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虎眼万年青硒多糖的制备及结构特征研究

虎眼万年青硒多糖的制备及结构特征研究

作者：张逸乔哈尔滨商业大学

学位级别：硕士

虎眼万年青（Ornithogalum Ait）是百合科虎眼万年青属多年生草本植物,具有清热解毒、消坚散结的功效,可治疗无名肿毒、肝炎、肝硬化、肝癌等。以虎眼万年青为君药的复方万年青胶囊对于肺癌、胃癌、肝癌等有良好的治疗作用。据文献报道... 详细信息

虎眼万年青（Ornithogalum Ait）是百合科虎眼万年青属多年生草本植物,具有清热解毒、消坚散结的功效,可治疗无名肿毒、肝炎、肝硬化、肝癌等。以虎眼万年青为君药的复方万年青胶囊对于肺癌、胃癌、肝癌等有良好的治疗作用。据文献报道,虎眼万年青多糖（OCAP）具有优良的抗肿瘤活性,并且在虎眼万年青中含量较高,但目前对虎眼万年青的研究中,所选用的药物多是虎眼万年青的简单提取物,并且研究方向主要集中在OCAP的提取工艺优化研究、OCAP对荷瘤小鼠的免疫系统的影响以及对体内、体外肿瘤细胞增殖的抑制作用,很少涉及到OCAP的结构修饰和结构特征研究。研究表明,硒多糖具有硒与多糖二者的活性,总体生物活性要高于二者单独使用,作为一种新兴的抗肿瘤药物逐渐成为了研究的热点。因此本文将虎眼万年青多糖与无机硒亚硒酸钠结合成为硒多糖,优化其富硒工艺,观察硒化后虎眼万年青硒多糖的理化性质及初高级结构结构特征,研究其对H22荷瘤小鼠体内抗氧化活性的影响。首先,本文对虎眼万年青硒多糖进行制备并对硒化工艺进行优化。以虎眼万年青乙醇提取后的药渣为原料,采用水提醇沉法提取虎眼万年青粗多糖,木瓜蛋白酶-Sevag联用法除去蛋白质,双氧水法除去色素,分步醇沉法及DEAE-52柱层析法对虎眼万年青多糖进行纯化,得到最优组分的虎眼万年青多糖（OCAPIIA）。将OCAPIIA以硒含量为指标,采用响应面法对OCAP的最优硒化工艺进行研究。最优硒化工艺条件为反应时间8.09h,反应温度71℃,Na2SeO3与OCAPIIA质量比0.97g/g。此工艺条件下得到的虎眼万年青硒多糖的硒含量为3.137mg/g。其次,考察了虎眼万年青硒多糖的理化性质和部分结构特征。利用苯酚硫酸法、气相色谱分析、扫描电镜对Se-OCAPIIA的理化性质和结构特征进行研究。结果表明,Se-OCAPIIA为固态白色絮状粉末,无味,易溶于温水、热水、盐水,溶于酸、碱溶液,不溶于甲醇、乙醇、正丁醇、丙酮、石油醚、甲苯等有机溶剂。苯酚-硫酸反应呈现深棕红色,证明Se-OCAPIIA中含打多糖。硒化后的Se-OCAPIIA形貌与OCAPIIA相比发生了变化,OCAPIIA为带状、片状、条状等,Se-OCAPIIA形貌主要为球状、絮状。Se-OCAPIIA的单糖组成及摩尔比为D-葡萄糖:D-甘露糖:D-半乳糖=17:4:10。最后,考察了 Se-OCAPII对H22荷瘤小鼠抗氧化活性的影响。结果表明,Se-OCAPII能够显著升高H22荷瘤小鼠肝脏过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）的活性,显著增强H22荷瘤小鼠血液中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的活性,显著降低H22荷瘤小鼠肝脏丙二醛（MDA）的含量,通过增强机体分解氧自由基等过氧化物的能力,提高H22荷瘤小鼠的体内抗氧化能力。相同剂量下,Se-OCAPII对H22荷瘤小鼠肝脏中CAT、SOD及血清中GSH-Px的活性提升作用优于OCAPII,对肝脏中MDA含最的降低作用亦优于OCAPII,但成异均无统计学意义。同时,考察了Se-OCAPII对H22荷瘤小鼠肿瘤抑制率及其对H22荷瘤小鼠免疫脏器指数的影响。结果表明,腹腔注射50、100、200mg/（kg·d）的Se-OCAPIIA对H22荷瘤小鼠的抑瘤率分别为32.36%、57.77%和66.24%,各组瘤重与对照组比较均显著降低（P＜0.01）。相同剂量下,Se-OCAPII对肿瘤的抑制作用优于OCAPII,但差异无统计学意义。Se-OCAPII对H22荷瘤小鼠脾指数、胸腺指数有一定升高作用。100-200 mg/（kg·d）剂量下,Se-OCAPII组荷瘤小鼠脾指数显著高于对照组（PO.01）;200 mg/（kg·d）剂量下,Se-OCAPII组荷瘤小鼠的胸腺指数显著高于对照组;同等剂量下,Se-OCAPII对H22小鼠的胸腺指数和脾指数的升高作用均优于较OCAPII,但差异无统计学意义。综上,本文确定了虎眼万年青多糖的最佳硒化工艺为反应时间8.09h,反应温度71°C,Na2Se03与OCAPIIA质量比0.97g/g,硒含量为3.137mg/g,单糖组成为D-甘露糖:D-葡萄糖:D-半乳糖=17:10:4,形貌主要为球状、絮状。虎眼万年青硒多糖对H22荷瘤小鼠具有较好的抗氧化和抗肿瘤活性,较未硒化多糖有所提升。本研究为为虎眼万年青多糖的进一步开发利用奠定了理论基础。

