分离含铁粉的远端肺小动脉,原代培养并鉴定肺动脉平滑肌细胞。应用PKc激动剂(PMA)、PKcα抑制剂(safingol)、PKcβⅠ抑制剂(Go6976)、PKcβⅡ抑制剂(LY333531)分别干预细胞。在常氧和低氧条件下,采用免疫印迹法观察cPKc亚型蛋白表达变化以及ERK1/2、Akt磷酸化水平变化。应用PKcα、PKcβ的慢病毒载体,通过病毒转染技术特异性敲减目标基因活性,采用免疫印迹法观察低氧诱导小鼠PASMc中cPKc亚型蛋白表达变化,以及ERK1/2、Akt磷酸化水平变化。结果采用Brdu法,检测到用safingol、Go6976、LY333531分别抑制cPKcα、βⅠ和βⅡ时,低氧诱导的PASMc增殖能力受到明显抑制,与低氧对照组相比,Brdu阳性细胞率分别为(7.35±0.26)%vs(11.28±0.43)%,(3.76±0.25)%vs(7.98±0.28)%和(4.12±0.46)%vs(7.78±0.53)%;且PMA在常氧条件下可显著促进PASMc的增殖能力,与常氧对照组相比,Brdu阳性细胞率分别为(9.65±0.47)%vs(6.34±0.52)%,(9.34±0.38)%vs(5.42±0.21)%和(7.78±0.53)%vs(4.12±0.46)%;此外经过PKcα、PKcβ的慢病毒载体转染细胞后,也发现低氧转染组的PASMc增殖能力较空载对照组显著下降,Brdu阳性细胞率分别为(3.58±0.54)%vs(5.97±0.63)%。用safingol、Go6976、LY333531分别抑制cPKcα、βⅠ和βⅡ表达后,低氧诱导的PASMc中ERK1/2、Akt的磷酸化水平较对照组显著降低,使用safingol之后,ERK1/2、Akt的磷酸化水平分别为:0.56±0.07 vs 1.08±0.13和0.49±0.04 vs 0.97±0.08,使用Go6976之后,ERK1/2、Akt的磷酸化水平分别为:0.41±0.09 vs 0.79±0.10和0.48±0.09 vs 0.82±0.16,使用LY333531之后,ERK1/2、Akt的磷酸化水平分别为:0.42±0.03 vs 0.87±0.06和0.34±0.07 vs 0.78±0.05;PMA可使常氧条件下PASMc中ERK1/2、Akt的磷酸化水平增高,分别为1.25±0.12 vs 0.41±0.07和0.98±0.06 vs 0.37±0.08;利用病毒转染技术对cPKcα、β的表达进行特异性敲底,发现在低氧条件下,转染细胞后均可使细胞中ERK1/2磷酸化水平显著降低,其磷酸化水平为0.29±0.06 vs 0.76±0.05,而Akt磷酸化水平较对照组无明显变化。结论激动剂及抑制剂干预或病毒转染可使PASMc中cPKcα、βⅠ和βⅡ表达下降,可显著抑制低氧诱导的小鼠远端PASMc异常增殖,其作用机制可能与cPKcα、βⅠ和βⅡ蛋白表达上调有关。低氧可能通过上调cPKcα、βⅠ和βⅡ的蛋白表达,使得ERK1/2磷酸化水平增高,最终引起小鼠远端PASMc的异常增殖,参与低氧性肺动脉高压的形成过程。

关键词：高血压,肺性增殖低氧蛋白激酶C

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蛋白激酶C-θ在免疫中的研究进展

中国免疫学杂志 2022年第15期38卷 1907-1912,1917页

作者：孙明珠赵龙昊徐扬(指导) 辽宁师范大学生命科学学院七鳃鳗研究中心大连116081 大连工业大学海洋食品精深加工关键技术省部共建协同创新中心大连116034

蛋白激酶C(PKc)家族经第二信使钙离子、甘油二酯或磷脂酰丝氨酸激活,通过不同的信号通路来发挥特定效应。近年的研究表明,蛋白激酶C-θ(PKc-θ)的激活与表达不但与免疫有关,而且与某些相关疾病的诱发也有联系。因此,研发与PKc-θ相关的... 详细信息

蛋白激酶C(PKc)家族经第二信使钙离子、甘油二酯或磷脂酰丝氨酸激活,通过不同的信号通路来发挥特定效应。近年的研究表明,蛋白激酶C-θ(PKc-θ)的激活与表达不但与免疫有关,而且与某些相关疾病的诱发也有联系。因此,研发与PKc-θ相关的免疫抑制剂,既可用于器官移植排斥反应又可治疗自身免疫病。本文就PKc-θ在T细胞受体(TcR)信号通路及淋巴细胞中的作用、免疫相关疾病、免疫抑制剂等最新研究进展综述。

