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采用水平双相凝胶电泳法对福赛斯拟杆菌蛋白分离的初步研究

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华西口腔医学杂志 2004年第3期22卷 177-179页

作者：黄定明周学东久保庭雅惠天野敦雄口腔生物医学工程教育部重点实验室四川大学四川成都610041 日本大阪大学齿学部

目的　为分离福赛斯拟杆菌蛋白 ,建立一种快速、方便、高效、可靠的方法。方法　福赛斯拟杆菌厌氧培养的菌细胞经超声破碎后 ,菌蛋白加入固相pH梯度 (IPG)膨润液中或经ReadyPrep试剂处理后 ,在不使用加样杯、加样杯分别位于IPG的阳极端... 详细信息

目的　为分离福赛斯拟杆菌蛋白 ,建立一种快速、方便、高效、可靠的方法。方法　福赛斯拟杆菌厌氧培养的菌细胞经超声破碎后 ,菌蛋白加入固相pH梯度 (IPG)膨润液中或经ReadyPrep试剂处理后 ,在不使用加样杯、加样杯分别位于IPG的阳极端、中间、阴极端 ,采用pH 3～ 10的IPG聚丙烯酰胺凝胶条作等电聚焦电泳 ,梯度为 8%～ 18%聚丙烯酰胺板状梯度凝胶进行第二相电泳 ,经考马斯亮兰染色或蛋白银染观察其蛋白斑点。结果　①等电聚焦电泳时 ,未使用加样杯福赛斯拟杆菌蛋白加入膨润液中双相电泳后两种染色都未见蛋白斑点 ,用加样杯加入福赛斯拟杆菌蛋白经水平双相电泳后考马斯亮兰染色无斑点出现而银染出现蛋白斑点 ,且加样杯位于IPG中间位置时蛋白等电聚焦的效果最佳。②福赛斯拟杆菌蛋白电泳图谱显示水平双相凝胶电泳能将不同蛋白分离 ,且绝大多数蛋白位于IPG的酸性端 ,即蛋白的等电点 (PI)在 3～ 7之间。结论　采用水平双相凝胶电泳方法可以将福赛斯拟杆菌不同种类的蛋白分离。

关键词：水平双相凝胶电泳福赛斯拟杆菌蛋白分离

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鸢乌贼和杜氏枪乌贼蛋白分离及其性质初探

食品与发酵工业 2016年第9期42卷 81-86页

作者：邱月曾少葵章超桦郝记明张静广东海洋大学食品科技学院广东省水产品加工与安全重点实验室广东普通高等学校水产品深加工重点实验室南海生物资源开发与利用协同创新中心

以鸢乌贼(Symp lectoteuthis oualaniensis)和杜氏枪乌贼(Loligo duvauceli)头足、胴体为原料,分离各蛋白组分,并对其性质进行研究。结果表明:鸢乌贼头足水溶性蛋白(WSP)、盐溶性蛋白(SSP)和不溶性蛋白(ISP)分别占总蛋白的19.01%、52.21... 详细信息

以鸢乌贼(Symp lectoteuthis oualaniensis)和杜氏枪乌贼(Loligo duvauceli)头足、胴体为原料,分离各蛋白组分,并对其性质进行研究。结果表明:鸢乌贼头足水溶性蛋白(WSP)、盐溶性蛋白(SSP)和不溶性蛋白(ISP)分别占总蛋白的19.01%、52.21%和13.23%,胴体中的分别为10.83%、58.68%和10.03%;杜氏枪乌贼头足三者的比例分别为37.62%、31.79%和18.08%,胴体中的分别为24.30%、54.23%和7.65%。2种乌贼头足、胴体均是WSP和SSP必需氨基酸占氨基酸总量的40%左右。SDS-PAGE电泳分析显示,鸢乌贼头足和胴体中SSP的肌球蛋白重链(MHC)的分子质量大于200 k Da、副肌球蛋白(PM)的在100 k Da左右、肌动蛋白(Actin)接近44k Da;杜氏枪乌贼头足和胴体中SSP的MHC、PM、Actin蛋白条带颜色较浅,说明其蛋白含量较低。差示扫描量热法(DSC)结果表明,鸢乌贼头足WSP、SSP和ISP的变性温度分别为64.02℃、58.04℃和68.91℃;胴体中的分别为81.93℃、62.18℃和68.54℃;杜氏枪乌贼头足各蛋白组分的变性温度分别为81.36、83.24和78.18℃;胴体的分别为80.29、76.25和68.02℃,杜氏枪乌贼各蛋白组分的变性温度较鸢乌贼的高。鸢乌贼头足、胴体和杜氏枪乌贼头足WSP在p H 3溶解度最低,杜氏枪乌贼胴体的在p H 5最低,p H对SSP溶解度影响较大;在不同离子强度的溶液中,鸢乌贼头足SSP溶解性最好。