关键词：虎眼万年青多糖硒化修饰结构特征抗氧化

虎眼万年青中蔗糖合酶基因的克隆、表达及功能鉴定

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虎眼万年青中蔗糖合酶基因的克隆、表达及功能鉴定

作者：李丽娜北京协和医学院

学位级别：硕士

大量研究表明,药物的糖基化修饰在提高药物活性、提高生物利用度、降低毒副作用等方面发挥着至关重要的作用,而用于药物糖基化修饰的核苷酸单糖供体（包括UDP-葡萄糖,UDP-葡萄糖醛酸,UDP-木糖、UDP-阿拉伯糖、UDP-芹菜糖、UDP-半乳糖醛... 详细信息

大量研究表明,药物的糖基化修饰在提高药物活性、提高生物利用度、降低毒副作用等方面发挥着至关重要的作用,而用于药物糖基化修饰的核苷酸单糖供体（包括UDP-葡萄糖,UDP-葡萄糖醛酸,UDP-木糖、UDP-阿拉伯糖、UDP-芹菜糖、UDP-半乳糖醛酸）则存在含量稀少、提取繁琐和合成困难等问题,这种不易得性限制了药物糖基化的进一步研究,不利于创新药物的研制和社会可持续发展的需要。但是,合成生物学技术的出现为该问题的解决提供了新的思路和方法。依据解析生物合成途径,得到相关关键酶的信息,对相关的关键酶基因进行研究和组装,就可实现上述核苷单糖的规模化制备。我们在对上述核苷单糖的生物合成途径进行解析时发现,UDP-葡萄糖、UDP-葡萄糖醛酸是合成上述所有核苷单糖的前体。因此,进一步解析UDP-葡萄糖,UDP-葡萄糖醛酸的生物合成途径,并对合成途径中的相关基因进行研究,是利用合成生物学技术合成上述核苷单糖的关键。在3条核苷单糖合成途径中,因蔗糖合酶途径最短,仅需一步反应就可生成UDP-葡萄糖,而UDP-葡萄糖在其它酶的进一步催化下可以生成多种核苷单糖,在核苷单糖的生物合成途径中处于核心的地位。因此对蔗糖合酶基因进行研究可为最终的利用合成生物学技术制备核苷单糖打下良好的开端。1、蔗糖合酶基因家族的克隆及表达依据虎眼万年青转录组测序得到的数据,通过提取虎眼万年青总mRNA,逆转录得到cDNA.设计引物,利用巢式PCR克隆得到3条蔗糖合酶基因（OcSus）。利用In-Fusion原理设计引物,构建了原核表达载体。通过直接表达或与分子伴侣共表达的形式,实现了OcSus1、OcSus2和OcSus3可溶性表达。2、蔗糖合酶基因家族的功能鉴定依据蔗糖合酶催化可逆反应这一特点,分别从蔗糖合成反应方向及分解反应方向对OcSus1-3功能进行了鉴定。利用硫酸蒽酮法对合成反应方向进行功能鉴定,初步确定OcSus1-3均具有合成蔗糖的功能。对于蔗糖分解方向的反应,我们利用反相离子对色谱进行检测。