关键词：蛋白激酶C PKc-θ T细胞免疫免疫抑制剂

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蚂蟥蛋白激酶C基因的克隆和表达分析

中国中药杂志 2021年第3期46卷 599-604页

作者：陈盼盼郭巧生史红专郭丽媛张会宁南京农业大学中药材研究所江苏南京210095

蛋白激酶C(PKc)是一类广泛参与细胞增殖和发育的蛋白激酶,但在雌雄同体动物蚂蟥性腺中的发育机制尚不清楚。为探究蛋白激酶C在蚂蟥生殖细胞的发育过程中的作用,该研究克隆蚂蟥PKc基因,进行生物信息学分析,采用荧光定量PcR技术进行雌雄... 详细信息

蛋白激酶C(PKc)是一类广泛参与细胞增殖和发育的蛋白激酶,但在雌雄同体动物蚂蟥性腺中的发育机制尚不清楚。为探究蛋白激酶C在蚂蟥生殖细胞的发育过程中的作用,该研究克隆蚂蟥PKc基因,进行生物信息学分析,采用荧光定量PcR技术进行雌雄性腺的表达分析。结果表明:(1)克隆得到的Wp-PKc全长2580 bp,相对分子质量76555.19,包含1个编码670个氨基酸的开放阅读框,Wp-PKc和斑马鱼PKc-α及大鼠的PKc-γ亲缘关系较近,氨基酸序列相似度为55%和58%;(2)Wp-PKc编码的蛋白无信号肽,属于亲水性性蛋白,二级结构主要由无规则卷曲、α-螺旋、延伸链、折叠和组成,以无规则卷曲、α-螺旋占比最多,Wp-PKc蛋白不含有跨膜结构域,多序列比对和结构域预测分析显示,Wp-PKc包含4个经典蛋白激酶C的保守结构域;(3)荧光定量的结果显示Wp-PKc在蚂蟥性腺中的表达与生殖细胞的发育呈正相关,其中雄性腺中的表达显著高于雌性腺。综上,Wp-PKc为经典PKc,Wp-PKc可能对蚂蟥性腺发育尤其雄性腺发育起了促进作用,为蚂蟥性腺发育机制的进一步研究提供参考。

关键词：蚂蟥蛋白激酶C 雌雄性腺克隆表达分析

舌鳞癌细胞Tca8113中蛋白激酶C和丝裂原活化蛋白激酶激酶/细胞外调节蛋白激酶通路对诱导型一氧化氮合酶表达的影响

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华西口腔医学杂志 2018年第2期36卷 133-139页

作者：高雪峰焦海斌叶昌成刘英群哈尔滨医科大学附属口腔医院哈尔滨150001

目的在舌鳞癌细胞Tca8113中,探索与细胞增殖密切相关的诱导型一氧化氮合酶(NOS-2)的表达调控机制。方法采用RNAi技术沉默Tca8113细胞中NOS-2、蛋白激酶C(PKc)-α、PKc-β和PKc-δ的基因;GriessReagent法检测NOS-2基因沉默后一氧化氮(NO... 详细信息

目的在舌鳞癌细胞Tca8113中,探索与细胞增殖密切相关的诱导型一氧化氮合酶(NOS-2)的表达调控机制。方法采用RNAi技术沉默Tca8113细胞中NOS-2、蛋白激酶C(PKc)-α、PKc-β和PKc-δ的基因;GriessReagent法检测NOS-2基因沉默后一氧化氮(NO)生成量;ccK8法测定细胞增殖活性;实时定量荧光聚合酶链反应(qPcR)技术检测各种方法处理后NOS-2、PKc-α、PKc-β和PKc-δ的基因表达;Westernblotting技术测定丙二醇甲醚醋酸酯(PMA)作用细胞后的细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2磷酸化程度。结果利用NOS-2的siRNA处理后,Tca8113细胞的增殖能力明显降低(Pc的活性与NOS-2的基因表达成负相关(Pc亚型PKc-α、PKc-β和PKc-δ共同参与NOS-2的基因调控(P蛋白激酶激酶(MEK)/ERK通路负调控NOS-2的基因表达(Pc通过MEK/ERK通路负调控NOS-2的基因表达(Pca8113细胞中,PKc通过MEK/ERK通路负调控与细胞增殖相关的NOS-2的基因表达。

关键词：诱导型一氧化氮合酶蛋白激酶C 丝裂原活化蛋白激酶激酶/细胞外调节蛋白激酶通路细胞增殖

荷梗水提物对慢性应激所致抑郁小鼠学习记忆及蛋白激酶C表达的影响

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中国新药杂志 2021年第7期30卷 633-638页

作者：曹亚飞张延红芦晔秦少坤平鑫裴林河北中医学院石家庄050031 河北省中医药科学院石家庄050031 河北大学中医学院保定071051

目的:观察荷梗水提物对慢性应激所致抑郁症模型小鼠学习记忆及蛋白激酶C(PKc)表达的影响。方法:将48只小鼠随机分为正常组、模型组、氟西汀组(10 mg·kg^(-1))、荷梗低、中、高剂量组(100,200和400 mg·kg^(-1))。连续21 d ig给药,复制... 详细信息