关键词：鸢乌贼杜氏枪乌贼蛋白分离 SDS-PAGE DSC 溶解度

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波纹巴非蛤蛋白分离及其性质研究

食品与发酵工业 2013年第5期39卷 229-233页

作者：何小庆曹文红赵子科章超桦广东省水产品加工与安全重点实验室广东普通高等学校水产品深加工重点实验室国家贝类加工技术研发分中心(湛江)广东海洋大学食品科技学院广东湛江524088

为了充分利用波纹巴非蛤蛋白质资源,对波纹巴非蛤蛋白质组成进行了分离,得到肌浆蛋白、肌原纤维蛋白、基质蛋白3种蛋白组分,并对其分子量分布和功能特性进行检测和分析。研究结果表明:肌浆蛋白组分占原料粗蛋白的31.2%,肌原纤维蛋白组分... 详细信息

为了充分利用波纹巴非蛤蛋白质资源,对波纹巴非蛤蛋白质组成进行了分离,得到肌浆蛋白、肌原纤维蛋白、基质蛋白3种蛋白组分,并对其分子量分布和功能特性进行检测和分析。研究结果表明:肌浆蛋白组分占原料粗蛋白的31.2%,肌原纤维蛋白组分占45.42%,基质蛋白占20.69%,非蛋白氮占1.67%。SDS-PAGE电泳分析显示:肌浆蛋白组分亚基分子质量分布比较广泛,在200～29.0 kDa;肌原纤维蛋白组分分子质量大多介于66.4～200 kDa和29.0～38.0 kDa之间;基质蛋白组分在190 kDa、97 kDa、44 kDa、29 kDa附近有明显的条带。相同浓度下,温度升高肌浆蛋白和肌原纤维蛋白溶液浊度都上升,溶解度下降,变化趋势相似;pH对肌浆蛋白的浊度和溶解度影响不显著,在pH3.5～9.5,其溶解度均在71%以上,但肌原纤维蛋白浊度和溶解度受pH影响较大,当pH为4.5时,肌原纤维蛋白的溶解度降到最低,浊度达到最大;离子强度下降,肌原纤维蛋白溶液的浊度上升,溶解度下降。

关键词：波纹巴非蛤蛋白分离 SDS-PAGE 溶解度浊度

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牡蛎蛋白分离及其基本组成分析

食品与发酵工业 2013年第9期39卷 195-199页

作者：张晶晶郑惠娜章超桦郝记明张静张吉远广东省水产品加工与安全重点实验室广东普通高等学校水产品深加工重点实验室国家贝类加工技术研发分中心(湛江)广东海洋大学食品科技学院广东湛江52408

根据蛋白的溶解特性对牡蛎蛋白进行分离，分析各蛋白组分的一般成分、氨基酸组成，进一步采用SDS—PAGE测定其分子质量分布。实验结果表明，牡蛎各分离蛋白组分占总蛋白含量分别为：非蛋白氮0．83％，水溶性蛋白37．79％，盐溶性蛋白31... 详细信息

根据蛋白的溶解特性对牡蛎蛋白进行分离，分析各蛋白组分的一般成分、氨基酸组成，进一步采用SDS—PAGE测定其分子质量分布。实验结果表明，牡蛎各分离蛋白组分占总蛋白含量分别为：非蛋白氮0．83％，水溶性蛋白37．79％，盐溶性蛋白31．10％，不溶性蛋白26．44％；牡蛎各蛋白氨基酸种类齐全，必需氨基酸比例适宜，必需氨基酸和呈味氨基酸含量高。SDS—PAGE电泳显示，未经巯基乙醇处理样品蛋白条带少于经巯基乙醇处理样品。经过β-巯基乙醇处理的样品电泳图中，水溶性蛋白的分布范围较广，在200—14kDa之间；盐溶性蛋白的分子质量集中在200～10kDa，在200kDa和45kDa附近处有明显的条带，在97kDa附近出现明显的副肌球蛋白条带；不溶性蛋白的分子质量分布在200～29kDa。未经β-巯基乙醇处理的样品电泳图，水溶性蛋白在116kDa处有一条带，盐溶性蛋白在200kDa和116kDa处和不溶性蛋白36kDa、29kDa处存在蛋白条带。研究结果为进一步开发利用牡蛎蛋白资源提供理论基础数据。