并进一步通过质谱及反应产物与标准品共进样的方式对反应产物进行进一步确认,确定了OcSus1-3具有分解反应的功能。综上,OcSus1-3均具有蔗糖合酶功能。3、蔗糖合酶基因家族分解反应底物偏好性研究利用OcSus1、OcSus2和OcSus3分别对蔗糖和ADP、TDP、GDP、CDP、UDP进行催化,研究三者催化分解反应的底物偏好性。结果发现,三者均可对UDP进行催化,此外OcSus1还可对TDP进行催化,但是反应效率低于以蔗糖和UDP为底物的反应效率。4、蔗糖合酶基因家族分解反应酶学性质研究OcSus1-3催化蔗糖分解反应的最适温度,最适pH不尽相同。其中,OcSus1和OcSus3催化蔗糖分解反应的最适温度均为50℃,而OcSus2为37℃。对于催化蔗糖分解反应的最适pH, OcSu s1和OcSus2均为7.0,而OcSus3为5.0。此外,我们还测定了不同浓度二价金属离子对OcSus1-3催化蔗糖分解反应的影响,除Ca2+对三者具有一定的促进作用外,其余二价金属离子均产生了一定的抑制作用。我们还对OcSus1-3催化蔗糖分解方向的酶促动力学参数进行了测定。结果表明,OcSus1、OcSus2和OcSus3勺UDP的Km值均低于蔗糖的Km值,即三者对UDP的亲和力均高于蔗糖。此外OcSus2在三者之中对UDP的亲和力最高,而OcSus1则是在三者之中对蔗糖的亲和力最高的,并且OcSus1的Vmax最高,说明其在三者中的催化效率较高。5、蔗糖合酶基因家族的表达模式研究利用RT-qPCR的方法,通过检测OcSus1-3在O. caudatum不同组织中的表达水平,研究了OcSusl-3的表达模式,从而进一步推断三者在O. caudatum可能具有的生理功能。研究结果表明,OcSus1和OcSus2可能负责O. caudatum中OCAP-2-1, OCAP-2-2, OCAP-3-1和OCAP-3-3这类含葡萄糖的多糖的生物合成;OcSus3则可能在植物生长发育过程中发挥着一定的作用。

关键词：虎眼万年青核苷单糖蔗糖合酶功能鉴定

虎眼万年青对人非小细胞肺癌H1299细胞增殖与凋亡的影响及机制研究

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虎眼万年青对人非小细胞肺癌H1299细胞增殖与凋亡的影响及机制研究

作者：王瑜延边大学

学位级别：硕士

目的虎眼万年青是一种天然中草药植物,其多种化学成分已被证实具有强效抗癌活性,探讨虎眼万年青鳞茎及叶醇提物对人非小细胞肺癌H1299细胞增殖抑制、凋亡作用及机制。方法应用MTT法测定不同浓度、不同时间段虎眼万年青鳞茎及叶醇提物对... 详细信息