目的:观察荷梗水提物对慢性应激所致抑郁症模型小鼠学习记忆及蛋白激酶C(PKc)表达的影响。方法:将48只小鼠随机分为正常组、模型组、氟西汀组(10 mg·kg^(-1))、荷梗低、中、高剂量组(100,200和400 mg·kg^(-1))。连续21 d ig给药,复制慢性不可预见性温和应激(cUMS)抑郁模型,通过糖水偏爱实验、水迷宫实验和八臂迷宫实验观测小鼠的抑郁样行为,免疫组化法和免疫印迹法检测小鼠海马内PKc的表达水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠糖水偏爱分数低,寻找平台潜伏期长,所占目标象限百分比低,工作记忆和参考记忆错误次数多,PKc蛋白表达水平低;与模型组比较,荷梗高剂量组和氟西汀组小鼠糖水偏爱分数高,寻找平台潜伏期短,所占目标象限百分比高,工作记忆和参考记忆错误次数少,PKc蛋白表达水平高。结论:荷梗水提物可能通过提高海马内PKc蛋白表达水平来抵抗或减轻cUMS所致抑郁小鼠的行为变化和学习记忆能力减退。

关键词：荷梗水提物抑郁症蛋白激酶C 糖水偏好水迷宫八臂迷宫

槲皮素舒张大鼠离体肾动脉及其与L-型电压依赖性钙通道和蛋白激酶C的关系

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生理学报 2017年第6期69卷 775-780页

作者：侯晓敏张明升秦小江山西医科大学基础医学院太原030001 山西医科大学公共卫生学院太原030001

为了观察槲皮素对大鼠离体肾动脉的舒张作用,并探讨该作用与蛋白激酶C(protein kinase c,PKc)的关系,本研究采用血管张力测定仪记录大鼠肾动脉肌张力变化,用膜片钳全细胞记录方式记录大鼠肾动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle c... 详细信息

为了观察槲皮素对大鼠离体肾动脉的舒张作用,并探讨该作用与蛋白激酶C(protein kinase c,PKc)的关系,本研究采用血管张力测定仪记录大鼠肾动脉肌张力变化,用膜片钳全细胞记录方式记录大鼠肾动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMc)L-型电压依赖性钙通道(L-type voltage-gated ca^(2+) channels,LVGc)电流。实验结果显示,槲皮素能够舒张60 mmol/L Kcl或1×10^(-5) mol/L苯肾上腺素(phenylephrine,PE)预收缩的大鼠肾动脉,其最大舒张百分比分别为(84.53±7.35)%和(76.42±4.63)%;血管内皮完整组和去内皮组肾动脉相比,槲皮素对预收缩肾动脉的最大舒张百分比没有显著性差异;预孵育PKc特异性抑制剂c6303可使槲皮素对肾动脉的最大舒张幅度降低,与未孵育c6303组相比具有统计学差异(Pc的正常LVGc尖峰电流密度为(23.17±1.33)pA/pF,10μmol/L槲皮素可以降低其电流密度到(10.46±1.35)pA/pF,其抑制百分比为54.86%,1μmol/L c6303可部分逆转槲皮素对LVGc电流的降低幅度,其抑制百分比为62.08%(Pc和激活PKc有关。

关键词：槲皮素肾动脉舒张 L-型电压依赖性钙通道蛋白激酶C

蛋白激酶Cε对大鼠背根神经节持续受压后背角星型胶质细胞激活和机械痛敏的影响

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中国康复医学杂志 2019年第11期34卷 1278-1284页

作者：张杨杜占慧魏慧高文双岳寿伟山东大学齐鲁医院康复科济南250012 青岛市妇女儿童医院心脏中心

目的:探讨大鼠背根神经节持续受压(chronic compression of the dorsal root ganglion,ccD)后,脊髓背角星型胶质细胞的激活情况,以及PKcε是否可以通过调节星型胶质细胞的活性而参与ccD后神经病理性疼痛。方法:将大鼠随机分为6组,每组大... 详细信息