关键词：牡蛎蛋白分离氨基酸组成分子质量分布

聚(乙烯基酯树脂-甲基丙烯酸甲酯)整体柱的ATRP法制备及其在蛋白分离中的应用

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科学通报 2012年第31期57卷 2942-2947页

作者：白立改杨更亮雷环王洋闫翠红河北省药物质量研究重点实验室保定071002 河北大学药学院保定071002

以乙烯基酯树脂-甲基丙烯酸甲酯为二元单体,通过活性可控自由基聚合方式(原子转移自由基聚合,ATRP)制备了聚(乙烯基酯树脂-甲基丙烯酸甲酯)整体柱.红外光谱测得聚合物表面功能基团,扫描电子显微镜观察了聚合物的内部形态,压汞法考察了... 详细信息

以乙烯基酯树脂-甲基丙烯酸甲酯为二元单体,通过活性可控自由基聚合方式(原子转移自由基聚合,ATRP)制备了聚(乙烯基酯树脂-甲基丙烯酸甲酯)整体柱.红外光谱测得聚合物表面功能基团,扫描电子显微镜观察了聚合物的内部形态,压汞法考察了聚合物的孔径分布等参数.将该整体柱用作高效液相色谱的固定相,不仅对人血浆中的免疫球蛋白进行了成功分离,并对α-淀粉酶、溶菌酶、蜗牛酶和木瓜酶的混合物进行了成功分离.结果表明,通过活性可控自由基聚合制备得到的整体柱具有结构均匀、通透性好、易于实现聚合物功能化等优点,是一种简单、方便、高效、廉价的聚合物整体柱的制备方法.

关键词：聚合物整体柱原子转移自由基聚合(ATRP) 高效液相色谱(HPLC) 蛋白分离

新型固定化pH梯度毛细管等电聚焦方法用于蛋白分离

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分析试验室 2007年第6期26卷 25-28页

作者：谢瑶尹开吉罗爱芹屈锋邓玉林北京理工大学生命科学与技术学院北京100081

通过化学键合建立一种固定化pH梯度的方法,用于毛细管等电聚焦分离蛋白质。采用微流控泵驱动毛细管内的聚焦区带,通过调节泵的流量,从而调节聚焦区带的迁移速度。该方法避免了自由溶液聚焦时两性电解质所带来的影响,实现了高灵敏度及检... 详细信息

通过化学键合建立一种固定化pH梯度的方法,用于毛细管等电聚焦分离蛋白质。采用微流控泵驱动毛细管内的聚焦区带,通过调节泵的流量,从而调节聚焦区带的迁移速度。该方法避免了自由溶液聚焦时两性电解质所带来的影响,实现了高灵敏度及检测波长自由选择等优点,适用于两步法毛细管电泳等电聚焦分离蛋白质等两性电解质。本文考察了对牛血清白蛋白和血红蛋白两种蛋白质混合物的分离,证明了该方法可行。

关键词：毛细管等电聚焦固定化pH梯度蛋白分离化学键合

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茶树叶糖蛋白分离及鉴定的初步研究

植物研究 2005年第2期25卷 181-185页

作者：程玉祥柳参奎东北林业大学盐碱地生物资源环境研究中心哈尔滨150040

茶叶是一种有益健康的保健食品,保健功能在于它有多种化学活性成分.近年来研究表明,茶叶糖蛋白可能是茶叶的保健因子之一.从茶树叶中提取了总蛋白、45%～70%硫酸铵分级总蛋白、分级蛋白Sephadex G-100凝胶层析分离出粗糖蛋白,根据糖蛋... 详细信息

茶叶是一种有益健康的保健食品,保健功能在于它有多种化学活性成分.近年来研究表明,茶叶糖蛋白可能是茶叶的保健因子之一.从茶树叶中提取了总蛋白、45%～70%硫酸铵分级总蛋白、分级蛋白Sephadex G-100凝胶层析分离出粗糖蛋白,根据糖蛋白糖链及蛋白的对照染色鉴定出多种茶树叶糖蛋白,并从SDS-胶上快速纯化了三种茶叶糖蛋白.ConA-Sepharose 4B亲和层析从茶树叶总蛋白中分离出16种天然活性糖蛋白.