目的虎眼万年青是一种天然中草药植物,其多种化学成分已被证实具有强效抗癌活性,探讨虎眼万年青鳞茎及叶醇提物对人非小细胞肺癌H1299细胞增殖抑制、凋亡作用及机制。方法应用MTT法测定不同浓度、不同时间段虎眼万年青鳞茎及叶醇提物对人肺腺癌H1299细胞株的增殖抑制作用;倒置显微镜观察肺癌H1299细胞形态变化,荧光显微镜观察H1299细胞凋亡变化;流式细胞术观察虎眼万年青醇提物对H1299细胞的凋亡诱导作用;Western Blot检测经虎眼万年青醇提物处理后H1299细胞凋亡相关蛋白（Bcl-2、Bax、Bad蛋白）的表达情况;实时荧光定量法（RT-PCR）检测经虎眼万年青醇提物处理后H1299细胞凋亡相关基因（Bcl-2、Bax、Bad）的表达情况。结果MTT结果显示,虎眼万年青鳞茎及叶醇提物作用于人肺腺癌H1299细胞后,48h及72h浓度为0.5、1、2、5、10mg/mL时细胞活性与空白对照组相比明显降低,且差异具有统计学意义（P＜0.05、P＜0.01）;溶媒组（DMSO＜0.1%）与空白对照组相比,差异无统计学意义（P＞0.05）。倒置显微镜显示加药组细胞生长明显受抑制,细胞形态发生改变;荧光显微镜及流式细胞术显示,虎眼万年青鳞茎及叶醇提物正丁醇相可促进H1299细胞凋亡;Western Blot结果显示经虎眼万年青醇提物处理后H1299细胞中Bcl-2蛋白表达下降、Bax蛋白无明显变化、Bad蛋白表达升高,Bax/Bcl-2比值升高;实时荧光定量法（RT-PCR）检测结果显示经虎眼万年青处理后H1299细胞中Bcl-2 mRNA表达下降、Bax mRNA无明显变化、Bad mRNA表达升高,Bax/Bcl-2比值升高。结论1.体外实验表明,虎眼万年青叶及鳞茎醇提物均可抑制人非小细胞肺癌H1299细胞增殖及促进凋亡,且具有浓度依赖性;2.Bcl-2家族部分基因及蛋白共同参与虎眼万年青叶及鳞茎醇提物诱导H1299细胞凋亡的过程。

关键词：虎眼万年青肺癌凋亡 Bcl-2 Bad Bax

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虎眼万年青单萜内酯新成分的分离及结构鉴定

高等学校化学学报 2005年第10期26卷 1817-1819页

作者：白进发刘志强王淑敏宋凤瑞刘淑莹中国科学院长春应用化学研究所新药研究实验室

对虎眼万年青氯仿提取物进行柱层析分离,得到一种单萜内酯(Loliolide)化合物(6-羟基-4,4,7 a-三甲基-5,6,7,7 a-四氢-4H-苯并呋喃-2-酮),用红外光谱和核磁共振波谱确定了该化合物的结构,并用电喷雾多级串联质谱对化合物的裂解机理进行... 详细信息

对虎眼万年青氯仿提取物进行柱层析分离,得到一种单萜内酯(Loliolide)化合物(6-羟基-4,4,7 a-三甲基-5,6,7,7 a-四氢-4H-苯并呋喃-2-酮),用红外光谱和核磁共振波谱确定了该化合物的结构,并用电喷雾多级串联质谱对化合物的裂解机理进行了研究.通过比旋光度和核磁共振氢谱确定了化合物的立体构型.