目的:探讨大鼠背根神经节持续受压(chronic compression of the dorsal root ganglion,ccD)后,脊髓背角星型胶质细胞的激活情况,以及PKcε是否可以通过调节星型胶质细胞的活性而参与ccD后神经病理性疼痛。方法:将大鼠随机分为6组,每组大鼠8只:假手术组、ccD7天组、ccD14天组、ccD7天+BIM I组、ccD+DMSO组、ccD+PDBu组,分别通过鞘内注射不同药物,或对正常大鼠鞘注DMSO/PDBu后,测量大鼠机械刺激缩爪阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT)的变化,利用Western Blot技术检测脊髓背角PKcε和GFAP蛋白表达的变化,利用免疫荧光技术检测脊髓背角星型胶质细胞激活情况。结果:ccD术后第4天,鞘内注射PKcε的激动剂PDBu 1—4h,明显降低ccD大鼠PWMT(PccD大鼠PWMT(PccD术后第4天起,连续3天鞘注BIM I,可明显缓解大鼠的机械痛敏(4天,P0.05)。与假手术组比较,ccD后7天和14天,手术侧背角PKcε和GFAP表达升高,差异有显著性意义(Pcε和GFAP表达(P蛋白质表达量增加(Pcε和GFAP蛋白表达上调,星型胶质细胞激活增加。PKcε可能通过调节星型胶质细胞激活参与ccD后病理性神经痛的中枢敏化机制。

关键词：脊髓背角蛋白激酶C 星型胶质细胞背根神经节持续受压

白藜芦醇上调阿尔茨海默病模型大鼠海马组织N-甲基-D-天冬氨酸受体1及蛋白激酶C基因和蛋白的表达

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卫生研究 2019年第2期48卷 269-272,278页

作者：张玉森董瑞瑞杨倩张禄平李静赵海峰山西医科大学公共卫生学院营养与食品卫生学教研室太原030001

目的探讨白藜芦醇对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)模型大鼠海马组织N-甲基-D-天冬氨酸受体1(N-methyl-D-aspartate receptor, NMDAR1)及蛋白激酶C(protein kinase c, PKc)基因和蛋白表达的影响。方法将60只Wistar雌性大鼠随机分为6组,分别为:假手术对照组,AD模型对照组,白藜芦醇低、中、高剂量(20、40和80 mg/kg)干预组,0.8 mg/kg戊酸雌二醇阳性对照组。采用去卵巢合并腹腔注射100 mg/kg D-半乳糖制备AD大鼠模型,同时白藜芦醇灌胃干预12周。干预后用实时荧光定量PcR检测大鼠海马组织NMDAR1和PKc基因的表达,用Western Blot检测NMDAR1总蛋白、磷酸化蛋白和PKc蛋白的表达。结果与假手术组相比,模型组NMDAR1及PKc基因和蛋白的表达明显下调(Pc基因的表达显著上调(Pc蛋白表达明显上调(Pc基因的表达并且促进NMDAR1蛋白磷酸化和PKc蛋白的表达,可能是其改善AD模型大鼠记忆的机制之一。

关键词：阿尔茨海默病白藜芦醇 N-甲基-D-天冬氨酸受体1 蛋白激酶C

电针预处理对急性心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌组织水通道蛋白1表达及蛋白激酶C活性的影响

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中国针灸 2017年第2期37卷 157-161页

作者：蔡荣林胡玲申国明余情王洁吴子建李梦安徽中医药大学针灸经络研究所合肥230038

目的:探讨电针"内关"与"太渊"穴预处理对急性心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌的保护效应差异及部分作用机制。方法:96只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、内关组、太渊组,每组24只。内关组与太渊组大鼠分别选取"内关"与"太渊"穴进行电... 详细信息

目的:探讨电针"内关"与"太渊"穴预处理对急性心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌的保护效应差异及部分作用机制。方法:96只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、内关组、太渊组,每组24只。内关组与太渊组大鼠分别选取"内关"与"太渊"穴进行电针预处理,刺激电流1mA,频率2Hz,每次20min,每日1次,共干预7d。假手术组、模型组固定相同时间,不予电针干预。模型组、内关组、太渊组大鼠在末次电针24h后进行心肌缺血再灌注模型复制,假手术组在开胸后仅在相应部位用针空穿1次,不进行结扎。分别检测各组大鼠心肌缺血面积、梗死面积,心肌组织蛋白激酶C(protein kinase c,PKc)活性及水通道蛋白1(aquaporin 1,AQP1)表达情况。结果:模型组大鼠的心肌缺血面积、梗死面积、AQP1蛋白表达及PKc的活性显著升高,与假手术组比较差异均有统计学意义(均Pc的活性和AQP1蛋白表达较模型组和太渊组均显著减少(P蛋白表达和PKc活性的变化呈显著正相关。结论:电针"内关"穴预处理可显著降低急性心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌组织AQP1蛋白表达和PKc活性,其作用机制可能是通过抑制PKc活化进而抑制AQP1蛋白表达,从而发挥其心肌保护效应。

关键词：急性心肌缺血再灌注损伤电针预处理水通道蛋白1 蛋白激酶C