关键词：茶树叶蛋白分离 Sephadex 糖蛋白总蛋白保健食品活性成分保健功能保健因子层析分离染色鉴定快速纯化天然活性亲和层析茶叶硫酸铵

棉花黄萎病拮抗细菌筛选与B-101菌株抗菌蛋白分离

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植物病理学报 2008年第4期38卷 445-448页

作者：李术娜马平胡明袁洪水王世英朱宝成河北农业大学生命科学学院保定071001 河北省农林科学院植物保护研究所保定071000

The antifungal proteins of antagonistic strains NCD-2,B-101,DHT-13,BDT-25,JJ-134,JJ-102 and 80b-2 isolated from the soil infected with Verticillium dahliae were obtained from their fermentation filtrates through precipitation with 75% ammonium sulfate salting *** activities of the proteins were determined via cylinder-plate *** indicated that antifungal proteins from 80b-2,NCD-2,DHT-13 and B-101 had higher specific activity,of which B-101 and NCD-2 could produce clear inhibition *** protein of B-101 strain was obtained by using the salt *** was found that protein precipitated with 20%-30% saturation ammonium sulfate could produce transparent and bigger inhibition zone,thus it had obvious antifungal *** the antifungal protein was separated by DEAE-cellulose *** antifungal protein fraction named RFP-6 was obtained,which showed definite inhibition activity against Verticillium *** molecular weight was approximately 14.4 kD as determined with SDS-PAGE.

关键词：棉花黄萎病蛋白分离细菌筛选化学防治方法抗菌菌株拮抗抗性基因

芯片自由流电泳等电聚焦蛋白分离及pH梯度固定方法研究

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芯片自由流电泳等电聚焦蛋白分离及pH梯度固定方法研究

作者：李颖东北大学

学位级别：硕士

蛋白质组学已成为生命科学研究的前沿。复杂蛋白质组样品的分析是蛋白质组学研究的重要内容,特别需要高通量、高灵敏度、快速和集成度高的分离鉴定技术。自由流电泳具有连续和并行分离的特点,其微型化特别适合少量蛋白样品的高效快速预... 详细信息

蛋白质组学已成为生命科学研究的前沿。复杂蛋白质组样品的分析是蛋白质组学研究的重要内容,特别需要高通量、高灵敏度、快速和集成度高的分离鉴定技术。自由流电泳具有连续和并行分离的特点,其微型化特别适合少量蛋白样品的高效快速预处理。如何利用微流控技术实现自由流电泳的微型化并提高其性能日益受到关注。本文特别针对蛋白的芯片自由流电泳等电聚焦方法进行了研究。第一章对自由流电泳(FFE)及其应用进行了综述,重点介绍了FFE芯片结构及自由流等电聚焦(FFIEF),对近年来FFE芯片结构的改进及存在的问题进行了分析,提出了可能的改进方法;介绍了固定pH梯度等电聚焦技术,针对在自由溶液中进行等电聚焦时因两性电解质的使用而带来的一系列问题,提出了在FFE芯片中建立固定pH梯度的设想。第二章在原有工作的基础上对自由流电泳芯片的制备方法进行了改进,利用光定位聚合的方法在芯片的分离腔与电极池之间原位聚合了聚丙烯酰胺凝胶;利用PMMA易于加工的特性,将进样管、收集池、开口式电极池集成到PMMA盖片上,再与玻璃底片直接粘接,制作成了复合芯片。以荧光染料及酸碱指示剂为探针,对上述芯片在等速电泳(ITP)和等电聚焦(IEF)模式下的应用进行了研究,并用荧光成像法及指示剂变色法对IEF模式下建立的pH梯度进行了表征。第三章在IEF模式下采用动态涂覆及添加筛分介质的方法,有效的抑制了芯片内壁对蛋白的吸附,成功的实现了大豆胰蛋白酶抑制剂(pI4.6)及鸡蛋清溶菌酶(pI11)这两种蛋白的分离与聚焦,并且采用毛细管区带电泳对芯片自由流等电聚焦分离的结果进行了表征。第四章利用在芯片FFE分离通道中原位聚合具有通透性的整体材料、再利用两性电解质等电聚焦并将其化学键合在整体材料中的方法探讨了在FFE芯片中建立固定pH梯度的方法,初步结果表明该方法具有可行性。

关键词：微流控芯片自由流电泳等电聚焦蛋白分离固定pH梯度