关键词：虎眼万年青单萜内酯对映异构体

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虎眼万年青挥发性成分的分析

鞍山师范学院学报 2021年第6期23卷 45-48页

作者：回瑞华侯冬岩李铁纯刁全平鞍山师范学院化学与生命科学学院辽宁鞍山114007

采用顶空固相微萃取法提取虎眼万年青根、茎和叶的挥发性化学成分,用气相色谱-质谱法分析鉴定其挥发性化学成分,通过面积归一化法得出各成分的质量分数.从虎眼万年青的根中鉴定出12种挥发性化学组分,总检出率为91.53%,其中,醛类化合物5... 详细信息

采用顶空固相微萃取法提取虎眼万年青根、茎和叶的挥发性化学成分,用气相色谱-质谱法分析鉴定其挥发性化学成分,通过面积归一化法得出各成分的质量分数.从虎眼万年青的根中鉴定出12种挥发性化学组分,总检出率为91.53%,其中,醛类化合物5种占27.95%,1-己醇占1.71%,吡啶占11.90%,2-苯基呋喃占5.29%,甲酸辛酯占2.04%,乙醛-O-甲基肟占13.40%,己醛-O-甲基肟占22.4%,4-硝基-4′-氯联苯含硫化合物占6.84%;从虎眼万年青的茎中鉴定出9种挥发性化学组分,总检出率为89.95%,其中,醛类化合物6种占34.76%,2-己烯-1-醇占41.80%,1,3,5,7-环辛四烯占3.59%,双丁酰吗啡占9.80%;从虎眼万年青的叶中鉴定出9种挥发性化学组分,总检出率为91.92%,其中,醛类化合物5种占33.78%,2-己烯-1-醇占35.40%,苯乙烯占4.040%,4-(1-甲丙基)苯酚占13.20%,4-硝基-4′-氯联苯含硫化合物占5.50%.虎眼万年青根、茎和叶挥发性化学成分中醛类化合物质量分数均较高.

关键词：虎眼万年青挥发性化学成分顶空固相微萃取气相色谱-质谱联用

虎眼万年青中苯丙氨酸解氨酶家族的鉴定和突变研究

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虎眼万年青中苯丙氨酸解氨酶家族的鉴定和突变研究

作者：王志标北京协和医学院

学位级别：硕士

天然产物在药物研究中占有极重要的地位,应用合成生物学技术获得稀缺有效的天然产物是药物研发的新领域。如何获得高表达,高效催化的功能基因是合成生物学研究的基础工作。本论文研究涉及OSW-1合成相关基因的获得和改造。 OSW-1是一... 详细信息

天然产物在药物研究中占有极重要的地位,应用合成生物学技术获得稀缺有效的天然产物是药物研发的新领域。如何获得高表达,高效催化的功能基因是合成生物学研究的基础工作。本论文研究涉及OSW-1合成相关基因的获得和改造。 OSW-1是一种从虎眼万年青（Ornithogalum saundersiae）中分离得到的甾体皂苷,研究显示其有很强的抗肿瘤活性。构效关系研究显示OSW-1若干基团中,对甲氧基苯甲酰基（MBz）同活性密切相关。从生源角度考虑MBz的合成是通过众所周知的苯丙烷代谢途径,但迄今为止虎眼万年青中该途径相关酶的研究还相对缺失;对该途径中的关键酶苯丙氨酸解氨酶（PAL, EC4.***.1.24）的研究还未见报道;因此对虎眼万年青中PAL的鉴定对进一步解析OSW-1的生物合成途径显得尤为重要。野生型重组虎眼万年青PAL蛋白的功能分析以L-Phe和L-Tyr为底物,对原核表达纯化的重组蛋白OsaPAL2和OsaPAL62进行了功能鉴定,产物经波谱解析进行了结构鉴定,同时还研究了它们的催化特性。结果显示,OsaPAL2和OsaPAL62均能催化L-Phe和L-Tyr。无论对哪种底物,这两种蛋白均具有相似的催化最适温度和最适pH值。 Phe突变为His能明显提高野生型重组蛋白对L-Tyr的催化活性野生型重组蛋白虽然对L-Phe和L-Tyr均有催化活性,但对后者的催化能力较低,而对L-Tyr的催化可以缩减生物合成步骤,提高效率,有利于合成生物学应用。为提高对L-Tyr的催化活性,OsaPAL2或OsaPAL62的底物选择性位点134位或128位的Phe被突变为His,突变后TAL活性得到明显提高,结果证实该突变位点确与底物选择性相关。通过氨基酸替换同时提高了对L-Phe和L-Tyr的催化能力通过对植物和酵母来源的PAL序列的比对,发现了活性中心附近三个差异位点。把OsaPAL2和OsaPAL62这三个位点分别替换为酵母中对应的位点,各自得到了3个单突变、1个双突变和1个三突变。活性测试结果显示Thr→Ser的突变能明显提高对底物的亲和力,Gly→Ala的突变能同时提高对L-Phe和L-Tyr的催化能力。这些结果显示这三个位点具有不同的作用,此外还提供了一种能提高PAL催化活性的方法。对OsaPAL2和OsaPAL62的研究有利于揭示OSW-1的生物合成途径,也为将来利用合成生物学技术合成OSW-1提供了元件。

关键词：虎眼万年青 OSW-1 苯丙氨酸解氨酶

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虎眼万年青多糖的分离纯化和抗肿瘤活性研究

中国药学杂志 2011年第21期46卷 1630-1634页

作者：陈瑞战李世哲刘志强董航李元杨思敏长春师范学院化学学院长春130032 中科院长春应用化学研究所长春130022

目的从虎眼万年青中提取、分离水溶性多糖,初步研究其特征和抗肿瘤活性。方法采用热水提取,乙醇沉淀,Sevag法脱蛋白,DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换柱色谱和Sephadex G-75凝胶过滤柱色谱分离纯化,得到虎眼万年青均一多糖OCAP-2-2。... 详细信息

目的从虎眼万年青中提取、分离水溶性多糖,初步研究其特征和抗肿瘤活性。方法采用热水提取,乙醇沉淀,Sevag法脱蛋白,DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换柱色谱和Sephadex G-75凝胶过滤柱色谱分离纯化,得到虎眼万年青均一多糖OCAP-2-2。毛细管区带电泳法(CZE)分析单糖组成;采用高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)测定多糖纯度和相对分子质量;动物移植性实体瘤的瘤重实验法研究对小鼠S180肉瘤的抑瘤作用,采用细胞体外培养技术,MTT法检测对人白血病细胞株K562细胞的增殖抑制作用。结果经过分离纯化得到的均一多糖组分OCAP-2-2主要由葡萄糖、木糖、甘露糖、半乳糖等4种单糖组成,其相对分子质量之比为2.16∶1.26:0.88∶1.00,平均相对分子质量9.84×104,总糖含量为92.3%,总糖醛酸含量为6.21%,蛋白质含量为3.68%;在0.1～100μg.mL-1内与荷瘤对照组相比,OCAP-2-2对小鼠S180肉瘤有显著的抑制活性,其中多糖浓度为100μg.mL-1时抑瘤率达(53.16±4.23)%(P<0.001);OCAP-2-2对K562细胞有明显的增殖抑制作用(P<0.01),在多糖浓度为0.10μg.mL-1时,增殖抑制率最高为(39.83±7.31)%(P<0.01)。结论 OCAP-2-2具有很高的抗肿瘤活性,可以探索作为一种潜在的天然抗肿瘤药物。

关键词：虎眼万年青多糖纯化抗肿瘤活性

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虎眼万年青总皂苷提取及其抗肿瘤活性研究

虎眼万年青总皂苷提取及其抗肿瘤活性研究

作者：邓元荣福建农林大学

学位级别：硕士

虎眼万年青（Ornithogalum thyrsoides）为百合科（Liliaceae）虎眼万年青属（Ornithogalum）多年生草本植物,原产于非洲南部,在我国北方多地有种植和栽培,皂苷类化合物是最主要的化学成分,也是其抗肿瘤活性的主要药效物质基础。虎眼万... 详细信息

虎眼万年青（Ornithogalum thyrsoides）为百合科（Liliaceae）虎眼万年青属（Ornithogalum）多年生草本植物,原产于非洲南部,在我国北方多地有种植和栽培,皂苷类化合物是最主要的化学成分,也是其抗肿瘤活性的主要药效物质基础。虎眼万年青总皂苷药效显著,通过多靶点、多通道用于治疗肝癌、乳腺癌、白血病等研究已经取得一定的成果,且毒副作用小,继续扩大抗癌谱研究,可有效促进其药用价值的开发与利用。肺癌是我国发病率和死亡率居前五位的肿瘤之一,在男性患者中居首位,虽虎眼万年青对癌症研究较多,但对肺癌效应研究不多,有研究发现OSW-1体外对非小细胞肺癌A549细胞IC50很低,预示有很好抗肺癌作用,但未继续深入研究,且OSW-1无法大规模合成,也就限制了其抗癌应用研究和对肺癌机理的研究。有关虎眼万年青总皂苷对肺癌作用尚未见有研究报道,本研究以非洲南部的安哥拉国丰富的虎眼万年青属O.thyrsoides资源为原料,在国内首次从原产地、原种植物中分离提取得总皂苷,以非小细胞肺癌A549细胞为研究对象,考察其体内、体外抗肿瘤活性,初步探明其作用机制,并对总皂苷安全性作出评价。1.采用80%乙醇加热回流提取、石油醚萃取、水相部以D-101大孔吸附柱分离获得总皂苷,最终产品得率为1.02%。采用香草醛-高氯酸显色和紫外分光光度法测定总皂苷含量为37.0%。本方法较采用类同工艺从国内引种植物中提取总皂苷的得率（0.91%）高,表明安哥拉原种虎眼万年青植物O.thyroides中总皂苷含量较高。2.利用MTT法筛选抗肿瘤细胞,发现虎眼万年青总皂苷对非小细胞肺癌细胞株（A549）、人胃癌细胞株（BGC-823）、人结肠癌细胞株（HT-29）和人肝癌细胞株（HepG-2）4种肿瘤细胞均具有较强的抑制活性,其中对A549细胞的抑制增殖活性最强,呈一定的量效关系与时效关系,在7.81～125μg/mL药物浓度范围内呈较好的线性相关,最高抑制率达到91.6%,作用时间以48h为佳,IC50为 22.28μg/mL。3.以非小细胞肺癌A549细胞为研究对象,考察虎眼万年青总皂苷体外抗肿瘤作用。随着给药浓度从15.6μg/mL至125.0μg/mL,A549细胞产生数目减少,胞质回缩、折光性增强、细胞体积缩小等形态学改变;Hoechst荧光染色法观察细胞核形态,发现细胞核染色质出现高度固缩凝集、边缘化,呈典型的凋亡细胞形态特征;流式细胞仪检测到细胞凋亡率也随之增高,由15.53%增大至71.05%,细胞Go/G1期和G2/M期DNA含量降低,S期DNA含量明显增加,细胞周期阻滞在S期。结果表明总皂苷可抑制A549细胞增殖,诱导细胞凋亡,从而有效控制肿瘤的发展。4.小鼠体内移植性非小细胞肺癌A549瘤株,考察虎眼万年青总皂苷体内抗肿瘤作用,结果各剂量组（2.4mg/kg、1.2mg/kg、0.6mg/kg,分别为1/10、1/20和1/40 LD50）抑瘤率均＞30%,最高51.61%,可达到抗肿瘤植物药物抑瘤有效的认可标准,剂量以1.2 mg.kg-1为佳;各脏器指数和免疫血细胞,包括脾脏指数、胸腺指数、LYM计数与百分率、MON计数与百分率、中性分叶百分率均未见明显差异;血细胞指标中HB、WBC和PLT计数升高。结果表明总皂苷对体内A549细胞瘤体内具有直接抑制作用,对免疫器官没有明显的抑制影响,不会产生抗肿瘤药物常见的免疫抑制不良反应。5.采用小鼠腹腔注射急性毒性观察,对虎眼万年青总皂苷安全性作出初步评价,Bliss法测定半数致死量LD50值,结果LD50=23.808mg/kg,动物死亡的时间多在8h～48h内,以脏器散在充血表现为主。首次利用原产地原种虎眼万年青植物资源,扩大总皂苷抗肿瘤谱研究,结果表明总皂苷在体内、体外均对非小细胞肺癌A549细胞具有抑制肿瘤作用,且安全性高,副作用小,对免疫器官没有明显的抑制影响,不会产生抗肿瘤药物的不良反应,为虎眼万年青总皂苷治疗肺癌及抗癌新药研发以及后续药效与毒理研究提供一定的理论与实验依据。

关键词：虎眼万年青总皂苷非小细胞肺癌A549细胞抗肿瘤 LD50

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虎眼万年青提取物降血糖作用的研究

虎眼万年青提取物降血糖作用的研究

作者：曹海玲黑龙江中医药大学

学位级别：硕士

随着社会的发展,生活水平的提高,糖尿病的发病率也逐渐上升。糖尿病是一种内分泌疾病,主要是与机体的胰岛素分泌有关,基本的特征则是血糖升高。目前,糖尿病已经成为一种全球性的疾病,因此急需寻找安全、有效、经济的预防和治疗糖尿病的... 详细信息

随着社会的发展,生活水平的提高,糖尿病的发病率也逐渐上升。糖尿病是一种内分泌疾病,主要是与机体的胰岛素分泌有关,基本的特征则是血糖升高。目前,糖尿病已经成为一种全球性的疾病,因此急需寻找安全、有效、经济的预防和治疗糖尿病的药物。虎眼万年青(Ornithogalum caudatum Ait)为百合科植物,最早作为观赏型植物引入我国,之后发现有极高的药用价值,在抗炎消毒以及抗肿瘤方面的效果很好。目前,对虎眼万年青在化学成分方面研究很多,发现虎眼万年青含大量的皂苷和多糖类。研究表明许多具有降糖作用的中药,与其含有的皂苷或多糖成分有关。为此,对含皂苷和多糖类成分较高的虎眼万年青进行降糖作用研究,以期其对糖尿病有治疗或辅助治疗作用。本论文采用四氧嘧啶致糖尿病小鼠实验,系统地对虎眼万年青提取物以高、中、低三种不同剂量对此模型小鼠灌胃给药,通过测定小鼠的血糖、总胆固醇、甘油三酯数值的变化来研究虎眼万年青的降血糖作用。结果表明,虎眼万年青提取物能显著降低四氧嘧啶致糖尿病小鼠的血糖水平;不同剂量组对糖尿病小鼠总胆固醇、甘油三酯有一定的控制作用,而且呈剂量依赖性。依据结果对虎眼万年青的提取物进一步分离,按极性大小用系统有机溶剂正丁醇、乙酸乙酯、氯仿萃取虎眼万年青提取物,分离得到四个极性不同的部位,分别给四氧嘧啶致糖尿病模型小鼠灌胃给药,通过测定小鼠的血糖、总胆固醇、甘油三酯数值的变化来筛选出降血糖作用的有效部位。实验结果表明,虎眼万年青提取物正丁醇相能有效降低四氧嘧啶致糖尿病小鼠血糖,水相其次,氯仿相、乙酸乙酯相不能降低四氧嘧啶致糖尿病小鼠血糖,正丁醇相和水相组对糖尿病小鼠的总胆固醇、甘油三酯有一定的调节作用。本论文对虎眼万年青降血糖药物的开发利用具有重要的理论意义和实际意义,也为寻找更为有效的降血糖天然药物提供新的思路及途径。

关键词：虎眼万年青提取物降血糖